蝴蝶蘭細(xì)菌性軟腐病綠色防治藥劑篩選試驗(yàn)

沈會芳，蒲小明，張景欣，孫大元，黃 寧，林壁潤

（廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所/廣東省植物保護(hù)新技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510640）

蝴蝶蘭細(xì)菌性軟腐病綠色防治藥劑篩選試驗(yàn)

沈會芳，蒲小明，張景欣，孫大元，黃 寧，林壁潤

（廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所/廣東省植物保護(hù)新技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510640）

細(xì)菌性軟腐病是蝴蝶蘭生產(chǎn)中重要的病害，常造成嚴(yán)重?fù)p失。為有效控制該病害的發(fā)生危害，從幾種低毒殺菌劑中篩選綠色高效防治藥劑。室內(nèi)生物活性測定結(jié)果表明，王銅（氧氯化銅）對病原菌的最小抑制濃度為500 μg/mL；離體葉片法測定結(jié)果表明，氧氯化銅有效成分為125、250、500 μg/mL時，防治效果為73.85%、89.47%和100%；盆栽試驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)采用先施藥再接種病原菌的方法時，500 μg/mL氧氯化銅藥后3、6、9 d防治效果分別為89.92%、83.62%和75.89%。因此，氧氯化銅可作為蝴蝶蘭軟腐病的綠色防治藥劑。

蝴蝶蘭；細(xì)菌性軟腐??；殺菌劑；毒力測定；藥效試驗(yàn)；氧氯化銅

Abstract：Bacterial soft rot is an important disease of phalaenopsis，and can cause serious losses. In order to control the disease，the effective chemical germicides were screened. The minimum inhibitory concentration of copper oxychloride on Dickeya dieffenbachiae was 500 μg/mL by bioactivity determination. The control effects of 125 μg/mL，250 μg/mL，500 μg/mL copper oxychloride were 73.85%，89.47% and 100% respectively by detached leaf method. The different concentrations of copper oxychloride were sprayed before inoculating pathogen in pot trials. The control effects of 500 μg/mL copper oxychloride were 89.92%，83.62%，75.89% at the third，sixth and ninth day after spraying. So copper oxychloride could be recommended as the chemical germicide in controlling the soft rot of phalaenopsis.

Key words：phalaenopsis；bacteria soft rot；bactericide；toxicity determination；flied experiment；copper oxychloride

蝴蝶蘭（Phalaenopsis）是蘭科蝴蝶蘭屬花卉，其品種花色多、花期長，廣受人們的喜愛，有“蘭花皇后”的美譽(yù)，是重要的室內(nèi)欣賞栽培花卉品種。近年來，隨著蝴蝶蘭需求量增加，設(shè)施栽培面積逐步擴(kuò)大，蝴蝶蘭病蟲害發(fā)生面積也不斷擴(kuò)大。軟腐病是蝴蝶蘭種植中常見的細(xì)菌病害，在高溫高濕環(huán)境下，病害發(fā)展迅速，極難防治，常造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。據(jù)統(tǒng)計，自貴陽市引種蝴蝶蘭以來，在夏秋兩季，細(xì)菌性軟腐病病棚率 82.3%，病株率 52.7%，病葉率 9.4%［1-2］。引起軟腐病的病原菌主要是Dickeya dieffenbachiae（異名Pectobacterium chrysanthemi）［3］。

