范紅梅 劉志海 任國(guó)文 金 昭 余 蘭

黔西南州食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，貴州 興義 562400

HPLC測(cè)定黃褐毛忍冬中木犀草苷的含量

范紅梅 劉志海 任國(guó)文 金 昭 余 蘭

黔西南州食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，貴州 興義 562400

目的：建立黃褐毛忍冬中木犀草苷的含量測(cè)定方法，提高藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)一步作為該藥材控制種植、加工、使用的質(zhì)量依據(jù)。 方法：采用HPLC法，Agilent ZORBAX SB-Phenyl (5μm，4.6mm×250mm)色譜柱,以乙腈-0.5%冰醋酸溶液進(jìn)行梯度洗脫，在波長(zhǎng)350 μm處檢測(cè)黃褐毛忍冬中木犀草苷的含量。結(jié)果：木犀草苷在4.12～50.22μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系(r=0.9999,n=5)；加樣回收率為91.2%，RSD為0.6%。結(jié)論：該研究建立的方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、靈敏、重復(fù)性較好，可用于黃褐毛忍冬的質(zhì)量控制。

黃褐毛忍冬；高效液相色譜；木犀草苷；含量測(cè)定

黃褐毛忍冬為忍冬科忍冬屬植物L(fēng)onicerafulvotomentosaHsu et S.C. Cheng的干燥花蕾或帶初開的花(生藥學(xué)圖片如圖1所示)，有清熱解毒、疏風(fēng)散熱之功效；主要分布于貴州西南部、廣西西北部、云南東南部，被2015版《中國(guó)藥典》收載，為藥典規(guī)定的忍冬科忍冬屬植物山銀花的多基源植物來源之一[1]。其同時(shí)收載于貴州省地方標(biāo)準(zhǔn)，黃褐毛忍冬種質(zhì)資源豐富、易于栽培，人工栽培的初步結(jié)果表明，平均單株產(chǎn)量為550g，單株最高產(chǎn)量可達(dá)5500g[2]；同時(shí)，其生長(zhǎng)適應(yīng)性強(qiáng)抗逆性好，保水固土作用顯著，是治理喀斯特地區(qū)石漠化的優(yōu)良物種，在前西南地區(qū)已大面積推廣種植，黔西南州現(xiàn)有保存黃褐毛忍冬林分面積約17萬畝，產(chǎn)花面積已達(dá)6萬多畝[3]。黃褐毛忍冬主要含揮發(fā)油、黃酮、有機(jī)酸、三萜等化學(xué)成份[4-5]，其中木犀草苷是黃褐毛忍冬中重要的黃酮類成分，具有抗炎、抗病毒、抗氧化和抗腫瘤等多種藥理作用[6-7]。本實(shí)驗(yàn)建立HPLC測(cè)定黃褐毛忍冬中木犀草苷含量的方法，為黃褐毛忍冬的資源開發(fā)及質(zhì)量評(píng)價(jià)和控制進(jìn)一步提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Waters e2695型高效液相色譜儀，Empower色譜數(shù)據(jù)工作站；日本島津AUY220電子天平(萬分子一)；島津AUW220D電子天平(十萬分子一)；電熱恒溫干燥箱(上海博訊實(shí)驗(yàn)有限公式醫(yī)療設(shè)備)，超聲波清洗儀(天津上達(dá)公司)。

1.2 試藥 木犀草苷(北京禾原天然產(chǎn)物科技有限公司，批號(hào)050236)；樣品經(jīng)黔西南州食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心林廷龍副主任藥師鑒定為黃褐毛忍冬LonicerafulvotomentosaHsu et S. C. Cheng(樣品由興仁縣東湖街道辦事處提供)。乙腈(色譜純)、水(超純水)，冰醋酸、95%乙醇、其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Agilent ZORBAX SB-Phenyl (5μm，4.6mm×250mm)； 流動(dòng)相：以乙腈為流動(dòng)相A,以0. 5%冰醋酸為流動(dòng)相B，按表1進(jìn)行梯度洗脫，柱溫：30℃; 進(jìn)樣量：10μL; 檢測(cè)波長(zhǎng)：350nm。見表1。

表1 流動(dòng)相梯度洗脫表

2.2 對(duì)照品溶液的制備 取木犀草苷對(duì)照品10mg，精密稱定，置100mL量瓶中,加70%乙醇稀釋至刻度，精密量取2mL，置10mL量瓶中加70%乙醇稀釋至刻度，即得。所得對(duì)照品圖譜如圖2所示。

