趙旭，張寧，劉國良，周艷麗，代麗娟

(黑龍江中醫(yī)藥大學，黑龍江 哈爾濱 150040)

穿山龍?zhí)崛∥锸硎氃碥諏NBS誘導的IBS大鼠VIP表達的作用

趙旭，張寧，劉國良，周艷麗，代麗娟*

(黑龍江中醫(yī)藥大學，黑龍江 哈爾濱 150040)

目的：探討血管活性腸肽在三硝基苯磺酸誘導的腸易激綜合征大鼠中的表達量及中藥穿山龍?zhí)崛∥锸硎氃碥盏母深A作用。方法：TNBS誘導大鼠腸易激綜合征模型，第 2、7、14和28天對大鼠體質量、髓過氧化物酶活力、疼痛閾值、VIP含量進行測定。結果：TNBS誘導的腸易激綜合征大鼠體質量降低，髓過氧化物酶活力增加，疼痛閾值降低，模型大鼠中性粒細胞內炎癥標記物過氧化物酶的表達比正常大鼠明顯升高，證實TNBS處理后誘導了大鼠的炎癥，TNBS處理大鼠后血漿VIP濃度比對照組顯著增加(P<0.05)，穿山龍?zhí)崛∥锸硎氃碥仗幚砗箫@著下調。結論：VIP表達的改變在腸易激綜合癥中可能起著重要作用，穿山龍?zhí)崛∥镏兴幨硎氃碥諏NBS誘導的IBS大鼠具有治療作用。

穿山龍；腸易激綜合征；血管活性腸肽；三硝基苯磺酸；薯蕷皂苷

腸易激綜合征(IBS)是一種病因不明的慢性胃腸道紊亂性疾病，其特點是腹痛和排便改變[1]。在中國其患病率為成年人中10%～20%，盡管這種疾病的發(fā)病率相對較高[2]，但其確切的病理仍然未知，闡明其發(fā)病機制是現在面臨的一個挑戰(zhàn)。

現有文獻表明，腸易激綜合征是多因素疾病[3-4]。細菌、病毒、寄生蟲感染導致的炎癥可能改變胃腸蠕動和內臟敏感性而在IBS發(fā)病中發(fā)揮著重要作用[5-7]。感染腸易激綜合征患者中的36%癥狀將持續(xù)8～10年，這些患有腸易激綜合征患者表現出各種癥狀；排便被視為一個主要的胃腸道癥狀，但最痛苦的相關癥狀是腹痛[8]。當腸易激綜合征發(fā)生時，腹脹、腹瀉、腹痛等癥狀通常在首次發(fā)病后數周內消失，但炎癥消失后內臟高敏感性仍可持續(xù)存在[9]。此外，與普通胃腸病相比，IBS患者除了胃腸道癥狀外還有消化系統(tǒng)癥狀，IBS患者內臟過敏增加，皮膚對熱刺激敏感[10]，很明顯，患有腸易激綜合征的患者有著更為復雜的癥狀。

穿山龍(RhizomaDioscoreaeNipponicae)為薯蕷科薯蕷屬植物穿龍薯蕷的干燥根莖，是黑龍江省道地的中藥材，其味甘、苦，性溫，歸肝、腎、肺經[11]。其功效為舒筋通絡、祛風除濕、活血止痛；臨床主要用于風濕痹病、關節(jié)腫脹、疼痛麻木、咳嗽氣喘等[12]。我們前期研究結果表明其具有抗炎、鎮(zhèn)痛作用，對腸易激綜合征具有良好的治療作用[13-14]，但其起作用有效成分研究尚未清楚，本實驗在前期基礎之上，應用穿山龍主要成分薯蕷皂苷作用于腹瀉型腸易激綜合征大鼠探討其作用機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

雄性SD大鼠(300～350 g)60只，隨機分為3組，每組20只，保持在12 h光/暗周期,標準嚙齒動物食物和水。所有試劑都是購自Sigma公司。

1.2 造模

三硝基苯磺酸誘導腹瀉型腸易激綜合征模型，3%異氟烷氧氣麻醉大鼠，50%乙醇溶解TNBS，取1 mL(15 mg/mL)，使用無菌聚乙烯管肛門插入直腸7 cm處灌腸給藥。在TNBS處理2、7、14、21天進行檢測。

1.3 造模前后體質量變化

大鼠開始造模后2、7、14、21天稱體質量，計算每組體質量變化。

1.4 疼痛閾值檢測

第7、14、21 、28天3%異氟烷麻醉大鼠后進行直腸擴張，檢測疼痛閾值。

1.5 髓過氧化物酶活力檢測

第2、7、14、28天沿著腸系膜邊境切開取大鼠結腸組織100～200 mg，液氮中冷凍保存，供測定結腸組織MPO之用。檢測時，按試劑盒說明書操作。

1.6 VIP含量測定

血漿VIP檢測，具體步驟按試劑盒說明操作。

1.7 數據統(tǒng)計

數據處理統(tǒng)計分析應用SPSS23.0軟件，組間比較應用單因素方差分析，組間多重比較應用LSD-t檢驗；當P<0.05時，差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 體質量相對增長率變化