細(xì)菌性軟腐病菌寄主范圍較廣，可為害茄科、十字花科等多種作物。利用生防菌防治軟腐病取得了一定效果，如日本利用Lactobacillus plantarum 防治大白菜軟腐病菌，可有效減少發(fā)病率［4］。但國內(nèi)細(xì)菌性軟腐病的防治主要依靠化學(xué)藥劑。目前防治細(xì)菌病害包括軟腐病的藥劑品種較少，主要有銅制劑、抗生素類殺菌劑等［5-6］。張立微等檢測7種農(nóng)藥對芫荽軟腐病菌抑菌活性，其中72%農(nóng)用硫酸鏈霉的抑菌活性最高，最小抵制濃度為0.031%［7］。趙辰瑞發(fā)現(xiàn)在4種農(nóng)用抗生素中，梧寧霉素和中生菌素對白菜軟腐病的防治效果較好［8］?？荛L福等研究表明魔芋播種前使用農(nóng)用鏈霉素浸種對軟腐病有較好的預(yù)防作用，防效達(dá) 46.16%，且對魔芋的出苗、株高、葉盤直徑等有明顯促進(jìn)作用［9］。蒲小明等盆栽試驗(yàn)結(jié)果顯示：88%水合霉素可溶粉劑320 μg/mL和6% 菌毒清可濕性粉劑160 μg/mL處理10 d 后對香蕉細(xì)菌性軟腐病的防效分別為78.03%和81.08%［10］。國內(nèi)也對蘭花的軟腐病防治開展研究，秦建彬等證實(shí)新霉素對蘭花軟腐病的防效較好，植株換盆前進(jìn)行藥劑灌根10 d的防效高達(dá)92.1%［11］。李艷梅等研究了24 種中草藥提取液對蝴蝶蘭軟腐病菌的抑菌活性，其中烏梅－五倍子提取液 1∶3 混合抑菌效果最好［12］。尤毅等測定了13種殺菌劑對蝴蝶蘭軟腐病菌的抑菌活性，蒜素乳油、細(xì)美葉枯唑、氯溴異氰尿酸、硫酸鏈霉素和四環(huán)素對病原菌具有較強(qiáng)的毒力［13］。這些研究為科學(xué)防治軟腐病提供依據(jù)，但在產(chǎn)上調(diào)查發(fā)現(xiàn)，常用化學(xué)藥劑很難控制蝴蝶蘭細(xì)菌性軟腐病的發(fā)生發(fā)展。為有效防治該病害，我們進(jìn)行了該病害綠色防治藥劑篩選試驗(yàn)，并提出其田間精準(zhǔn)使用技術(shù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試菌株：蝴蝶蘭細(xì)菌性軟腐病菌Dickeya dieffenbachiae（原名為Erwinia chrysanthemi pv dieffenbachiae），保存于廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所［2］。

供試培養(yǎng)基：肉汁凍培養(yǎng)液（NA）：牛肉浸膏3 g，酵母浸膏1 g，蛋白胨5 g，葡萄糖10 g，蒸餾水1 000 mL，分裝于三角瓶，121℃滅菌30 min后備用。

供試藥劑：72%硫酸鏈霉素可濕性粉劑（1 600萬單位），成都普惠生物工程有限公司；青霉素鉀（400萬單位），河北遠(yuǎn)征藥業(yè)有限公司；2%春雷霉素水劑，江門市植保有限公司；3%中生菌素可濕性粉劑，福建凱力生物制品有限公司；30%王銅（氧氯化銅）懸浮劑，廣東大豐植保科技有限公司；47%春雷霉素·王銅可濕性粉劑（春雷霉素有效成分為2%，王銅為45%），日本北興化學(xué)工業(yè)株式會社（江門市植保有限公司分裝）；25%嘧菌酯懸浮劑，河北省農(nóng)藥化工有限公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 不同藥劑對蝴蝶蘭軟腐病菌的最小抑制濃度（MIC） 參照蒲小明等［10］的方法，采用最小濃度抑制法（MIC）將蝴蝶蘭軟腐病菌接種于NA培養(yǎng)液中，在32℃轉(zhuǎn)速150 r/min培養(yǎng)36 h，為試驗(yàn)用病原菌液。取滅菌后玻璃試管（18 mm×200 mm），在無菌條件下，分別加NA培養(yǎng)液4.8 mL。將供試藥劑用無菌水梯度稀釋成系列濃度，每濃度藥液取0.1 mL加入玻璃試管，使試管培養(yǎng)液中殺菌劑有效成分濃度分別為 1000、500、250、125、62.5、31.2、15.6、7.8、3.9、1.9、1.0 μg/mL，對照加入0.1 mL無菌水，然后在試管中加入病原菌液0.1 mL，每個處理5 次重復(fù)。32℃培養(yǎng)36 h 后，觀察無細(xì)菌生長的最低濃度，即為蝴蝶蘭細(xì)菌性軟腐病菌的MIC。

