周利+郝慶秀 王升 楊全 康傳志 楊婉珍 郭蘭萍

[摘要]應(yīng)用微波消解ICPMS法測定了20批冬蟲夏草中5種重金屬銅（Cu）、鉛（Pb）、砷（As）、鎘（Cd）、汞（Hg）元素的殘留量，并分析了5種重金屬在冬蟲夏草不同部位的含量。結(jié)果表明，在《中醫(yī)藥中藥材重金屬限量》ISO國際標(biāo)準(zhǔn)下，所有批次樣品中Cu，Pb，Cd，Hg 4種重金屬元素的殘留量均符合要求，且該4種元素在子座中的含量均高于蟲體中的含量；重金屬As的超標(biāo)率為8824%，樣品中As主要集中于蟲體部分，蟲體中As的含量是子座的7～12倍。該研究闡明了冬蟲夏草中5種重金屬的分布規(guī)律，同時(shí)分析了現(xiàn)行冬蟲夏草重金屬砷限量標(biāo)準(zhǔn)所存在的問題，并提出了相關(guān)建議，希望能為冬蟲夏草重金屬砷的限量標(biāo)準(zhǔn)制定提供參考。

[關(guān)鍵詞]冬蟲夏草； 微波消解ICPMS； 重金屬； 分布

Study on distribution of five heavy metal elements in different parts of

Cordyceps sinensis by microwave digestion ICPMS

ZHOU Li1，2， HAO Qingxiu2， WANG Sheng2， YANG Quan1， KANG Chuanzhi2， YANG Wanzhen2， GUO Lanping1，2*

（1College of Traditional Chinese Medicine， Guangdong Pharmaceutical University， Guangzhou 510006， China；

2State Key Laboratory Breeding Base of Daodi Herbs， National Resource Center for Chinese Materia Medica，

China Academy of Chinese Medical Sciences， Beijing 100700， China）

[Abstract]The contents of five heavy metals （Cu， Pb， As， Cd， Hg） in 17 batches of Cordyceps sinensis were determined by microwave digestionICPMS， and their distribution in C sinensis were analyzed The results showed that the contents of Cu， Pb， Cd and Hg in all batches were in accordance with the international standards of Chinese MedicineChinese Herbal Medicine Heavy Metal Limit， with their contents in the stroma higher than that in the caterpillar body， and the excess rate of As， which mainly concentrated in the caterpillar body part of C sinensis， was 8824%， as the content of As in the caterpillar body was 7 to 12 fold of that in the stroma In this study， the distribution of five heavy metals in C sinensis was clarified， and the existing problems of arsenic limit of heavy metal in C sinensis were analyzed， and some suggestions were put forward It is hoped that the reference standard can be provided for the limited standard of arsenic in C sinensis.

[Key words]Cordyceps sinensis； microwave digestionICPMS； heavy metals； distribution

冬蟲夏草系麥角菌科真菌冬蟲夏草菌Cordyceps sinensis （BerK） Sacc 寄生在蝙蝠蛾科昆蟲幼蟲上的子座和幼蟲尸體的干燥復(fù)合體[1]，是我國特產(chǎn)傳統(tǒng)名貴中藥。研究表明，冬蟲夏草主要化學(xué)成分為核苷類、氨基酸類、糖醇和甾醇類等[24]。主要的藥理作用有調(diào)節(jié)機(jī)體免疫力、抗腫瘤以及保護(hù)神經(jīng)系統(tǒng)等[59]。近年來，隨著人民生活水平的提高及保健意識的增強(qiáng)，冬蟲夏草產(chǎn)品受到了人們的追捧，價(jià)格也一路走高，與此同時(shí)，對冬蟲夏草有效成分、藥理藥效和重金屬污染等相關(guān)方面的研究屢見不鮮[1013]。

