陳 銘

（泰興市根思鄉(xiāng)畜牧獸醫(yī)站，江蘇泰興 225433）

雞李氏桿菌病的診斷與治療

陳 銘

（泰興市根思鄉(xiāng)畜牧獸醫(yī)站，江蘇泰興 225433）

針對泰州市某雞場出現(xiàn)產(chǎn)蛋雞2天內(nèi)有2.5%發(fā)病致死亡的情況，采用臨床檢查、剖檢觀察、實驗室檢驗等方法診斷，觀察到發(fā)病雞雞冠肉髯發(fā)紺并伴有神經(jīng)癥狀，且采食量、產(chǎn)蛋率均下降，剖檢可見腦膜充血、心冠脂肪有出血點、肝臟有黃白色壞死點、腺胃黏膜出血等癥狀，染色鏡檢可見兩端鈍圓的藍(lán)紫色短小桿菌，部分呈V形排列，診斷為雞李氏桿菌病。經(jīng)阿米卡星、慶大霉素、諾氟沙星、頭孢曲松等10種常用抗生素藥敏實驗，結(jié)果顯示阿米卡星、頭孢氨芐、頭孢唑啉、頭孢曲松、頭孢拉啶的敏感度較強(qiáng)；慶大霉素、青霉素的敏感度中等；多西環(huán)素、諾氟沙星、氯霉素幾乎不敏感。根據(jù)藥敏結(jié)果用頭孢拉定對雞群進(jìn)行治療，一周后雞群基本恢復(fù)正常。

李氏桿菌 診斷 細(xì)菌形態(tài) 藥敏實驗 預(yù)防 鑒別診斷

近年來，隨著養(yǎng)雞行業(yè)的迅速發(fā)展，越來越多的人轉(zhuǎn)向養(yǎng)雞行業(yè)，其中包括很多非專業(yè)的人員。在部分雞場內(nèi)出現(xiàn)的由于飼養(yǎng)密度、環(huán)境衛(wèi)生、飼養(yǎng)管理上存在的問題導(dǎo)致的各種致病菌與日俱增。李氏桿菌病是由李斯特菌引起的一種散發(fā)性的人畜共患傳染病。該菌與某些大腸桿菌有共同抗原，由于交叉反應(yīng)的普遍存在，故血清學(xué)診斷難度較大。目前，國內(nèi)對該病的診斷與檢測尚處在傳統(tǒng)病原體的分離鑒定上，包括病料的病原的分離、生化反應(yīng)、動物實驗。本文介紹1個典型病例的診斷治療情況。

1 發(fā)病情況

2015年1月19日泰州市高港區(qū)某雞場共養(yǎng)殖2000多只蛋雞，主訴一天內(nèi)死亡20多只，發(fā)病2d內(nèi)，共死亡50多只蛋雞。發(fā)病雞雞冠干縮，肉髯發(fā)紺，羽毛蓬松，兩翅下垂，喜臥或興奮，尖叫、仰頭、全身抽搐，嚴(yán)重脫水，皮膚暗紫色，短期內(nèi)死亡。病程較長的出現(xiàn)共濟(jì)失調(diào)，仰頭、斜頸、跳躍等神經(jīng)癥狀。發(fā)病過程中雞群的整體采食量下降5%左右，產(chǎn)蛋率下降10%左右。該段發(fā)病時間天氣變幻無常，溫差較大。

2 臨床癥狀

病雞精神沉郁，食欲不振，下痢，尾部羽毛脫落嚴(yán)重等癥狀。部分病雞雞冠肉髯發(fā)紺，腿部發(fā)生陣發(fā)性抽搐，行走不便，呈跳躍狀，雙翅下垂，神志不清；部分雞腿部皮膚干燥，鱗片粗糙，脫水嚴(yán)重，眼睛干澀流淚、怕光；個別病雞眼眶周圍略微腫脹，眼眶周邊皮膚呈藍(lán)色或暗紫色。

3 病理變化

病死雞出現(xiàn)腦膜明顯充血，心肌有壞死灶，心包內(nèi)有少量積液，心冠脂肪有出血點。幾乎所有病死雞均出現(xiàn)肝臟腫大呈土黃色，有黃白色針尖大壞死點和深褐色瘀斑，質(zhì)脆易碎。脾臟腫大，呈紅黑色，有出血點。腺胃黏膜出血，有卡他性炎癥。腸道黏膜脫落，十二指腸有彌漫性出血，少量病死雞腸道內(nèi)有線蟲。腿部肌肉有少量出血點。

4 實驗室診斷

4.1 細(xì)菌分離培養(yǎng)

