翁海松，陳 芳

（1.浙江迪安司法鑒定中心，浙江 杭州310000；2.浙江漢博司法鑒定中心，浙江 杭州310000）

親子鑒定中胚胎融合嵌合體1例

翁海松1，陳 芳2

（1.浙江迪安司法鑒定中心，浙江 杭州310000；2.浙江漢博司法鑒定中心，浙江 杭州310000）

法醫(yī)遺傳學(xué)；親子鑒定；嵌合體

1 案 例

1.1 簡(jiǎn)要案情

本中心受理因孩子辦理出生證明需要而進(jìn)行的親子鑒定1例，征得當(dāng)事人同意，采取母親、父親及孩子（男孩）血樣，進(jìn)行STR分型實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示，孩子與父親之間存在親生血緣關(guān)系，而母親與孩子之間不存在親生血緣關(guān)系，因此進(jìn)一步采集母親口腔拭子及帶毛囊的毛發(fā)進(jìn)行STR分型實(shí)驗(yàn)，母親靜脈血進(jìn)行染色體核型檢測(cè)。詢(xún)問(wèn)當(dāng)事人，均未曾有輸血史，骨髓移植及放療化療史等，母親外觀正常，第二性征明顯。

1.2 檢驗(yàn)方法

1.2.1 染色體核型檢測(cè)

采集母親外周血淋巴細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，按常規(guī)方法[1]制備染色體，采用G顯帶，然后在顯微鏡下對(duì)染色體進(jìn)行計(jì)數(shù)及核型分析。

1.2.2 DNA提取

按照常規(guī)Chelex-100法[2]分別提取父親、母親及孩子檢材DNA，先后采用Golden e ye?DNA身份鑒定系統(tǒng)20A試劑盒［基點(diǎn)認(rèn)知技術(shù)（北京）有限公司］、EX22熒光檢測(cè)試劑盒（無(wú)錫中德美聯(lián)技術(shù)有限公司）對(duì)父親、母親及孩子提取的DNA樣本進(jìn)行常染色體STR基因座分型檢測(cè)，隨后采用Golden e ye?DNA身份鑒定系統(tǒng)20Y試劑盒［基點(diǎn)認(rèn)知技術(shù)（北京）有限公司］對(duì)父親、母親及孩子提取的DNA樣本進(jìn)行YSTR分型檢測(cè)，相應(yīng)的擴(kuò)增體系和擴(kuò)增程序參照試劑盒操作手冊(cè)。

1.2.3 DNA分型

采用9700型PCR儀（美國(guó)AB公司）對(duì)父親、母親及孩子提取的DNA樣本進(jìn)行PCR擴(kuò)增，隨后使用3100xl基因分析儀（美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司）對(duì)DNA擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳分離，最后使用Gene-Mapper?ID v3.2.1軟件（美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司）對(duì)電泳數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理，實(shí)驗(yàn)過(guò)程參照本中心的相關(guān)作業(yè)指導(dǎo)書(shū)進(jìn)行。

1.3 檢驗(yàn)結(jié)果

1.3.1 染色體核型分析

母親外周血淋巴細(xì)胞染色體核型分析檢測(cè)結(jié)果為46，XY細(xì)胞系（圖1）。

圖1 母親染色體核型

1.3.2 STR基因型分析

在22個(gè)常染色體STR分型檢測(cè)中，父親及孩子血液樣本常染色體STR基因座的分型結(jié)果見(jiàn)表1。母親的血樣與帶毛囊的毛發(fā)在22個(gè)STR基因座分型結(jié)果不一致，且母親的血樣檢材在Amelogenin性別基因座分型為XY，峰高比為1∶1，提示為男性，帶毛囊的毛發(fā)檢材在Amelogenin性別基因座分型為XX，提示為女性。口腔拭子檢材的STR基因座為4等位基因，其基因分型為血樣和毛發(fā)檢材分型的嵌合（圖2），Amelogenin性別基因座分型為XY，且峰高比為2∶1。上述樣本在22個(gè)常染色體STR基因座和Amelogenin基因座的分型結(jié)果見(jiàn)表1。

在20個(gè)Y-STR分型檢測(cè)中，父親與孩子分型檢測(cè)結(jié)果一致，母親口腔拭子和血樣Y-STR分型檢測(cè)結(jié)果一致，帶毛囊的毛發(fā)檢材未檢測(cè)出Y-STR分型，基因分型結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 母親血樣、口腔拭子、帶毛囊的毛發(fā)及父親、孩子（男孩）血樣的常染色體STR分型結(jié)果

