高勝男 馬卉佳 徐 韜,2 陳擁軍,2 林仕梅,2* 黃先智

(1. 西南大學動物科技學院，重慶400716；2.西南大學淡水魚類資源與生殖發(fā)育教育部重點實驗室，重慶400716；3.西南大學蠶學與系統(tǒng)生物學研究所，重慶400716)

高脂飼料中添加發(fā)酵桑葉對雜交鱧生長性能、體組成及血清生化指標的影響

高勝男1馬卉佳1徐 韜1,2陳擁軍1,2林仕梅1,2*黃先智3

(1. 西南大學動物科技學院，重慶400716；2.西南大學淡水魚類資源與生殖發(fā)育教育部重點實驗室，重慶400716；3.西南大學蠶學與系統(tǒng)生物學研究所，重慶400716)

本試驗旨在研究高脂飼料中添加發(fā)酵桑葉對雜交鱧生長性能、體組成及血清生化指標的影響。選用體質健壯、平均體重為10 g的雜交鱧360尾，隨機分成3個組，每個組設4個重復，每個重復30尾。各組投喂在高脂飼料中分別添加0(對照組)、7.5%和15.0%發(fā)酵桑葉的試驗飼料。試驗期8周。結果表明：1)與對照組相比，15.0%發(fā)酵桑葉組雜交鱧的特定生長率(SGR)和蛋白質效率(PER)顯著降低(P<0.05)，飼料系數(shù)(FCR)顯著增加(P<0.05)；7.5%發(fā)酵桑葉組雜交鱧的SGR、PER和FCR無顯著差異(P>0.05)。各組雜交鱧的攝食率(FR)無顯著差異(P>0.05)。2)與對照組相比，7.5%和15.0%發(fā)酵桑葉組雜交鱧的全魚粗脂肪含量以及肝體比、臟體比和腸脂比顯著降低(P<0.05)，15.0%發(fā)酵桑葉組雜交鱧的肝臟脂肪含量顯著降低(P<0.05)。各組雜交鱧的全魚粗灰分、粗蛋白質以及肌肉脂肪含量均無顯著差異(P>0.05)。3)與對照組相比，15.0%發(fā)酵桑葉組雜交鱧的血清谷草轉氨酶和谷丙轉氨酶活性以及總膽固醇、甘油三酯含量顯著降低(P<0.05)；7.5%和15.0%發(fā)酵桑葉組雜交鱧的血液葡萄糖含量顯著降低(P<0.05)。各組雜交鱧的血清總蛋白含量均無顯著差異(P>0.05)。由此可見，高脂飼料中添加7.5%發(fā)酵桑葉不會影響雜交鱧的生長性能，而添加15.0%發(fā)酵桑葉會抑制雜交鱧的生長，但有利于肝臟健康，改善機體的糖脂代謝。

發(fā)酵桑葉；高脂飼料；雜交鱧；生長；代謝

雜交鱧是我國重要的淡水經(jīng)濟養(yǎng)殖魚類。目前，高密度集約化(一般每公頃產(chǎn)量為45 000～75 000 kg)養(yǎng)殖的雜交鱧商業(yè)飼料中脂肪含量通常在8%以上，易造成機體代謝失調，引起脂肪在肝臟沉積，繼而影響雜交鱧產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。如何通過營養(yǎng)學途徑來改善或調控養(yǎng)殖魚類的糖脂代謝紊亂，是營養(yǎng)學家致力于研究的方向。近年來，桑葉因富含多糖、黃酮、生物堿等生物活性成分[1]，且資源豐富，引起營養(yǎng)研究者的廣泛關注。

迄今，關于桑葉對動物生長性能的影響盡管結果報道不一致，但均認同桑葉具有降糖、降脂功效[2]。本課題組前期研究也證實，桑葉可有效調節(jié)魚體的脂質代謝[3]。為進一步研究桑葉對脂肪代謝的調節(jié)作用，本試驗配制一種脂肪含量為14%的基礎飼料，研究在高脂飼料中添加發(fā)酵桑葉對雜交鱧生長性能、體組成及血清生化指標的影響，以期為桑葉的飼用開發(fā)積累資料，同時為優(yōu)化水產(chǎn)飼料配制技術提供新思路。