2.3 供試品溶液的制備 取本品粉末2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70% 乙醇50mL，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率35kHz)1h，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液10mL，回收溶劑至干，殘?jiān)?70%乙醇溶解，轉(zhuǎn)移至5mL量瓶中，加70%乙醇至刻度，即得。所得供試品圖譜如圖3所示。2.4 線性關(guān)系的考察 分別取上述木犀草苷對(duì)照品混合溶液2、5、10、20、25μL注入液相色譜儀，按2.1項(xiàng)下進(jìn)行色譜分析，以對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)(X)，峰面積為縱坐標(biāo)(Y),計(jì)算回歸方程，為Y=19894X+1989,R=0.9999，回歸方程如圖4所示，結(jié)果表明：木犀草苷在4.12～50.22μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度的考察 精密吸對(duì)照品溶液10μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，按2.1項(xiàng)下進(jìn)行色譜分析，計(jì)算RSD值為0.6%。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取同一批黃褐毛忍冬粉末6份，按2.3操作，制備供試品溶液，按1.1項(xiàng)下進(jìn)行色譜分析，計(jì)算其含量，結(jié)果木犀草苷含量RSD值為1.3%。

2.7 穩(wěn)定性考察 取同一批黃褐毛忍冬供試品溶液，在0、2、4、8、12h,按2.1項(xiàng)下進(jìn)行色譜分析，計(jì)算木犀草苷峰面積RSD值為0.9%。

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 稱取已知含量的黃褐毛忍冬6份，每份約1g，加入同等量的木犀草苷對(duì)照品，按2.2供試品的制備方法制備，按2.1項(xiàng)下進(jìn)行色譜分析，記錄峰面積，計(jì)算回收率，木犀草苷平均加樣回收率為91.2%。

2.9 樣品含量測(cè)定 分別稱取5個(gè)批次的黃褐毛忍冬粉末，按2.3項(xiàng)操作，平行制備供試品溶液，按2.1項(xiàng)方法進(jìn)行分析，記錄峰面積，測(cè)定藥材中木犀草苷含量。結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測(cè)定

3 討論

從實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可知，本研究建立的HPLC測(cè)定黃褐毛忍冬中木犀草苷的方法能在19min實(shí)現(xiàn)木犀草苷的完全分離，方法簡(jiǎn)單，靈敏，精確度高。通過5批黃褐毛忍冬樣品的考察，木犀草苷含量在0.02%～0.03%，結(jié)果表明各批次之間無顯著差異，重復(fù)性、穩(wěn)定性、回收率符合分析測(cè)定的要求。

黃褐毛忍冬與其同科同屬藥材金銀花被2015版《中國(guó)藥典》分開收載，其中兩藥的性味歸經(jīng)、功能主治內(nèi)容完全一致[1]。研究表明[8-9]，黃褐毛忍冬與金銀花在有機(jī)酸、黃酮類、揮發(fā)油等方面存在化學(xué)成分的一致性，但在含量上存在一定差異：金銀花中活性成分綠原酸含量低于黃褐毛忍冬；但金銀花中木犀草苷含較高。2015版《中國(guó)藥典》規(guī)定，綠原酸、木犀草苷是金銀花的質(zhì)量控制指標(biāo)，黃褐毛忍冬與其化學(xué)成分相似、功能主治一致，金銀花價(jià)格昂貴，雖黃褐毛忍冬經(jīng)濟(jì)效益不及金銀花，但黃褐毛忍冬有利于改善貴州省黔西南州石漠化現(xiàn)狀，在貴州省黔西南州推廣種植中已發(fā)揮明顯的生態(tài)及經(jīng)濟(jì)效益[10-12]。本實(shí)驗(yàn)建立了HPLC測(cè)定黃褐毛忍冬中木犀草苷的方法，該方法可作為黃褐毛忍冬的又一個(gè)質(zhì)量控制指標(biāo)，可為黃褐毛忍冬藥材種植、加工及質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015.

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Determination of Luteoloside in theLoniceraFulvotometosaby HPLC

FAN Hongmei LIU Zhihai REN Guowen JIN Zhao YU Lan

Qianxinan Food and Drug Testing Center，Xinyi 562400，China

Objective To establish a HPLC method for the determination of Luteoloside in theLoniceraFulvotometosaand to improve its quality standard, further providing the foundation for the quality control methods of planting, processing and using. Methods The HPLC analysis was performed on an Agilent ZORBAX SB-Phenyl column (5μm, 4.6mm×250mm) with the gradient elution of acetonitrile-0.5% glacial acetic acid solution; detection wavelength was 210nm. Results Luteoloside showed a good linear relationship in 4.12～50.22μg(r=0.9999，n=5) with the recovery of standard additon of 91.2%;RSDwas 0.6%.Conclusion The method established is convenient, accurate, sensitive and reproducible, which could be used for quality control ofLoniceraFulvotometosa.

LoniceraFulvotometosaHsu et S.C.Cheng; HPLC; Luteoloside; Content Determination

范紅梅(1964-)，女，漢族，本科，副主任藥師，研究方向?yàn)樗幤窓z驗(yàn)及藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。E-mail:1144376264@qq.com

R284.1

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1007-8517(2017)16-0037-03

2017-07-26 編輯：程鵬飛)