李一婷++林書緣++葛冰潔++姜成哲++樸明淑

【摘 要】為了研究金花葵和葵花葉提取物的抗氧化性，本實驗采用了DPPH·法來測定金花葵提取物、葵花葉提取物以及抗壞血酸對二苯代苦味肼基自由基（DPPH·）的清除效果并進行對比，結(jié)果顯示，此三種物質(zhì)均能夠清除DPPH·，都具有良好的抗氧化活性。在一定范圍內(nèi)，其濃度與清除率之間存在著良好的線性關系，其50%抑制濃度IC50分別是0.55mg/ml、0.81mg/ml、5.1x10-2mg/ml，抗氧化能力：抗壞血酸>金花葵提取物>葵花葉提取物。

【Abstract】In order to study the antioxidant activity of extracts of sunflower and sunflower leaves， this experiment used the DPPH· method to determine the scavenging effect of the extracts of sunflower， and the extracts of the leaves of sunflower and ascorbic acid on two benzoic acid radical radical （DPPH·）. The results showed that all the three substances could remove DPPH· and had good antioxidant activity. In a certain range， there is a good linear relationship between the concentration and the clearance rate. The 50% inhibition concentration of IC50 was 0.55mg/ml， 0.81mg/ml and 5.1x10-2mg/ml. Antioxidant capacity： ascorbic acid > the extract of golden sunflower > the extract of sunflower leaves.

【關鍵詞】金花葵；葵花葉；DPPH；抗氧化性

【Keywords】sunflower； sunflower leaf； DPPH； antioxidant activity

【中圖分類號】R284.1 【文獻標志碼】A 【文章編號】1673-1069（2017）08-0189-02

1 引言

金花葵（Aurea？HELIANTHUS），又名菜芙蓉，也稱野芙蓉。金花葵具有良好的清熱解毒、鎮(zhèn)痛消炎、降血脂、免疫調(diào)節(jié)、抑制腫瘤細胞、抗氧化、抗衰老等作用，具備很強的藥用價值。結(jié)合近年來的報道文獻可以發(fā)現(xiàn)，金花葵中黃酮類化合物是主要的生物活性物質(zhì)，危晴等[1]采用紫外分光光度法對金花葵籽中的總黃酮含量進行測定，結(jié)果顯示，其總黃酮獲得率為2.08%。蘭蓉等[2]分別采用超聲提取法、索氏提取法和有機溶劑回流法三種方法在金花葵的干花中進行總黃酮的提取，并且使用HPLC（高效液相色譜法）檢測了這三種方法提取所得的總黃酮含量，由檢測結(jié)果可知，有機溶劑回流法提取效果最佳，其總黃酮獲得率為3.97%。

2 實驗目的

本實驗使用的葵花葉提取物是來自于向日葵的葵花葉提取物，向日葵是菊科向日葵屬的一年生草本植物，向日葵的葉分為真葉和子葉。莖下部分葉片在開花前制造養(yǎng)分，主要供給根部生長，到開花時其功能基本結(jié)束。中上部葉片制造的養(yǎng)分主要供給花盤促使種子形成，葵花葉中含有多糖及多種微量元素，營養(yǎng)豐富，利用價值很高。[3]

維生素C，英文名：Vitamin C，又稱：L-抗壞血酸，是多數(shù)生物的必需營養(yǎng)素?？箟难嵩诙鄶?shù)生物體內(nèi)可以借助新陳代謝制造而來，人類例外。在生物體內(nèi)，抗壞血酸是一種抗氧化劑，其作用是保護機體免于自由基的傷害。

3 實驗過程

DPPH·是一種很穩(wěn)定的氮中心的自由基，由于DPPH自由基在以300～400之間為中心處具有強烈的吸收，因此其溶液呈深紫色，并且在被中和之后變?yōu)闇\黃色或無色。利用這一特性，通過記錄DPPH在波長為517nm處吸光度值的變化即可判斷其含量變化，從而對反應進行定量分析。[4-6]

金花葵提取物、葵花葉提取物和抗壞血酸都具有良好的抗氧化作用，本實驗使用DPPH·法分別測定金花葵提取物、葵花葉提取物以及抗壞血酸對DPPH·自由基清除作用的強弱并進行比較，從而進一步對比這三種物質(zhì)的抗氧化性能。