然而，已有的關(guān)于冬蟲夏草重金屬的研究多是探討了其測定方法及含量，對其的分布研究卻鮮有報(bào)道。分析冬蟲夏草中重金屬在蟲體和子座中含量的分布規(guī)律，是了解其重金屬超標(biāo)原因的基礎(chǔ)，對冬蟲夏草重金屬標(biāo)準(zhǔn)的制定具有重要意義。故本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用《中國藥典》2015年版收錄方法微波消解ICPMS法對冬蟲夏草各部位中重金屬的殘留量進(jìn)行了測定，以闡明冬蟲夏草各部位中重金屬的分布情況，以期為冬蟲夏草重金屬的研究及產(chǎn)品的研發(fā)提供參考。

1材料

11儀器電子天平（梅特勒托利多公司）；超純水系統(tǒng)（賽默飛世爾科技有限公司）；電感耦合等離子體質(zhì)譜儀（ICAP QMS 賽默飛世爾科技有限公司）；聚四氟乙烯微波消解罐、CEM Mars 6微波消解儀、多孔電熱板（美國培安公司）。

12標(biāo)準(zhǔn)溶液和試劑砷、銅、鉛、鎘、鉻、汞、鍺、銠、鉍、銦標(biāo)準(zhǔn)溶液（1 g·L-1）、胡蘿卜標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（GBW10047），購置于中國計(jì)量科學(xué)研究院；硝酸，購置于默克公司；雙氧水（優(yōu)級純），購置于國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。實(shí)驗(yàn)用水來至于賽默飛超純水系統(tǒng)（電阻率為182 MΩ·cm-1）。

13試藥本實(shí)驗(yàn)共收集各產(chǎn)地冬蟲夏草樣品20批，分別編號為1～20號，其中1～8號及18～20號樣品為市售，9～11號樣品采至青海玉樹地區(qū)，12～14號樣品采至西藏果洛地區(qū)，15～17號樣品采至西藏那曲地區(qū)。樣品采集后，用超純水洗凈泥沙，置烘箱45 ℃干燥后于4 ℃冰箱保存。

2方法

21樣品的制備取13中1～17號冬蟲夏草樣品5 g，置于研缽研磨，粉碎后過50目篩，備用。另取18～20號樣品20 g，將樣品分為蟲體部分（編號為C）和子座部分（編號為S），分別編號為C1，S1，C2，S2，C3，S3。同法研磨過篩后，保存于4 ℃冰箱，備用。

22標(biāo)準(zhǔn)工作曲線及內(nèi)標(biāo)溶液的制備精密吸取各標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，用5% HNO3稀釋，配制成以下相應(yīng)元素質(zhì)量濃度的混合系列溶液，銅：0，1，5，10，20，50，100，200 μg·L-1；砷、鎘、鉛：00，01，05，10，20，50，100，200 μg·L-1；另取汞元素的單標(biāo)儲(chǔ)備液，配制成以下梯度濃度的汞標(biāo)曲溶液，汞：000，005，010，050，100，500 μg·L-1。另精密吸取銠（102Rh），鉍（209Bi），銦（115In），鍺（72Ge）內(nèi)標(biāo)溶液適量，用5% HNO3稀釋成質(zhì)量濃度為10 μg·L-1的混合溶液，即得內(nèi)標(biāo)溶液。

23樣品的消解取冬蟲夏草粉末約02 g，精密稱定，置聚四氟乙烯微波消解罐中，加入硝酸5 mL，預(yù)消解過夜，再加入雙氧水1 mL，蓋緊罐蓋置于微波消解儀中并按微波消解程序進(jìn)行消解，見表1。消解完成后，待消解液冷卻至60 ℃以下，取出消解罐，放冷，將消解液轉(zhuǎn)50 mL量瓶中，用少量超純水洗滌消解罐3 次，洗滌液合并于容量瓶中，用超純水定容至刻度。搖勻，過045 μm濾膜，待測。按相同方法做空白對照。消解液使用 ICPMS 進(jìn)行測定。在消解藥材的同時(shí)，采用國家一級標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)胡蘿卜（GBW10047）作為全程質(zhì)控，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)與待測樣品按同樣的方法進(jìn)行處理。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中各重金屬測定值在參考值范圍內(nèi)，表明該消解方法可靠，可用于待測樣品的消解，見表2。