1.2.2 采用離體葉片法測定不同藥劑對蝴蝶蘭軟腐病的防治效果 剪取同一蝴蝶蘭品種中下部葉片，用70%酒精將葉片及葉柄傷口擦拭一遍，自然晾干。將病原菌株接種于NA培養(yǎng)液，在32℃轉(zhuǎn)速150 r/min培養(yǎng)36 h，用無菌水配制成106～107CFU/mL的細(xì)菌懸浮液。供試藥劑用無菌水梯度稀釋成供試濃度，將蝴蝶蘭葉片浸泡在不同濃度藥液中1 min，對照放入無菌水內(nèi)浸泡，取出自然晾干。用無菌大頭針在葉片中央密集輕刺5下，在針刺處滴0.2 mL細(xì)菌懸浮液，每個處理4次重復(fù)，每個重復(fù)5片葉，放入磁盤中保濕密封，30℃黑暗培養(yǎng)。當(dāng)葉片出現(xiàn)水漬狀病斑時，每24 h觀察并記錄葉片發(fā)病情況。

蝴蝶蘭葉片軟腐病病害分級標(biāo)準(zhǔn)：0級，針刺處無水漬狀病斑；1級，針刺處見水漬狀病斑，病斑不擴(kuò)散到針刺范圍外0.2 cm距離外；2級，病斑擴(kuò)散到針刺范圍外0.2 cm距離外，同時病斑面積≤25%葉片面積；3級，25%葉片面積＜病斑面積≤50%葉片面積；4級，50%葉片面積＜病斑面積≤75%葉片面積；5級，75%葉片面積＜病斑面積。

1.2.3 30%氫氧化銅懸浮劑對蝴蝶蘭軟腐病盆栽防治效果 選擇對離體蝴蝶蘭葉片軟腐病防治效果較好的30%王銅（氧氯化銅）進(jìn)行盆栽防治試驗(yàn)。盆栽試驗(yàn)采用先接種病原菌后噴施藥劑和先噴施藥劑后接種病原菌兩種方法進(jìn)行。

先接種病原菌后噴施藥劑法：選擇生長期基本一致的蝴蝶蘭植株，在每植株中部兩片葉片中心用滅菌針密集輕刺5次，滴上0.2 mL濃度為106～107CFU/mL細(xì)菌懸浮液，用脫酯棉沾無菌水覆蓋保濕，置于28～30℃的大棚內(nèi)保濕培養(yǎng)24 h，此時，葉片開始出現(xiàn)直徑0.2 cm左右的水漬狀病斑，取下保濕脫酯棉。將30%氧氯化銅用無菌水配制成有效成分為250 μg/mL和500μg/ mL兩個濃度，用噴霧器均勻噴在蝴蝶蘭植株葉片正面及反面，對照噴灑無菌水，每個處理3次重復(fù)，每個重復(fù)10株蝴蝶蘭。噴藥后每24 h按病害葉片分級標(biāo)準(zhǔn)觀察記錄病害發(fā)生情況，計算病情指數(shù)及防治效果。

先噴藥后接種法：先噴施藥劑，等植株葉片自然晾干后，再按以上方法接種病原菌，在大棚內(nèi)保濕培養(yǎng)24 h后，取下脫脂棉，每24 h觀察記錄病害發(fā)生情況，計算病情指數(shù)及防治效果。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同藥劑對蝴蝶蘭軟腐病菌的最小抑制濃度（MIC）

由表1可見，不同藥劑對蝴蝶蘭軟腐病菌的最小抑制濃度差異較大，其中硫酸鏈霉素和青霉素鉀對病原菌的抑制能力較強(qiáng)，最小抑制濃度分別為3.9、7.8 μg/mL。春雷霉素和中生菌素的最小抑制濃度為62.5 μg/mL，氧氯化銅為500 μg/mL，嘧菌酯在1000 μg/mL不能完全抑制病原菌生長?？梢姾m軟腐病菌對硫酸鏈霉素和青霉素鉀敏感，對氧氯化銅和嘧菌酯不敏感。