①實驗材料

金花葵花，來自延吉郊區(qū)；葵花葉，采自龍井郊區(qū)。

②實驗儀器

紫外分光光度計（上海精密科學儀器有限公司），電子分析天平（上海精天電子儀器有限公司）。

③實驗試劑

無水乙醇；DPPH·

④實驗方法

DPPH·標準溶液：配制成6.5x10-4mol/L的儲液，存放于冰箱中備用，使用時用無水乙醇稀釋成6.5x10-5mol/L的DPPH·溶液。

金花葵提取液：配制成濃度為1mg/ml溶液備用。

葵花葉提取液：配制成20mg/ml的溶液，搖勻，靜置。使用時，吸取上清液1ml，加入9ml蒸餾水稀釋為2mg/ml的溶液。

抗壞血酸溶液：配制成500μg/ml抗壞血酸溶液備用，用時稀釋成100μg/ml。

⑤抗氧化作用的測定[7]

第一，取6支小試管，編號1-6，分別加入5μl、10μl、20μl、50μl、100μl、0μl 濃度為1mg/ml的金花葵提取物溶液（或分別加入12.5μl、25μl、50μl、75μl、100μl濃度為100μg/ml抗壞血酸溶液：或分別加入25μl、50μl、100μl、150μl、200μl、0μl濃度為2mg/ml的葵花葉提取物溶液），再蒸餾水補足至100μl，向6支試管中分別加入990μl 6.5x10-5mol/L DPPH·溶液，震蕩混勻，30min后測定波長為517nm處的吸光值A，其中，試管6為不含提取物溶液的對照組。endprint

第二，自由基清除率的計算公式：

清除率（%）=（A對照-A抗氧化劑）/A對照x100%

4 實驗結(jié)果

第一，金花葵提取物濃度與DPPH·清除率。

由表1可以看出，在0.05～1.00mg/ml范圍內(nèi)，金花葵提取物對DPPH·的清除作用隨著濃度的增加而增強。

表1 濃度與清除率

■

第二，金花葵提取物濃度與對DPPH·的清除率存在良好的線性關系，其50%抑制濃度IC50=0.55mg/ml，而當金花葵提取物溶液濃度達到1.15mg/ml時清除率接近100%。

表2 葵花葉提取物濃度與DPPH·清除率

■

由表2可以看出，在0.125～1.000mg/ml范圍內(nèi)，葵花葉提取物對DPPH·的清除作用隨著濃度的增加而增強。

葵花葉提取物的濃度與對DPPH·的清除率存在良好的線性關系，其50%抑制濃度為IC50=0.81mg/ml，而當葵花葉提取物溶液濃度達到1.63mg/ml時，清除率接近100%。

第三，從抗壞血酸溶液濃度與DPPH·的清除率可以看出，在一定濃度范圍內(nèi)，抗壞血酸溶液對DPPH·的清除作用隨著濃度的增加而增強。

抗壞血酸濃度與對DPPH·的清除率之間存在良好的線性關系，其50%抑制濃度IC50=5.1×10-2mg/ml；而當抗壞血酸溶液濃度達到10×10-2mg/ml時，清除率接近100%。

對比三者的IC50可以判斷其抗氧化性：抗壞血酸>金花葵提取物>葵花葉提取物。

5 結(jié)論

通過實驗發(fā)現(xiàn)金花葵提取物、葵花葉提取物和抗壞血酸都具有良好的抗氧化性，三者對DPPH·的50%抑制濃度IC50分別為0.55mg/ml、0.81mg/ml、5.1x10-2mg/ml，即抗氧化能力：抗壞血酸>金花葵提取物>葵花葉提取物。

【參考文獻】

【1】危晴，蘭蓉，辛秀蘭，等.紫外分光光度法測定金花葵籽中總黃酮的含量[J].安徽農(nóng)業(yè)科學，2012，40（12）：7050+7060.

【2】蘭蓉，李浡，劉卉，等.金花葵總黃酮的提取和含量測定[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學， 2012，40（12）：280-282.

【3】朱元龍.紫蘇葉抗氧化物的提取分離及其在油脂中抗氧化應用研究[D]. 福州：福建農(nóng)林學院，2010.

【4】Om P. Sharma and Tej K. Bhat. DPPH antioxidant assay revisited[J]. Food Chemistry， 2009， 113（4） ：1202-1205.

【5】Lu Y R，F(xiàn)ool L Y.Antioxidant and radical scavenging activities of polyphenols from apple pomace[J].Food chemistry，2000，68（1）：81-85.

【6】Leong L P，Shu G.An investigation of antioxidant capacity of fruits in Singapore markets[J].Food chemistry，2002，76（1）：69-75.

【7】郝曉麗，許申鴻，杭瑚，等.用兩種方法評價四種食物抗氧化劑的抗氧化活性[J].食品科學，2004，24（3）：127-129.endprint