取兩只病死雞的肝臟，在無菌環(huán)境下將其切面在普通瓊脂培養(yǎng)基上輕輕涂擦，將兩個培養(yǎng)皿標(biāo)記好A、B并放入37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。24h后培養(yǎng)皿中長出光滑、透明、邊緣整齊的小菌落。分別選取A、B中的單個菌落在巧克力培養(yǎng)基上分區(qū)劃線，進(jìn)行分離培養(yǎng)，再次放入37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。24h后巧克力培養(yǎng)基上幾乎無菌落生長，懷疑巧克力培養(yǎng)基不適合該菌生長。再利用犢牛血清培養(yǎng)基對該菌進(jìn)行分離培養(yǎng)，同時利用巧克力培養(yǎng)基做同樣的分區(qū)劃線進(jìn)行分離培養(yǎng)，巧克力培養(yǎng)基作為對照組。24h后該菌在犢牛血清培養(yǎng)基生長良好，分離出單個菌落，而巧克力培養(yǎng)基上仍然無菌落生長跡象。

4.2 染色鏡檢

取兩張載玻片，分別標(biāo)記A、B。以滴管取一滴生理鹽水放到載玻片上，再用滅菌的接種環(huán)取一顆菌落混合于水滴中，混合均勻，鋪開到硬幣大小的面積。將載玻片涂有菌液的一面向上，背面在火焰上緩緩來回通過，以不燙手背為度。在已干燥，固定好的抹片上，滴加草酸銨結(jié)晶紫染色液覆蓋整個菌層，1min后水洗甩干；加革蘭氏碘液于抹片上，1min后水洗甩干；加95%的酒精脫色，過程中使抹片傾斜，直到流下的液體無色，水洗甩干；加苯酚復(fù)紅染色液復(fù)染1～3min，水洗，干燥；鏡檢。

鏡檢觀察到兩端鈍圓藍(lán)紫色的短小桿菌，單在或組成短鏈，也有的呈V形或按長軸平行并列排列（見圖1，2），且A、B的形態(tài)結(jié)構(gòu)都相似。

圖1 （A菌顯微鏡下的形態(tài)）

圖2 （B菌顯微鏡下的形態(tài)）

4.3 生化實驗

4.3.1 制備糖發(fā)酵培養(yǎng)基

將1.0g蛋白胨、0.5g氯化鈉加熱溶解于100ml蒸餾水中，測定矯正pH為7.6，過濾后加入0.1ml1.0%溴甲酚紫酒精溶液和0.5g水楊苷，然后分裝于小試管內(nèi)113℃高壓蒸汽滅菌20min。

4.3.2 實驗方法

將純培養(yǎng)的A、B分別接種到水楊苷發(fā)酵培養(yǎng)基內(nèi)，倒置放入37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。

4.3.3 實驗結(jié)果

培養(yǎng)24h后A、B培養(yǎng)基均變?yōu)辄S色，無氣泡產(chǎn)生。

5 鑒別診斷

5.1 新城疫

類似處：精神委頓，食欲減少或喪失，羽毛松亂，不愿走動，縮頸，翅翼下垂，雞冠和肉髯呈紫色，眼半閉或全閉，狀似昏睡。雙腿麻痹、跛行或站立不穩(wěn)，下痢。剖檢可見：腺胃乳頭腫脹、出血或潰瘍，十二指腸黏膜及小腸黏膜出血或潰瘍。

不同處：雞的新城疫往往以呼吸道癥狀開始，繼而下痢。呼吸道黏液增多，為排除黏液，常甩頭或吞咽。倒提時常從口角流出大量酸臭的暗灰色液體。排黃綠色或黃白色水樣稀便，有時混有少量血液，死亡率達(dá)90%以上。剖檢可見：產(chǎn)蛋雞常有卵黃泄漏到腹腔形成卵黃性腹膜炎，十二指腸黏膜及小腸黏膜有時可見到“島嶼狀或棗核狀潰瘍灶”。

5.2 神經(jīng)型馬立克氏病

類似處：病雞低頭或斜頸，站立不穩(wěn)，兩腿前后伸展，呈“劈叉”姿勢，翅膀下垂。剖檢可見：坐骨神經(jīng)紋路模糊，水腫。

不同處：神經(jīng)型馬立克氏病一般精神尚好，并且有食欲，但往往由于迷走神經(jīng)受損雞嗉囊麻痹或膨大，食物不能下行。飲不到水而脫水，吃不到飼料而衰竭，或被其他雞只踐踏，最后均以死亡而告終。