1 材料與方法

1.1試驗飼料

桑葉營養(yǎng)組成為：干物質含量31.2%，粗蛋白質含量21.5%，粗脂肪含量4.6%，可溶性糖含量18.6%，粗纖維含量21.8%。發(fā)酵桑葉由桑葉采用乳酸菌、酵母菌、芽孢桿菌和固氮菌進行固態(tài)發(fā)酵(發(fā)酵pH 7.0，溫度28 ℃，時間72 h)后制成，其營養(yǎng)組成為：干物質含量32.5%，粗蛋白質含量24.7%，粗脂肪含量10.3%，可溶性糖含量11.5%，粗纖維含量17.9%。

以魚粉、豆粕和棉籽蛋白為主要蛋白質源，以魚油和豆油為主要脂肪源，配制成高脂肪飼料(粗脂肪含量14%，粗蛋白質含量41%，總能19.5 MJ/kg)，在高脂飼料中分別添加0(對照組)、7.5%和15.0%的發(fā)酵桑葉，配制成3種試驗飼料，其組成及營養(yǎng)水平見表1。各飼料原料粉碎過80目篩，采取逐級稀釋法混合均勻，制成粒徑為3.0 mm的膨化浮性顆粒飼料，風干后放入4 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

表1 試驗飼料組成及營養(yǎng)水平(風干基礎)

預混料為每千克飼料提供 Premix provided the following per kg of diets：VA 18 mg，VD35 mg，VE 150 mg，VC 500 mg，VB116 mg，VB620 mg，VB126 mg，VK318 mg，核黃素 riboflavin 40 mg，肌醇 inositol 320 mg，泛酸鈣 calcium pantothenate 60 mg，煙酰胺 niacinamide 80 mg，葉酸 folic acid 5 mg，生物素 biotin 2 mg，Na 30 mg，K 50 mg，Mg 100 mg，Cu 4 mg，F(xiàn)e 25 mg，Zn 35 mg，Mn 12 mg，I 1.6 mg，Se 0.2 mg，Co 0.8 mg。

1.2試驗設計和飼養(yǎng)管理

試驗魚選用當年培育的體質健壯、規(guī)格整齊的雜交鱧(平均體重為10 g)360尾，隨機分成3個組，每個組設4個重復，每個重復30尾。在室內淡水養(yǎng)殖系統(tǒng)(水缸有效體積為260 L)中飼養(yǎng)8周，日投飼量為體重的3%～5%，每天08:00、12:30、17:00各投喂1次。養(yǎng)殖水源為曝氣自來水，試驗期間水溫為(24.5±2.5) ℃，pH為7.4±0.4，溶氧含量為6～7 mg/L，氨氮含量<0.10 mg/L，亞硝酸鹽氮含量為0.005～0.010 mg/L。

1.3樣品制備與分析

飼養(yǎng)結束后，禁食24 h后稱重，每重復隨機取3尾魚作為全魚樣品，用于體組成的測定；每重復隨機取3尾魚，用MS-222進行麻醉，分離出內臟、肝胰臟和腸系膜脂肪，用于形體指標的測定；每重復隨機取5尾魚用一次性醫(yī)用注射器尾靜脈取血，取出的血液一部分用于測定全血中葡萄糖含量，另一部分于4 000×g、4 ℃條件下離心10 min，收集血清，-20 ℃保存?zhèn)溆茫糜跍y定血清生化指標。

飼料原料及全魚樣品均在105 ℃烘干至恒重，然后采用凱氏定氮法測定粗蛋白質含量，采用索氏抽提法測定粗脂肪含量，采用高溫(550 ℃)灼燒法測定粗灰分含量，采用鉬黃分光光度法測定總磷含量，采用GR3500氧彈式熱量計測定飼料總能。

血清生化指標采用全自動分析儀(邁瑞，BC-3000)測定，包括谷草轉氨酶(aspartate transaminase,AST)、谷丙轉氨酶(alanine aminotransferase,ALT)活性及總膽固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、總蛋白(total protein,TP)含量。血液中葡萄糖(glucose，GLU)含量采用上海強生血糖儀測定。