TNBS誘導大鼠結腸炎模型有幾個指標，其中之一是處理后體質量變化。與正常組相比，TNBS組第一次灌腸處理大鼠2～7天后體質量降低(13.7±3.2)g ，14天后體質量增加，21天后正常組和TNBS 組體質量無明顯差異,見表1。

表1 TNBS造模后大鼠體質量變化比較(g)

注：與正常組相比，*P<0.05

2.2 疼痛閾值與MPO活力檢測

與正常組相比，在第7天14天和21天疼痛閾值降低(P<0.05)，28天疼痛閾值無明顯差異(P>0.05)。MPO是一個炎癥的標志物，是中性粒細胞的功能標志和激活標志，與正常組相比，TNBS處理大鼠2、7、14和28 d后MPO的水平活性顯著升高(P<0.05),見表2。

表2 疼痛閾值(mmHg)與MPO活力(μg)測定

注：與正常組相比，*P<0.05

2.3 VIP含量測定

與正常組相比，TNBS處理2 h后VIP含量顯著增加，14天后下降(P<0.05)。與TNBS組相比，薯蕷皂苷組VIP含量顯著下調(P<0.05),見表3。

表3 VIP含量測定(ng/mL)

注：與正常組相比，*P<0.05;與TNBS組相比，#P<0.05

3 討論

腸易激綜合征是以持續(xù)或間歇發(fā)作的腹痛、腹瀉、腹脹等消化道癥狀為主的腸功能紊亂性疾病。分為腹瀉型、便秘型、混合型、不確定型4種，我國腹瀉型腸易激綜合征最常見，約占74.1%[15]，因此建立一個良好的腹瀉型腸易激綜合征動物模型可以促進對該疾病的深入研究，模型的建立是否成功需經過相應指標的評價，目前現有的腸易激綜合征模型評價指標大體分為內臟敏感性、腸道動力學、糞便情況及病理組織學四類。其中，內臟敏感性增加和腸道動力學改變是核心的評價指標，我們的研究發(fā)現三硝基苯磺酸造模后內臟敏感性，MPO含量增加證明造模成功。然而TNBS-誘導的IBS模型并非沒有的局限性，一是大多數胃腸道標志物自發(fā)的缺失。另外，這種模式的再現性高度依賴TNBS劑量使用[16]。

穿山龍資源豐富，在我國已有數千年的應用歷史，具有較高的藥用價值。近幾年，現代藥理學研究穿山龍的鎮(zhèn)痛、降糖、抗炎、抗腫瘤、抗氧化等作用[17-18]，其中鎮(zhèn)痛、抗炎藥效作用明顯[19]。我們對腸易激綜合癥造模成功的大鼠研究發(fā)現VIP表達上調，Camilleri M等[20]研究同樣發(fā)現與對照組相比，腹瀉型腸易激綜合征活檢VIP mRNA表達增加，這些發(fā)現說明VIP可能在腸易激綜合癥發(fā)病中起重要的作用[21]。穿山龍?zhí)崛∥锸硎氃碥仗幚砗骎IP降低，說明中藥穿山龍有效成分薯蕷皂苷具有治療腸易激綜合征的療效。

總之，我們的動物實驗數據顯示血管活性腸肽含量的改化可能在慢性胃腸道功能紊亂中發(fā)揮著重要作用。這些數據為更好的理解VIP表達、生理和藥理性質，為有選擇地調節(jié)胃腸功能提供了一個出發(fā)點。通過本研究能夠初步確定薯蕷皂苷對TNBS誘導的IBS大鼠的治療作用，但未能從更多層次和角度進行深入研究，今后仍需進行深入探究。

[1] 李鐵男,王兵,劉影,等.菝葜提取物對腸易激綜合征大鼠血漿SP、CGRP含量的影響[J].中醫(yī)藥學報,2011,39(4):26-28.

[2] 朱慧淵.疏肝健脾法對腸易激綜合征模型大鼠細胞能量代謝的作用機制[J].中醫(yī)藥學報,2014,42(2):36-38.

[3] 王偉貴，石志敏，張禎，等.子午流注針法配合辨證取穴治療腹瀉型腸易激綜合征的臨床研究[J].中醫(yī)藥信息,2016,33(1):80-82.

[4] 陳建林，陳錦鋒，鄧健敏，等.加味痛瀉要方對肝郁脾虛型腸易激綜合征患者血清腦腸肽水平的影響[J].中醫(yī)藥信息,2016,33(4):82-83.

[5] Grover M, Camilleri M, Smith K, et al. On the fiftieth anniversary. Postinfectious irritable bowel syndrome: mechanisms related to pathogens[J]. Neurogastroenterology & Motility,2014,26(2):156.