5.3 雞鏈球菌病

類似處：有傳染性，突發(fā)精神委頓，羽毛粗亂，冠髯發(fā)紫，頭頸彎曲，仰頭，腿部痙攣或兩腿軟弱無力。剖檢可見：心冠脂肪有出血點，肝腫大及肝有紫色瘀血斑和壞死灶，腎腫大。細(xì)菌培養(yǎng)時，在血清培養(yǎng)基上生長較好，而在麥康凱培養(yǎng)基上均不生長。糖酵解實驗中均能產(chǎn)酸。

不同處：雞鏈球菌病的病原為鏈球菌，部分病雞冠髯蒼白，腿部輕癱，跗跖關(guān)節(jié)腫大、跛行。足底皮膚組織壞死。部分病雞羽翅發(fā)炎、流分泌物，結(jié)膜發(fā)炎，流淚。剖檢可見：肝呈暗紫色，脾有出血性壞死，肺瘀血、水腫，喉干酪樣壞死，氣管和支氣管充滿黏液。無菌采取肝、脾血液涂片，革蘭氏染色后鏡檢，可見革蘭氏陽性的單個或短鏈狀排列的球菌。且雞鏈球菌可酵解甘露醇。

5.4 肉毒梭菌毒素中毒癥

類似處：群發(fā)，突然發(fā)病，精神萎靡，羽毛松亂，雙翅下垂，腿軟弱無力，下痢。剖檢可見腸道出血。細(xì)菌培養(yǎng)時，對營養(yǎng)要求不高，普通瓊脂培養(yǎng)基上均能生長。

不同處：肉毒梭菌毒素中毒癥的病因是采食含毒素的高蛋白腐敗性飼料而發(fā)病。病雞自腿向翅、頸、頭發(fā)生麻痹，頭頸無力，不能抬起，糞中含有大量的尿酸鹽。肉毒梭菌生化性狀不規(guī)律，不分解乳糖。

5.5 雞弓形蟲病

類似處：有傳染性，下痢，行動不穩(wěn)，彎頸仰頭，腿部抽搐。

不同處：病原為弓形蟲，患病雞雞冠蒼白，貧血，排白色稀糞，歪頭失明，后期麻痹。剖檢可見：心膜有圓形結(jié)節(jié)，腺胃壁增厚，小腸有結(jié)節(jié)且明顯增厚，脾有壞死灶。用腹腔液或組織涂片后鏡檢可見蟲體。

根據(jù)臨床癥狀，實驗室細(xì)菌分離，生化實驗，鏡檢結(jié)果并結(jié)合上述鑒別診斷的理論依據(jù)，本病例被確診為李氏桿菌感染。

6 治療

6.1 藥敏實驗

6.1.1 接種菌落

將A、B菌種分別涂滿犢牛血清培養(yǎng)基，每種菌需要涂滿兩個培養(yǎng)皿。每種菌均用10種常用抗生素（阿米卡星、頭孢氨芐、慶大霉素、青霉素、頭孢唑啉、多西環(huán)素、頭孢曲松、諾氟沙星、頭孢拉啶、氯霉素）進(jìn)行藥敏實驗。

6.1.2 貼紙片

用鑷子取紙片一張，貼在培養(yǎng)基表面，用鑷尖輕壓，使其貼平，紙片一旦貼上就不能再拿起，因為紙片中的藥物已經(jīng)擴(kuò)散到瓊脂中。紙片間距不小于24mm，紙片中心距平皿邊緣不小于15mm。貼好后，須在15min內(nèi)置35℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

6.1.3 培養(yǎng)

平板需在35℃培養(yǎng)箱內(nèi)單獨放置，不超過兩個疊放在一起，否則中間的平板達(dá)不到培養(yǎng)箱溫度而產(chǎn)生預(yù)擴(kuò)散作用，平板培養(yǎng)18～24h，讀取結(jié)果。（見圖3～6）

圖3 （A菌藥敏實驗）

圖4 （A菌藥敏實驗）

圖5 （B菌藥敏實驗）

圖6 （B菌藥敏實驗）

6.1.4 藥敏結(jié)果

依據(jù)抑菌圈直徑≤5mm視為不敏感；6mm≤抑菌圈直徑≤10mm為低度敏感；11mm≤抑菌圈直徑≤20mm為中度敏感；抑菌圈直徑≥21mm為高度敏感的藥物敏感度判定標(biāo)準(zhǔn)，詳細(xì)結(jié)果見表1

表1 選用的抗生素的抑菌圈直徑及敏感度

6.2 治療用藥

根據(jù)藥敏試驗的結(jié)果（見表1）建議雞場按以下方案進(jìn)行治療：對整個雞場用頭孢拉啶150mg/kg拌料，濃縮魚肝油粉按推薦量加倍，拌料喂服，病情嚴(yán)重者可酌情加量使用；連續(xù)用藥一周。