1.4計算公式

特定生長率(SGR,%/d)=100×[lnWt-lnW0]/t；蛋白質效率(PER)=(Wt-W0)/(F×Fp)；飼料系數(shù)(FCR)=F/[Wt-W0]；攝食率(FR,g/d)=F×2/[(Wt+W0)×t]；成活率(SR,%)=100×Nt/N0；臟體指數(shù)(VSI,%)=100×Wv/Wt；腸脂比(IPF,%)=100×Wi/Wt；肝體比(HSI,%)=100×Wh/Wt。

式中：Wt為終末均重(g)；W0為初始均重(g)；t為飼養(yǎng)天數(shù)(d)；F為總攝食飼料的干重(g)；Fp為飼料的粗蛋白質含量(%)；Nt為初始尾數(shù)(尾)；N0為終末尾數(shù)(尾)；Wv為內臟重量(g)；Wi為腸道脂肪重量；Wh為肝臟重量(g)。

1.5數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 17.0對所得數(shù)據(jù)用單因素方差分析(one-way ANOVA)及Tukey氏法多重比較進行處理。除成活率外，所有試驗數(shù)據(jù)以平均值±標準誤表示，差異顯著水平為P<0.05。

2 結 果

2.1發(fā)酵桑葉對雜交鱧生長性能的影響

由表2可知，7.5%發(fā)酵桑葉組雜交鱧的末重顯著高于15.0%發(fā)酵桑葉組和對照組(P<0.05)。7.5%發(fā)酵桑葉組雜交鱧的特定生長率、蛋白質效率和飼料系數(shù)與對照組無顯著差異(P>0.05)；而15.0%發(fā)酵桑葉組雜交鱧的特定生長率、蛋白質效率與對照組相比顯著降低(P<0.05)，飼料系數(shù)顯著增加(P<0.05)。各組雜交鱧的攝食率無顯著差異(P>0.05)，成活率均為100%。

表2 發(fā)酵桑葉對雜交鱧生長性能的影響

同行數(shù)據(jù)肩標不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，相同或無字母表示差異不顯著(P>0.05)。下表同。

In the same row, values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05), while with the same or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as below.

2.2發(fā)酵桑葉對雜交鱧形體指標和體組成的影響

由表3可知，與對照組相比，7.5%和15.0%發(fā)酵桑葉組雜交鱧的全魚粗脂肪含量以及肝體比、臟體比和腸脂比顯著降低(P<0.05)，15.0%發(fā)酵桑葉組雜交鱧的肝臟脂肪含量顯著降低(P<0.05)。各組雜交鱧的全魚粗灰分、粗蛋白質以及肌肉脂肪含量均無顯著差異(P>0.05)。

表3 發(fā)酵桑葉對雜交鱧形體指標和體組成的影響(濕重基礎)

2.3發(fā)酵桑葉對雜交鱧血清生化指標和血液葡萄糖含量的影響

由表4可知，與對照組相比，15.0%發(fā)酵桑葉組雜交鱧的血清谷草轉氨酶和谷丙轉氨酶活性以及總膽固醇、甘油三酯含量顯著降低(P<0.05)。隨發(fā)酵桑葉水平的增加，雜交鱧的血液葡萄糖含量顯著降低(P<0.05)。各組雜交鱧的血清總蛋白含量均無顯著差異(P>0.05)。