表1 不同藥劑對蝴蝶蘭軟腐病菌的生物活性（廣州，2016-04）

2.2 采用離體葉片法測定不同藥劑對蝴蝶蘭軟腐病的防治效果

從表2可以看出，氧氯化銅懸浮劑對軟腐病的防治效果最好，有效成分為125、250、500 μg/mL時，防治效果分別為73.85%、89.47%和100%。其次是春雷霉素·王銅可濕性粉劑混配藥劑，有效成分為500 μg/mL時，防治效果可達(dá)65.96%，但遠(yuǎn)低于氧氯化銅懸浮劑。其他藥劑如硫酸鏈霉素、青霉素鉀、春雷霉素、中生菌素、嘧菌酯的防治效果相對較差。

2.3 30%氫氧化銅懸浮劑對盆栽蝴蝶蘭軟腐病防治效果

先接種病菌再施藥的防治效果見表3，30%氧氯化銅懸浮劑在有效成分為250 μg/mL時，藥后3、6、9 d盆栽防治效果分別為 62.44%、53.56%和50.92%。有效成分為500 μg/mL時，藥后3、6、9 d防治效果分別為73.98%、66.92%和63.44%。表明 30%氧氯化銅懸浮劑在病害發(fā)生后仍有較好的防治效果。

表2 不種藥劑對蝴蝶蘭離體葉片軟腐病的防治效果（%；廣州，2016-06）

表3 30%氧氯化銅先接種后施藥對蝴蝶蘭軟腐病的盆栽防治效果（廣州，2016-08）

先施藥再接種病菌的防治效果見表4，氧氯化銅有效成分為250、500 μg/mL時，藥后3、6、9 d盆栽防治效果均在 67%以上，其中有效成分為500 μg/mL時，藥后3、6 d防治效果均在80%以上，分別為89.92%和83.62%，藥后9 d，其防治效果仍達(dá)到75.89%，可見30%氧氯化銅懸浮劑對蝴蝶蘭植株有持續(xù)的保護(hù)作用。

盆栽防治結(jié)果顯示，在先施藥再接種病菌處理時，30%氧氯化銅懸浮劑對病害的防效明顯高于先接種病原菌再施藥的防效，表明30%氧氯化銅懸浮劑對蝴蝶蘭植株有較好的保護(hù)作用，可有效預(yù)防蝴蝶蘭軟腐病的發(fā)生。因此建議在蝴蝶蘭軟腐病未發(fā)生或剛發(fā)生時噴施氧氯化銅制劑，以預(yù)防病害的發(fā)生和擴(kuò)散。

表4 30%氧氯化銅先施藥后接種對蝴蝶蘭軟腐病的盆栽防治效果（廣州，2016-09）

3 結(jié)論與討論

細(xì)菌性軟腐病是蝴蝶蘭生產(chǎn)上的重要病害，在高溫高濕條件下發(fā)展迅速，篩選高效防治藥劑成為該病害防治的當(dāng)務(wù)之急。本研究結(jié)果表明硫酸鏈霉素及青霉素鉀對蝴蝶蘭軟腐病菌的抑制能力較強(qiáng)，廣譜殺菌劑氧氯化銅和嘧菌酯對病原菌的抑制效果較差。尤毅等的研究也表明：硫酸鏈霉素和四環(huán)素對蝴蝶蘭軟腐菌具有較強(qiáng)的毒力，廣譜殺菌劑咪酰胺及銅制劑三元硫酸銅對病原菌基本無抑制作用。但尤毅等認(rèn)為因藥劑的作用方式不同，有的藥劑并非直接作用于病原細(xì)菌，在抑菌方面表現(xiàn)較差，但可能在大田有較好的防治效果［13］。