32冬蟲夏草各部位中重金屬的含量本研究測定的冬蟲夏草中，Cu，Pb，Cd，Hg在子座中的含量均高于其在蟲體中的含量，其中，Cu，Hg在蟲體和子座中的含量較接近，但3號樣品中，子座中Cu的含量大概是蟲體的3倍；Pb，Cd在子座中的含量明顯高于蟲體，約為蟲體含量的2～3倍；冬蟲夏草中As則主要集中于蟲體部分，蟲體中的As為1174～1359 mg·kg-1，子座中As為110～166 mg·kg-1，蟲體中As含量為子座含量的7～12倍，見圖1。子座中As的含量符合《中醫(yī)藥中藥材重金屬限量》ISO國際標(biāo)準(zhǔn)和《藥用植物及制劑進(jìn)出口綠色行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》要求。

對蟲體和子座2個(gè)部位所含重金屬的含量進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)，結(jié)果為：PCu=0275，PPb=0145，PAs=0001，PCd=0029，PHg=0171。結(jié)果表明，冬蟲夏草中Cu，Pb，Cd，Hg的含量在子座和蟲體中沒有顯著性差異，而As在子座和蟲體中含量的差異極為顯著。

4討論

本研究中17批冬蟲夏草樣品依據(jù)《中醫(yī)藥中藥材重金屬限量》ISO國際標(biāo)準(zhǔn)，重金屬鉛，鎘，汞的含量均符合要求；依據(jù)《藥用植物及制劑進(jìn)出口綠色行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》，除鉛和汞各有一批樣品含量超標(biāo)外，其余樣品重金屬銅，鉛，鎘，汞含量均符合要求。且此4種重金屬在子座中的含量高于在蟲體中的含量，此研究結(jié)果與汪瓊等[14]研究結(jié)果基本一致。

近年來有關(guān)冬蟲夏草砷超標(biāo)的報(bào)道層出不窮，本研究的17批冬蟲夏草，根據(jù)《中醫(yī)藥中草藥重金屬》國際標(biāo)準(zhǔn)，砷超標(biāo)率為8824%；根據(jù)《藥用植物及制劑進(jìn)出口綠色行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》，砷超標(biāo)率為100%。冬蟲夏草中砷分布分析顯示，其砷主要集中在蟲體部分，蟲體部分的砷含量超標(biāo)率為100%，而子座中砷的含量符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。

大量研究表明，植物中砷含量及形態(tài)與動(dòng)物和菌類有極大差別，張文德等[15]對烏賊，大蝦，沙丁魚等多種海洋動(dòng)物中砷的形態(tài)進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)海洋動(dòng)物中總砷含量普遍較高，但主要以有機(jī)砷為主，無機(jī)砷的含量極低，約占總砷含量的1%～30%。郝春莉等[16]分析了15種中藥材中砷的形態(tài)，發(fā)現(xiàn)植物類中藥中無機(jī)的砷的含量明顯高于動(dòng)物藥，且主要以有毒的As（V）形態(tài)存在。林燕奎等[17]在分析多種食用菌重金屬情況后發(fā)現(xiàn)，食用菌對重金屬具有較強(qiáng)的富集能力，一些食用菌樣品中雖然總砷含量很高，但有毒形態(tài)的無機(jī)砷含量卻較低。在植物，動(dòng)物和菌類砷含量及形態(tài)存在明顯差異，且砷的無機(jī)形態(tài)毒性遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于有機(jī)形態(tài)毒性的情況下，將適用于植物類藥材的砷標(biāo)準(zhǔn)限量作為冬蟲夏草中砷的標(biāo)準(zhǔn)限量顯然不合理。臺(tái)灣地區(qū)自2016年10月1日起已不再對海帶，海藻，冬蟲夏草等特定藥材做砷限量規(guī)定。