表4 發(fā)酵桑葉對雜交鱧血清生化指標和血液葡萄糖含量的影響

3 討 論

3.1發(fā)酵桑葉對雜交鱧生長性能的影響

從本試驗結果可以看出，高脂飼料中添加低水平的發(fā)酵桑葉不會影響雜交鱧的特定生長率、蛋白質效率和飼料系數(shù)。這與在印度囊鰓鯰(Heteropneustesfossilis)[4]、巴塔野鯪(Labeobata)[5]和南亞野鯪(Labeorohita)[6]上的研究結果一致，這些研究指出飼料中用發(fā)酵桑葉替代魚粉不會影響魚類的生長效果和飼料利用率。本試驗中也證實用發(fā)酵桑葉替代4%豆粕是可行的。當然，飼料中發(fā)酵桑葉的添加水平因動物種類、飼料配方不同而存在差異。本試驗結果顯示，飼料添加低水平發(fā)酵桑葉顯著增加雜交鱧末重，這表明適宜水平的發(fā)酵桑葉能夠促進魚體增重[7]。桑葉發(fā)酵后，可以改善適口性，提高蛋白質的利用率[8]，這可能是低水平發(fā)酵桑葉能夠提高魚體增重的原因。然而，飼料添加高水平發(fā)酵桑葉會抑制雜交鱧的生長。本課題組前期研究也發(fā)現(xiàn)，飼料中添加高水平桑葉會降低羅非魚的生長性能[9]，同樣在蛋雞上也有一致的研究報道[10]。發(fā)酵工藝可以有效降低桑葉中抗營養(yǎng)因子的含量[11]，但粗纖維含量仍然較高(17.9%)，影響消化酶的活性，從而降低了飼料中營養(yǎng)成分的消化率[12]。本試驗中15.0%發(fā)酵桑葉的添加水平對肉食性的雜交鱧來說可能偏高，增加了粗纖維含量，導致營養(yǎng)物質的利用率降低，繼而影響魚類的生長，很遺憾本試驗未測定飼料的消化率。有關桑葉在魚類上的作用機制還需要深入研究。

飼料中添加植物性蛋白質源往往因其適口性差而影響動物的采食量，進而降低動物的生長性能[13]。本試驗中，飼料中添加發(fā)酵桑葉沒有影響雜交鱧的攝食量。這表明桑葉發(fā)酵后不會影響飼料的適口性。這與羅非魚[10]上的研究結果一致。這也證實了前面的推斷，消化率低是影響高水平發(fā)酵桑葉抑制雜交鱧生長的因素。

3.2發(fā)酵桑葉對雜交鱧脂質代謝的影響

大量研究結果表明，飼料中添加適宜的脂肪水平不僅能夠促進動物生長，還可以提高蛋白質的利用效率，實現(xiàn)節(jié)約蛋白質的作用[14-15]。然而，飼料脂肪水平過高，會抑制動物的生長[16]，導致脂肪過度沉積[17]，影響魚體健康[18]。本試驗結果顯示，高脂飼料中添加發(fā)酵桑葉顯著減少了體脂的沉積，降低了臟體比。這可能是桑葉發(fā)酵后，抗營養(yǎng)因子含量減少，活性成分含量增加，降糖降脂功效顯著增強所致[19-20]。本研究還發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵桑葉降低雜交鱧血清中總膽固醇和甘油三酯含量，并呈劑量依賴性，進一步證實發(fā)酵桑葉可以調節(jié)雜交鱧體脂的代謝和轉化。這與在羅非魚[10]和大口黑鱸[21]上的研究結果一致。這些研究結果表明，發(fā)酵桑葉在魚飼料中可以有效調節(jié)魚體的脂質代謝，改善脂質沉積。

本試驗結果發(fā)現(xiàn)，高脂飼料中添加發(fā)酵桑葉顯著降低了雜交鱧肝臟脂肪含量，同時血清中谷草轉氨酶和谷丙轉氨酶活性也顯著降低，進一步證實發(fā)酵桑葉可以有效保護高脂對雜交鱧肝細胞的傷害，進而改善肝臟健康。

本試驗結果顯示，發(fā)酵桑葉可降低雜交鱧的血液葡萄糖含量，且存在劑量依賴性。桑葉中所含的生物活性成分如生物堿、1-脫氧野尻霉素(1-de-oxynojirimycin，DNJ)以及多糖具有競爭性抑制小腸內α-糖苷酶的作用，延緩或抑制葡萄糖在腸道的吸收，從而實現(xiàn)降血糖的功效[22]，也有研究認為，生物堿和黃酮類具有調控肝臟中糖代謝過程關鍵酶活性的作用，從而調控機體中糖、脂肪和蛋白質的代謝和轉化[20]。由此可見，桑葉中不同有效成分降血糖的機制不一，但都證明發(fā)酵桑葉在魚類上的降糖顯著。眾所周知，魚類對碳水化合物的利用能力較低，因此，提升魚類對飼料糖的耐受能力具有重要的實踐意義。

