吳新華

[摘要] 目的 比較產(chǎn)前抑郁癥患者與正常孕婦生物鐘基因表達(dá)水平差異。 方法 方便選取2015年3月—2015年10月于該院就診的20例產(chǎn)前抑郁癥患者（研究組）和20名正常孕婦（對照組）為研究對象，檢測生物鐘基因Clock和PER1不同時間點的相對表達(dá)水平，并分析生物鐘基因表達(dá)的節(jié)律性。結(jié)果 研究組和對照組不同時間點Clock和PER1表達(dá)水平差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），研究組各時間點Clock和PER1表達(dá)水平Ct值顯著高于對照組（P<0.05），雖Clock和PER1在對照組（Clock： 0.000；PER1： 0.004）和研究組（Clock： 0.035；PER1： 0.038）的表達(dá)均有晝夜節(jié)律性（P<0.05），但研究組Clock和PER1表達(dá)水平的峰值和谷值之差（3.44，4.44）較對照組（6.36，5.35）更小。結(jié)論 產(chǎn)前抑郁癥與生物鐘基因表達(dá)水平變化具有相關(guān)性，應(yīng)予以關(guān)注。

[關(guān)鍵詞] 產(chǎn)前抑郁癥；生物鐘基因；表達(dá)水平；節(jié)律性

[中圖分類號] R5 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-0742（2017）06（b）-0156-03

[Abstract] Objective To compare the difference in the antenatal depression and expression level of circadian clock genes. Methods 20 cases of patients with antenatal depression and 20 cases of normal delivery women in our hospital from March 2015 to October 2015 were convenient selected as the research objects. Results The differences in the Clock and PER1 expression levels between the two groups at different time points were statistically significant（P<0.05）， and the Ct values of Clock and PER1 expression levels at different time points in the research group were obviously higher than those in the control group（P<0.05）， and the expressions of Clock and PER1 in the control group and in the research group had the diurnal rhythmicity， in the control group （Clock： 0.000；PER1： 0.004）and in the research group（Clock： 0.035；PER1： 0.038）（P<0.05）， but the difference in the peak value and valley value of Clock and PER1 expression levels in the research group was smaller than that in the control group[（3.44，4.44） vs （6.36，5.35）]. Conclusion The antenatal depression and expression level of circadian clock genes have the correlation， and we should pay attention to it.

[Key words] Antenatal depression； Circadian clock genes； Expression level； Rhythmicity

產(chǎn)前抑郁癥是孕婦生產(chǎn)常出現(xiàn)的心理障礙疾病，臨床常表現(xiàn)為睡眠減少、沮喪、焦慮、恐懼、絕望、易怒甚至自殺傾向[1-2]，對產(chǎn)婦健康造成不利影響[3-4]。前期關(guān)于產(chǎn)前抑郁癥患者行為和心理改變的報道較多[5-7]，而鮮有關(guān)于產(chǎn)前抑郁癥患者在基因調(diào)控層面變化的報道。該研究以2015年3—10月于該院就診的20例產(chǎn)前抑郁癥患者和20名正常待產(chǎn)孕婦為研究對象，比較產(chǎn)前抑郁癥患者和正常孕婦生物鐘基因表達(dá)水平的變化情況，以期為相關(guān)工作者提供借鑒。

1 對象與方法

1.1 研究對象

方便選取于該院就診的20例產(chǎn)前抑郁癥患者和20名正常孕婦為研究對象，納入條件：①受試者產(chǎn)前無精神性疾病史和其他基礎(chǔ)性疾?。虎跓o溝通障礙；③未服用抗抑郁類藥物；④自愿參與該研究。將產(chǎn)前抑郁癥患者納入研究組，平均年齡（25.32±4.79）歲；將正常待產(chǎn)孕婦納入對照組，平均年齡（24.85±5.02）歲，兩組患者數(shù)量、年齡和基礎(chǔ)性疾病等情況差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 樣品采集

入院15 d后，分別于00：00、06：00、10：00、14：00、18：00 和22：00 各采靜脈血4 mL。

1.3 血液樣本

RNA提取和cDNA的合成使用QIAamp RNA Blood Mini Kit試劑盒（德國 QIAGEN公司）提取總RNA。用紫外分光光度法對總RNA定量，OD260/OD280比值>1.7為合格樣品。取1 μg總RNA，用TransScript II Reverse Transcriptase反轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cDNA，合成產(chǎn)物使用紫外分光光度法定量，于-20℃保存。endprint

1.4 引物的合成與設(shè)計

參照NCBI數(shù)據(jù)庫中Clock、PER1和β-actin的mRNA序列，使用OligoAnalyzer 3.1進(jìn)行PCR引物設(shè)計，由大連寶生物公司合成引物，引物信息見表1。