圖2 母親口腔拭子常染色體STR分型

表2 母親血樣、口腔拭子及父親、孩子（男孩）血樣Y-STR分型結(jié)果

2 討 論

在生物學(xué)上，嵌合體分同源嵌合體和異源嵌合體。同源嵌合體大部分由自身染色體畸變或基因突變導(dǎo)致，且嵌合成分來(lái)自同一受精卵。嵌合成分來(lái)自不同的受精卵所產(chǎn)生的嵌合體為異源嵌合體，可分為孿生子異源嵌合體[3]、人造異源嵌合體和四配子異源嵌合體。其中孿生子異源嵌合體主要是由于胎盤(pán)的融合或子宮內(nèi)造血干細(xì)胞的相互交換而導(dǎo)致的，但僅限于表現(xiàn)為血細(xì)胞中有兩種不同來(lái)源合子的細(xì)胞嵌合；大部分人造異源嵌合體是醫(yī)源性的，是由于輸血、器官移植或異源骨髓移植導(dǎo)致的，也可能由于其他原因?qū)е?；四配子異源嵌合體是由兩個(gè)受精卵融合并發(fā)育成為一個(gè)個(gè)體導(dǎo)致的，這種嵌合個(gè)體在遺傳學(xué)上含有兩種獨(dú)立的細(xì)胞系，如46，XX/46，XY細(xì)胞系。人類(lèi)四配子異源嵌合體目前文獻(xiàn)報(bào)道已發(fā)現(xiàn)的有4種形成機(jī)制[4]。第一種是由于兩個(gè)胚胎融合形成嵌合體現(xiàn)象；第二種是由于母親生殖細(xì)胞孤雌分裂，形成兩個(gè)相同的配子，最后通過(guò)雙受精作用形成嵌合體現(xiàn)象；第三種是由于產(chǎn)雄孤雌生殖而形成嵌合體現(xiàn)象；第四種是由于卵子和第二極體通過(guò)雙受精作用形成嵌合體現(xiàn)象。筆者曾在親子鑒定過(guò)程中發(fā)現(xiàn)兩種嵌合體現(xiàn)象，分別為兩個(gè)胚胎融合和母親生殖細(xì)胞孤雌分裂形成兩個(gè)相同的配子雙受精[5]形成嵌合體的案例。兩個(gè)胚胎融合患者常染色體STR檢測(cè)顯示含有父源和母源各兩個(gè)不同的等位基因，也就是說(shuō)四個(gè)等位基因分別來(lái)源于四個(gè)配子，此案例為此情形，也即第一種形成機(jī)制導(dǎo)致的。2002年，YU等[6]也報(bào)道了1例由胚胎融合導(dǎo)致的嵌合體案例。隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)輔助生殖技術(shù)的發(fā)展，體外受精和卵胞質(zhì)內(nèi)單精子注射等技術(shù)在一定程度上增加了胚胎融合的風(fēng)險(xiǎn)，使得嵌合體現(xiàn)象更為常見(jiàn)[7]。

本案例中母親口腔拭子STR檢測(cè)結(jié)果顯示有四個(gè)等位基因，并且為毛發(fā)分型和血樣分型的嵌合，因此證明口腔拭子有兩個(gè)細(xì)胞群，且核型為46，XX/46，XY，為四配子異源嵌合體。這種情況可解釋為其父親的兩個(gè)精子（X精子和Y精子）同時(shí)與其母親的兩個(gè)卵子結(jié)合，形成兩個(gè)受精卵，然后兩個(gè)受精卵融合成一個(gè)受精卵，從而形成有兩個(gè)細(xì)胞系的四配子異源嵌合體。其中46，XX細(xì)胞群發(fā)育成毛發(fā)，46，XY細(xì)胞群發(fā)育成血細(xì)胞，兩個(gè)細(xì)胞群46，XX/46，XY共同發(fā)育為口腔脫落細(xì)胞。由兩個(gè)受精卵融合后發(fā)育成的個(gè)體，兩個(gè)細(xì)胞群在口腔細(xì)胞中表現(xiàn)出來(lái)，且血細(xì)胞沒(méi)有兩個(gè)細(xì)胞群的這種四配子異源嵌合體案例目前報(bào)道較少見(jiàn)[8]。

人類(lèi)嵌合體現(xiàn)象隨著醫(yī)學(xué)輔助生殖技術(shù)的不斷發(fā)展而越來(lái)越常見(jiàn)，在親子鑒定實(shí)踐中，值得注意的是，當(dāng)嵌合體者的血液中只存在1種細(xì)胞群的時(shí)候，容易給出錯(cuò)誤的鑒定意見(jiàn)。在親子鑒定或個(gè)體識(shí)別中，如若遇到多等位基因現(xiàn)象，應(yīng)該引起注意，首先排除實(shí)驗(yàn)室污染導(dǎo)致，可通過(guò)反復(fù)實(shí)驗(yàn)，更換不同試劑盒擴(kuò)增來(lái)驗(yàn)證，若仍為多等位基因現(xiàn)象，分析其發(fā)生機(jī)制，判斷為嵌合體再作出定論，以保證鑒定意見(jiàn)的準(zhǔn)確性和科學(xué)性。

[1]SEABRIGHT M.A rapid banding technique for human chromosomes[J].Lancet，1971，2（7731）：971-972.

[2]公安部物證鑒定中心.法庭科學(xué)DNA實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)規(guī)范：GA/T 383-2014[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2014.

[3]VAN DIJK B A，BOOMSMA D I，DE MAN A J. Blood group chimerism in human multiple births is not rare[J].Am J Med Genet，1996，61（3）：264-268.

[4]MALAN V，VEKEMANS M，TURLEAU C.Chimera and other fertilization errors[J].Clin Genet，2006，70（5）：363-373.

[5]陳芳，陳儉，付穎，等.親子鑒定中四配子異源嵌合體報(bào)道1例[J].中國(guó)司法鑒定，2014（4）：120-125.

[6]YU N，KRUSKALL M S，YUNIS J J，et al.Disputed maternity leading to identification of tetragametic chimerism[J].N Engl J Med，2002，346（20）：1545-1552.

[7]FRIEDLER S，MASHIACH S，LAUFER N.Births in Israel resulting from in-vitro fertilization/embryo trans-fer，1982-1989：National Registry of the Israeli Association for Fertility Research[J].Hum Reprod，1992，7（8）：1159-1163.

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DF795.2

B

10.3969/j.issn.1004-5619.2017.04.034

1004-5619（2017）04-0448-04

2017-04-26）

（本文編輯：張素華）

翁海松（1985—），男，主要從事法醫(yī)物證學(xué)鑒定；E-mail：wenghs@dazd.cn

陳芳，女，主檢法醫(yī)師，主要從事法醫(yī)物證學(xué)鑒定；E-mail：chen-fang@zju.edu.cn