[6] Ahn J Y, Lee K H, Choi C H, et al. Colonic mucosal immune activity in irritable bowel syndrome: comparison with healthy controls and patients with ulcerative colitis[J].Digestive Diseases and Sciences,2014,59(5):1001-1011.

[7] Kanazawa M, Palsson O S, Thiwan S I, et al. Contributions of pain sensitivity and colonic motility to IBS symptom severity and predominant bowel habits[J].The American journal of gastroenterology,2008,103(10):2550-2561.

[8] Spiegel B M R, Bolus R, Harris L A, et al. Characterizing abdominal pain in IBS: guidance for study inclusion criteria, outcome measurement and clinical practice[J]. Aliment Pharmacol Ther,2010,32(9):1192-1202.

[9] Zhou Q, Price D D, Caudle R M, et al. Visceral and somatic hypersensitivity in a subset of rats following TNBS-induced colitis[J].Pain,2008,134(1-2):9-15.

[10] Mayer E A, Gebhart G F. Basic and clinical aspects of visceral hyperalgesia[J].Gastroenterology,1994,107(1):271-293.

[11] 張寧,于棟華,周琦,等.穿山龍藥理作用的研究進展[J].中國藥房,2015,26(4):547-550.

[12] 姚麗,劉樹民.中藥穿山龍新的藥理作用及其有效部位的實驗研究[J].中華中醫(yī)藥學刊,2010,28(9):1979-1981.

[13] 張賽.腸易激綜合征中西醫(yī)發(fā)病機制研究概況[J].中醫(yī)臨床研究,2014,6(3):48-51.

[14] 趙旭,周艷麗,代麗娟.薯蕷皂苷對IBS-D模型大鼠治療作用研究[J].中醫(yī)藥學報,2017,45(2):22-24.

[15] 金華鋒.試論腸易激綜合征的分期論治[J].中醫(yī)藥學報,2000,28(6):8-9.

[16] Motavallian-Naeini A, Andalib S, Rabbani M, et al. Validation and optimization of experimental colitis induction in rats using 2, 4, 6-trinitrobenzene sulfonic acid[J]. Research in Pharmaceutical Sciences,2012,7(3):159-169.

[17] 粘芙蓉,辛曉林.中藥穿山龍鎮(zhèn)痛實驗研究[J].中華中醫(yī)藥學刊,2009,27(8):1644-1645.

[18] 宋藝君，郭濤，王昌利.穿山龍總皂苷大孔吸附樹脂純化工藝研究[J].中醫(yī)藥信息,2015,32(1):3-6.

[19] 杜虹韋.穿龍薯蕷與盾葉薯蕷研究開發(fā)概況[J].中醫(yī)藥學報,2010,38(3):131-134.

[20] Camilleri M, Carlson P, Acosta A, et al. RNA sequencing shows transcriptomic changes in rectosigmoid mucosa in patients with irritable bowel syndrome-diarrhea: a pilot case-control study[J]. Ajp Gastrointestinal & Liver Physiology,2014,306(12):1089-1098.

[21] Jabari S, Oliveira E C D, Brehmer A, et al. Chagasic megacolon: enteric neurons and related structures[J]. Histochemistry and Cell Biology,2014,142(3):235-244.

The Effect of Dioscin fromRhizomaDioscoreaeNipponicaseon VIP Expression in IBS Rats Induced by TNBS

ZHAO Xu, ZHANG Ning, LIU Guo-liang, ZHOU Yan -Li, DAI Li-Juan

(HeilongjiangUniversityofChineseMedicine,Harbin150040,China)

Objective: To investigate the vasoactive intestinal peptides (VIP) expression in irritable bowel syndrome (IBS) rats induced by trinitrobenzene sulfonic acid (TNBS), and the intervention effects of dioscin fromRhizomaDioscoreaeNipponicase. Methods: IBS models were established by TNBS induction. The weight, myeloperoxidase (MPO) activity, pain threshold, and VIP content were detected on the days of 2nd, 7th, 14th, and 28th. Results:TNBS induced IBS in rats was confirmed with weight loss, increased MPO activity, and decreased pain threshold. VIP plasma concentration was significantly increased in rats following TNBS intervention compared to that of the control group(P<0.05), and it was regulated downwards significantly. Conclusion: VIP expression may play a role in IBS. Therefore, dioscin has therapeutic effect on IBS rats induced by TNBS.

RhizomaDioscoreaeNipponicase; Irritable bowel syndrome; Vasoactive intestinal peptide; Trinitrobenzene sulfonic acid; Dioscin

2017-03-12

2017-04-11

國家自然科學基金(81274035)；黑龍江省中醫(yī)藥科研項目(ZHY16-034)；黑龍江中醫(yī)藥大學科研基金(201516)

趙旭(1980-)，女，碩士，講師，主要從事胃腸病的研究。

*通訊作者：代麗娟(1980-)，女，碩士，副主任醫(yī)師，主要從事中西醫(yī)結合治療慢性腎病研究。

R285.5

A

1002-2392(2017)04-0013-03