1.5 實時定量PCR反應(yīng)體系

以反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA為模板，使用StepOnePlus？ Real-Time PCR System（美國Applied Biosystems Inc公司），PCR反應(yīng)體系為25 μL：cDNA 2 μL（相當(dāng)于100 ng），2× SYBR Premix Ex TaqTMⅡ×12.5 μL，10 μmol/L上游引物0.5 μL，10 μmol/L下游引物0.5 μL，雙蒸水9.5 μL。反應(yīng)條件：95 ℃變性5 min；擴增40個循環(huán)（95 ℃變性10 s，60 ℃退火延伸45 s）；72 ℃放置5 min。

1.6 統(tǒng)計方法

使用SPSS 19.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計，以目的基因與參比基因Ct值差值作為相對表達(dá)水平的評價指標(biāo)，結(jié)果以（x±s）表示，進(jìn)行t檢驗分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義；使用CircWave V1.4 軟件和Clock Lab軟件進(jìn)行余弦分析，獲得節(jié)律性參數(shù)。

2 結(jié)果

2.1 產(chǎn)前抑郁癥患者和正常孕婦Clock基因的表達(dá)水平差異

產(chǎn)前抑郁癥患者和正常孕婦不同時間點Clock表達(dá)水平均差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），且產(chǎn)前抑郁癥患者較正常孕婦Clock表達(dá)水平顯著下調(diào)（P<0.05）。經(jīng)余弦分析，產(chǎn)前抑郁癥患者和正常孕婦Clock表達(dá)均有晝夜節(jié)律性（P<0.05），正常孕婦Clock表達(dá)峰值為12.41，谷值為6.06；產(chǎn)前抑郁癥患者Clock表達(dá)峰值為13.93，谷值為10.49。見表2和3。

2.2 產(chǎn)前抑郁癥患者和正常孕婦PER1基因的表達(dá)水平差異

產(chǎn)前抑郁癥患者和正常孕婦不同時間點PER1表達(dá)水平差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），產(chǎn)前抑郁癥患者較正常待產(chǎn)孕婦的PER1表達(dá)水平顯著下調(diào)（P<0.05）。經(jīng)余弦分析，產(chǎn)前抑郁癥患者和正常孕婦PER1表達(dá)均有晝夜節(jié)律性（P<0.05），正常孕婦PER1表達(dá)峰值為10.01，谷值為4.66；產(chǎn)前抑郁癥患者PER1表達(dá)峰值為11.55，谷值為7.11。見表4和表5。

3 討論

產(chǎn)前抑郁是產(chǎn)婦常見的精神障礙性疾病[3]。產(chǎn)前抑郁癥患者常出現(xiàn)睡眠障礙，生物鐘基因表達(dá)水平與睡眠質(zhì)量直接相關(guān)[8]，Clock基因和PER1基因是人類生物鐘正負(fù)反饋通路的重要調(diào)節(jié)基因[9]。該研究以2015年3月—2015年10月于該院進(jìn)行就診的20例產(chǎn)前抑郁癥患者（研究組）和20名正常待產(chǎn)孕婦（對照組）為研究對象，通過檢測生物鐘基因Clock和PER1不同時間點的相對表達(dá)水平，比較產(chǎn)前抑郁癥患者與正常孕婦生物鐘基因相對表達(dá)水平和節(jié)律性差異。結(jié)果表明，研究組和對照組不同時間點Clock和PER1表達(dá)水平差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），研究組較對照組Clock和PER1擴增的Ct值顯著增加，說明表達(dá)水平較對照組均顯著降低（P<0.05），Clock和PER1在兩組研究對象的表達(dá)均有晝夜節(jié)律性（P<0.05），正常孕婦Clock表達(dá)峰值為12.41，谷值為6.06，產(chǎn)前抑郁癥患者Clock表達(dá)峰值為13.93，谷值為10.49；正常孕婦PER1表達(dá)峰值為10.01，谷值為4.66；產(chǎn)前抑郁癥患者PER1表達(dá)峰值為11.55，谷值為7.11。研究組Clock和PER1表達(dá)峰值和谷值之差（3.44，4.44）較對照組（6.36，5.35）更小，說明產(chǎn)前抑郁癥患者生物鐘基因波動幅度更小，表達(dá)節(jié)律性較正常孕婦更不明顯。有研究表明，PER1低表達(dá)水平下，90%受試者出現(xiàn)睡眠時間減少和易被喚醒的情況，PER1表達(dá)水平下降，更容易使人維持清醒狀態(tài)而阻礙睡眠狀態(tài)的持續(xù)[10]。該研究結(jié)果正好與之相符，生物鐘基因相對表達(dá)水平的降低及節(jié)律性波動幅度減弱，可能是造成產(chǎn)前抑郁癥患者睡眠障礙的原因。

綜上所述，生物鐘基因表達(dá)水平變化與產(chǎn)前抑郁相關(guān)，將生物鐘基因表達(dá)水平作為產(chǎn)前抑郁癥診療效果的輔助評價指標(biāo)具有臨床價值，值得推廣。

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（收稿日期：2017-03-13）endprint