6.3 治療結(jié)果

用藥后定期通過電話回訪畜主，了解雞群治療效果，情況如下：

用藥2～3d后：雞群的死亡率有所下降，雞群整體采食量有所提升。

用藥4～5d后：雞群采食量幾乎恢復(fù)正常，只有個別弱雞死亡（適量增加雞群的飲水量，以加快藥物排泄）。

用藥6～7d后：雞群無死亡，整體精神狀態(tài)較好，產(chǎn)蛋率基本恢復(fù)。

7 小結(jié)與討論

（1）在細(xì)菌分離培養(yǎng)的實驗中，我們發(fā)現(xiàn)雞李氏桿菌可在普通瓊脂培養(yǎng)基中生長，犢牛血清培養(yǎng)基能更好地促進(jìn)其生長，而巧克力培養(yǎng)基不適合其生長，甚至抑制其生長。

（2）藥敏實驗中我們可以得出的結(jié)論是：該菌對阿米卡星、頭孢氨芐、頭孢唑啉、頭孢曲松、頭孢拉啶的敏感度較強(qiáng)，其中頭孢唑啉對其作用最強(qiáng)。而對慶大霉素、青霉素的敏感度中等。對多西環(huán)素、諾氟沙星、氯霉素幾乎不敏感。

（3）由于當(dāng)前養(yǎng)殖過程中抗生素的濫用和長期使用，大部分細(xì)菌都有較強(qiáng)的耐藥譜，治療藥物的選擇必須通過藥敏試驗來選擇。

（4）本病一般為散發(fā)或呈地方性流行，一般很少見典型發(fā)病和流行，臨床癥狀、病理變化易與馬立克氏?。ㄉ窠?jīng)型）、新城疫、雞鏈球菌病等混淆，不易確診，必須通過臨床診斷和實驗室檢測才能確診。

（5）本病主要發(fā)生在冬季和早春，劣質(zhì)、腐敗的飼料可成為該病的傳染源，被污染的水和土壤均可成為該病的傳染媒介，體內(nèi)寄生蟲或沙門氏菌感染亦可成為該病發(fā)生的誘因[8]。故加強(qiáng)飼養(yǎng)管理、搞好環(huán)境衛(wèi)生，有效消毒是預(yù)防本病的關(guān)鍵。

①飼料、飲水的管理

購買飼料成品或原料時應(yīng)注意檢查霉變情況，必要時可通過化驗進(jìn)行檢驗，運輸、保存的過程中應(yīng)注意防潮、防鼠、防鳥措施。水源周圍50m內(nèi)不得設(shè)置貯糞場，滲漏廁所。水井設(shè)在地勢高燥處，防止雨水、污水倒流引起污染。定期進(jìn)行水質(zhì)檢測和微生物及寄生蟲學(xué)檢查，發(fā)現(xiàn)問題及時處理。

②環(huán)境衛(wèi)生方面

冬季和早春，缺乏青飼料，天氣驟變均可成為該病發(fā)生的誘因。所以冬季、早春要注意畜舍的防寒保暖工作，尤其注意門窗角落，防止賊風(fēng)侵襲。病畜、死畜需及時隔離、處理，在處理死畜尸體時，不論采用何種方法，都必須將病畜、死畜的排泄物，各種廢棄物等一并進(jìn)行處理，以免健康畜禽接觸感染。畜禽舍內(nèi)需定期更換墊料。

③有效消毒

場地、用具可用3%碳酸，3%來蘇水，2%火堿，5%漂白粉等嚴(yán)格消毒。糞便可焚燒或消毒，需要消毒的糞便量較少時，可用2%～5%的有效氯的漂白粉溶液，20%石灰乳等。將污染的糞便與漂白粉或新鮮的生石灰混合，然后深埋于地下，埋的深度應(yīng)達(dá)2m左右。

④定期驅(qū)蟲

雞場內(nèi)的雞要定期做好驅(qū)蟲工作，爭取做到自繁自養(yǎng)、全進(jìn)全出的養(yǎng)殖模式。

該病目前尚無疫苗預(yù)防[6]

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[2]馬興樹.禽傳染病實驗診斷技術(shù)[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：111.

[3]黃銀云，胡新崗.禽病防治[M].北京：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)出版社，2012：4-7.

[4]羊建平，張君勝.動物病原體檢測技術(shù)[M].北京：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2013：72-73.

[5]丘曉花，馮明英，李燕.柑橘皮提取物體外抑菌活性的研究[J].中國民族民間醫(yī)藥，2011，24（10）：5-6.