盧志凌 福建省龍海市港尾畜牧獸醫(yī)站 福建龍海 363100

母犬發(fā)情周期各階段陰道上皮細(xì)胞的種類和形態(tài)

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在母犬發(fā)情周期的四個階段分別采集其陰道分泌物，涂片、染色、鏡檢，觀察母犬每個階段陰道上皮細(xì)胞的種類和形態(tài)特征，為陰道涂片法的應(yīng)用提供有效的試驗(yàn)依據(jù)。

母犬 上皮細(xì)胞 配種時機(jī)

Abstractvaginal discharge of female dog in the four stages of estrus cycle collected respectively,than smear,stain,microscopic examination.Observe species and morphology characteristic of vaginal epithelial cells in each stages,to provide effective experimental basis for the application of vaginal smear method.

Key wordsFemale dog The epithelial cells Breeding time

母犬發(fā)情周期平均為6個月，排卵時間變化范圍較大，難以確定其準(zhǔn)確的配種時間。陰道涂片法是鑒定母犬發(fā)情的一種有效方法。母犬的發(fā)情周期分為發(fā)情前期、發(fā)情期、發(fā)情后期及間情期[1]。在發(fā)情周期里，由于生殖激素的作用，陰道上皮細(xì)胞的種類和形態(tài)逐漸發(fā)生改變。通過鏡檢發(fā)情前期、發(fā)情期、發(fā)情后期和間情期四個不同時期陰道上皮細(xì)胞的種類和形態(tài)，確定當(dāng)陰道上皮細(xì)胞呈現(xiàn)何種形態(tài)特征時，選擇最佳配種時機(jī)。

1 試驗(yàn)動物

選取體格狀況良好、24月齡成年貴賓母犬。

2 方 法

先通過觀察母犬陰道出血、陰道形態(tài)以及公犬試情的方法，初步劃分其發(fā)情前期、發(fā)情期、發(fā)情后期及間情期，劃分情況見表1。每個時期采集母犬陰道上皮細(xì)胞，涂片，經(jīng)瑞氏染色，鏡檢。

3 結(jié) 果

通過觀察，當(dāng)母犬陰道開始出現(xiàn)血樣分泌物，且不接受交配，此時母犬進(jìn)入發(fā)情前期，該期涂片特征見圖1-圖2。一般可看到大量的紅細(xì)胞分布；有些犬不表現(xiàn)很明顯的發(fā)情出血，涂片上則看不到大量紅細(xì)胞。在發(fā)情前期的初期，涂片上的上皮細(xì)胞主要是副基細(xì)胞和小中間細(xì)胞，隨后副基細(xì)胞和小中間細(xì)胞逐漸減少，大中間細(xì)胞及角化上皮細(xì)胞的比例逐漸增加，偶見白細(xì)胞。

表1 母犬發(fā)情周期各階段情況

當(dāng)母犬愿意接受公犬交配時，母犬進(jìn)入發(fā)情期，該期涂片特征見圖3-圖4。發(fā)情期涂片上觀察到的主要細(xì)胞為角化上皮細(xì)胞，根據(jù)角化程度的不同，有些角化上皮細(xì)胞還含有固縮的核，而另一些角化上皮細(xì)胞的細(xì)胞核則完全消失。紅細(xì)胞的數(shù)量由于犬的個體差異也各有不同，有些犬的發(fā)情期陰道涂片上看不到紅細(xì)胞，而有些則仍可觀察到一定數(shù)量的紅細(xì)胞，甚至紅細(xì)胞一直持續(xù)到發(fā)情后期的早期還存在。在發(fā)情期的末期，角化上皮細(xì)胞呈團(tuán)塊狀或片狀聚集，除角化上皮細(xì)胞外，一般看不到其他細(xì)胞。

圖1 發(fā)情前期涂片（瑞氏染色，×1 000）

圖2 發(fā)情前期涂片（瑞氏染色，×1 000）

圖3 發(fā)情期涂片（瑞氏染色，×1 000）

圖4 發(fā)情期涂片（瑞氏染色，×1 000）

用公犬試情，母犬開始拒絕公犬交配時，母犬進(jìn)入發(fā)情后期，該期涂片特征見圖5-圖6。發(fā)情后期陰道涂片的主要特征為可觀察到大量白細(xì)胞。在發(fā)情后期的早期，可看到小中間細(xì)胞及大中間細(xì)胞[2]。而發(fā)情后期的晚期，白細(xì)胞的數(shù)量減少，副基細(xì)胞的數(shù)量增加，且有時還可觀察到細(xì)胞碎片。

圖5 發(fā)情后期涂片（瑞氏染色，×1 000）

圖6 發(fā)情后期涂片（瑞氏染色，×1 000）

由于間情期的開始沒有比較明顯的行為特征，所以，按照母犬發(fā)情后期持續(xù)的時間推斷間情期何時開始。發(fā)情后期持續(xù)10周，所以，從發(fā)情后期開始的時間算起，大致10周以后，母犬進(jìn)入間情期，該期涂片特征見圖7。乏情期陰道涂片上主要是小中間細(xì)胞及副基細(xì)胞，白細(xì)胞幾乎不可見。

圖7 乏情期涂片（瑞氏染色，×1 000）

4 討 論

應(yīng)用陰道涂片法時，正確的采樣才能準(zhǔn)確判斷最佳配種時機(jī)[3]。通常，應(yīng)當(dāng)在陰道的深部進(jìn)行取樣，因?yàn)殛幍郎畈可掀ぜ?xì)胞的角化程度受雌激素的影響較大。如果母犬站立保定，取樣時，棉簽水平深入陰道，然后往斜上方深入陰道深部取樣。同時，取樣時還應(yīng)避免棉簽插入陰蒂窩或只停留在前庭，因?yàn)檫@些部位的上皮中通常含有角質(zhì)化細(xì)胞，這些細(xì)胞將影響鏡檢結(jié)果。

染色時間掌控得好，染色效果越好。起初，瑞氏染液甲液浸潤50 s后，沖洗；再加乙液5 min后清洗。后來發(fā)現(xiàn)這樣染色顏色過深，改進(jìn)為甲液浸潤40 s，乙液處理5 min 30 s。在染色的最后一步均用流水充分沖洗玻片，以盡量除去玻片上的染色顆粒，以免其對玻片觀察造成干擾。

5 結(jié) 論

運(yùn)用陰道涂片法，當(dāng)染色涂片中觀察到的主要是角化上皮細(xì)胞，且出現(xiàn)核固縮和無細(xì)胞核的角化上皮細(xì)胞時，是母犬的最佳配種時機(jī)，此時對母犬進(jìn)行配種，受孕率最高。

[1]馬大君,隋吉仁.母犬發(fā)情周期及注意事項(xiàng)[J].中國工業(yè)犬業(yè),2005(6):19-20.

[2]張洪京.肉犬何時配種好[J].農(nóng)家參謀,2010(5):26.

[3]王歡,趙獻(xiàn)鋒.家養(yǎng)母犬的最佳配種時機(jī)[J].當(dāng)代畜禽養(yǎng)殖業(yè),2009(6):59.

Species and morphology of vaginal epithelial cells in each stages of female dog estrus cycle

Lu Zhiling
（Gangwei county animal husbandry and veterinary medicine station,Fujian Longhai 363100）

A

1003-4331（2017）05-0003-03