綜上所述，冬蟲夏草重金屬限量標(biāo)準(zhǔn)有待修正。參考真菌類，動(dòng)物類食品或藥品制定冬蟲夏草中砷限量標(biāo)準(zhǔn)是冬蟲夏草砷標(biāo)準(zhǔn)限量制定的關(guān)鍵。由于冬蟲夏草生命周期的特殊性，導(dǎo)致相關(guān)砷富集實(shí)驗(yàn)研究很難開展。在蟲草人工繁育取得重要進(jìn)展之前，加強(qiáng)對冬蟲夏草中砷的形態(tài)研究，分析有機(jī)砷和無機(jī)砷的含量和所占比例，利用國際公認(rèn)的風(fēng)險(xiǎn)暴露模型，科學(xué)地評估冬蟲夏草中砷對人體健康的影響，是制定其砷限量標(biāo)準(zhǔn)的重要手段。此外，冬蟲夏草砷殘留普遍超標(biāo)的事實(shí)，提示砷對冬蟲夏草的生長是否存在特殊作用還有待研究。

[參考文獻(xiàn)]

[1]中國藥典一部[S] 2015.

[2]閆景坤 抗氧化新型冬蟲夏草胞外多糖的制備，結(jié)構(gòu)與溶液特征研究[D] 廣州：華南理工大學(xué)， 2010.

[3]徐文豪， 薛智， 馬建民 冬蟲夏草的水溶性成分——核苷類化合物的研究[J]. 中國中藥雜志， 1988， 13（4）：34.

[4]王征， 劉建利 冬蟲夏草化學(xué)成分研究進(jìn)展[J]. 中草藥， 2009（7）：1157.

[5]王林萍， 余意， 馮成強(qiáng) 冬蟲夏草活性成分及藥理作用研究進(jìn)展[J]. 中國中醫(yī)藥信息雜志， 2014， 21（7）：132.

[6]錢正明， 李文慶， 孫敏甜，等 冬蟲夏草化學(xué)成分分析[J]. 菌物學(xué)報(bào)， 2016， 35（4）：476.

[7]石巖， 王鋼力， 秦文杰，等 冬蟲夏草的化學(xué)成分綜述[J]. 中醫(yī)研究， 2006， 19（7）：54.

[8]Guo J Y， Han C C， Liu Y M A contemporary treatment approach to both diabetes and depression by Cordyceps sinensis， rich in Vanadium[J]. EvidBased Compl Alt， 2009， 7（3）：387.

[9]Zheng L P， Gao L W， Zhou J Q， et al. Antioxidant activity of aqueous extract of a Tolypocladium sp fungus isolated from wild Cordyceps sinensis[J]. Afr J Biotechnol， 2008， 7（17）：3004.

[10]金鵬飛， 吳學(xué)軍， 鄒定，等 HPLCICPMS研究炮制對中藥砷形態(tài)的影響[J]. 光譜學(xué)與光譜分析， 2011， 31（3）：816.

[11]卑占宇， 羅曉冰， 李銀保，等 微波消解火焰原子吸收光譜法測定冬蟲夏草中的微量元素[J]. 時(shí)珍國醫(yī)國藥， 2008， 26（3）：391.

[12]陳輝 微波消解ICPMS測定冬蟲夏草中銅，鉛，砷和鎘的含量[J]. 光譜實(shí)驗(yàn)室， 2010， 27（1）：309.

[13]董彩虹， 李文佳， 李增智，等 我國蟲草產(chǎn)業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀，問題及展望——蟲草產(chǎn)業(yè)發(fā)展金湖宣言[J]. 菌物學(xué)報(bào)， 2016， 35（1）：1.

[14]汪瓊， 徐增萊， 呂曄 微波消解ICPMS法測定冬蟲夏草中30種無機(jī)元素的含量[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2013， 41（2）：269.

[15]張文德 海產(chǎn)品中砷的形態(tài)分析現(xiàn)狀[J]. 中國食品衛(wèi)生雜志， 2007， 19（4）：345.

[16]郝春莉， 王庚， 余晶晶，等 15種中藥材中砷的形態(tài)分析[J]. 分析測試學(xué)報(bào)， 2009， 28（8）：918.

[17]林燕奎， 王丙濤， 顏治，等 總砷超標(biāo)食用菌樣品中砷形態(tài)分布研究[J]. 分析儀器， 2012（1）：91

[責(zé)任編輯呂冬梅]