4 結 論

高脂飼料中添加7.5%發(fā)酵桑葉不會影響雜交鱧的飼料利用效率，還可以促進其生長；而添加15.0%發(fā)酵桑葉會顯著抑制雜交鱧的生長，但有利于肝臟健康，并隨發(fā)酵桑葉水平的增加，雜交鱧血清總膽固醇、甘油三酯及血液葡萄糖含量呈下降趨勢。

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*Corresponding author, associate professor, E-mail: linsm198@163.com

(責任編輯 武海龍)

Effects of High-Fat Diet Supplemented with Fermented Mulberry Leaves on Growth Performance, Body Composition and Serum Biochemical Indexes of Hybrid Snakehead

GAO Shengnan1MA Huijia1XU Tao1,2CHEN Yongjun1,2LIN Shimei1,2*HUANG Xianzhi3

(1. College of Animal Science and Technology, SouthwestUniversity, Chongqing 400716, China; 2. Key Laboratory of Freshwater Fish Reproduction and Development (Ministry of Education), Southwest University, Chongqing 400716, China; 3. Institute of Sericulture and Systems Biology, Southwest University, Chongqing 400716, China)

This experiment was conducted to study the effects of high-fat diet supplemented with fermented mulberry leaves on growth performance, body composition and serum biochemical indexes of hybrid snakehead. A total of 360 healthy hybrid snakehead with the average body weight of 10 g were randomly divided into 3 groups with 4 replicates per group and 30 fish per replicate. Fish in the 3 groups were fed the high-fat diet supplemented with 0 (control group), 7.5% and 15.0% fermented mulberry leaves, respectively. The experiment lasted for 8 weeks. The results showed as follows: 1) compared with the control group, the specific growth rate (SGR) and protein efficiency rate (PER) of hybrid snakehead in 15.0% fermented mulberry leaves group were significantly decreased (P<0.05), but the feed conversion rate (FCR) was significantly increased (P<0.05); the SGR, PER and FCR of hybrid snakehead in 7.5% fermented mulberry leaves group had no significant difference (P>0.05). There was no significant difference in feeding rate (FR) of hybrid snakehead among all groups (P>0.05). 2)Compared with the control group, the lipid content of whole body, hepatosomatic index, viscerosomatic index and intraperitoneal fat ratio of hybrid snakehead in 7.5% and 15.0% fermented mulberry leaves groups were significantly decreased (P<0.05), and the liver lipid content of hybrid snakehead in 7.5% fermented mulberry leaves group was significantly decreased (P<0.05). There were no significant differences in the contents of whole body crude ash, whole body crude protein and muscle lipid of hybrid snakehead among all groups (P>0.05). 3) Compared with the control group, the glutamic-oxalacetic transaminase and glutamic-pyruvic transaminase activities and total cholesterol and triglyceride contents in serum of hybrid snakehead in 15.0% fermented mulberry leaves group were significantly decreased (P<0.05), and the blood glucose content of hybrid snakehead in 7.5% and 15.0% fermented mulberry leaves groups was significantly decreased (P<0.05). There was no significant difference in serum total protein content of hybrid snakehead among all groups (P>0.05). In conclusion, high-fat diet supplemented with 7.5% fermented mulberry leaves has no effects on growth performance of hybrid snakehead, while supplemented with 15.0% fermented mulberry leaves can decrease the growth of hybrid snakehead, but it is good for liver health, and can improve the body glucolipid metabolism.[ChineseJournalofAnimalNutrition,2017,29(9)：3422-3428]

fermented mulberry leaves; high-fat diet; hybrid snakehead; growth; metabolism

10.3969/j.issn.1006-267x.2017.09.048

2017-03-28

公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(201303053)；重慶市現(xiàn)代特色效益農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術體系

高勝男(1996—),女,吉林公主嶺人,本科生,水產(chǎn)養(yǎng)殖專業(yè)。E-mail: 1203410573@qq.com

*通信作者：林仕梅,副教授,碩士生導師,E-mail: linsm198@163.com

S963.16+2

：A

：1006-267X(2017)09-3422-07