采用離體葉片法進(jìn)行病害防治試驗(yàn)，結(jié)果顯示30%氧氯化銅懸浮劑對蝴蝶蘭細(xì)菌性軟腐病的防治效果最好，有效成分為125、250、500 μg/mL時，其防治效果可達(dá)73.85%、89.47%和100%。而硫酸鏈霉素、青霉素鉀和復(fù)配制劑春雷霉素·王銅的防治效果均遠(yuǎn)低于氧氯化銅。前期研究證明離體葉片病害防治試驗(yàn)與田間病害防治試驗(yàn)結(jié)果基本一致，因此選用防治效果較好的30%氧氯化銅懸浮劑進(jìn)行大棚內(nèi)盆栽防治試驗(yàn)。盆栽試驗(yàn)結(jié)果表明30%氧氯化銅懸浮劑對蝴蝶蘭細(xì)菌性軟腐病有較好防治作用，可用于田間大棚內(nèi)蝴蝶蘭軟腐病的防治

銅制劑是防治植物細(xì)菌病害的主要藥劑，對柑橘潰瘍等細(xì)菌病害有較好的防治效果［14］。銅制劑主要起保護(hù)作用，其產(chǎn)生的銅顆?？烧掣皆谥参锶~片表面，將病菌與其侵入的途徑氣孔、水孔等隔開，形成物理性保護(hù)屏障［15］。因此，氧氯化銅對軟腐病菌的直接抑制活性雖然較低，但在離體葉片試驗(yàn)中卻能有效控制病害的發(fā)生發(fā)展。進(jìn)行盆栽試驗(yàn)時，在先噴藥劑后接種和先接種后噴藥劑兩種處理下，氧氯化銅對軟腐病害的防治效果均較好，其中在病害發(fā)生前噴施藥劑的防治效果尤為突出。杜啟蘭［16］的研究也證明氧氯化銅對病害有較好的防治作用。氧氯化銅直接殺菌作用有限，但對植株有較好的保護(hù)作用，因此建議在蝴蝶蘭種植期內(nèi)，當(dāng)氣溫及濕度相對較高時，先噴施氧氯化銅預(yù)防軟腐病的發(fā)生。在病害發(fā)生初期，及時噴施氧氯化銅，既防治病害又保護(hù)健康植株，可有效限制病害傳播漫延，減少損失。

［1］ 刁平芬，王春華，李安達(dá)，等. 蝴蝶蘭軟腐病的發(fā)生規(guī)律及防治技術(shù)［J］. 植物醫(yī)生，2006，19（2）：24.

［2］ 李娟. 蝴蝶蘭軟腐病的防治［J］. 現(xiàn)代園藝，2016（9）：162-163.

［3］ Zhou J N，Lin B R，Shen H F，et al. First report of soft rot of phalaenopsis aphrodita caused by Dickey dieffenbachiae in china［J］. Plant Disease，2012，96（5）：760.

［4］ Kazuhisa T，Gento T，Miyako H，et al. Biological control of bacterial soft rot in Chinese cabbage by Lactobacillus plantarum strain by under field conditions［J］. Biological Control，2016，100：63-69.

［5］ 左經(jīng)龍，姜桂霞. 細(xì)菌性病害主要化學(xué)防治藥劑［J］. 吉林蔬菜，2016（3）：21-22.

［6］ 李文紅，程英，金劍雪，等. 鏈霉素防治植物細(xì)菌性病害的歷史與研究現(xiàn)狀［J］. 湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013（5）：1985-1987.

［7］ 張立微，張景濤，張麗茁，等. 芫荽軟腐病病原菌生物學(xué)特性與藥劑篩選［J］. 黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015（7）：62-64.

［8］ 趙辰瑞. 幾種常用抗生素對白菜軟腐病防治效果的對比研究［J］. 基層農(nóng)技推廣，2015（12）：21-23.

［9］ 寇長福，劉元元，陳浩. 不同藥劑防治魔芋軟腐病效果研究［J］. 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2015（11）：135-138.

［10］ 蒲小明，林壁潤，沈會芳，等. 防控香蕉細(xì)菌性軟腐病綠色藥劑篩選［J］. 廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，37（9）：44-46.

［11］ 秦建彬，陳俊杰，魏翠華，等. 大花惠蘭軟腐病防治藥劑及防治適期的研究［J］. 農(nóng)學(xué)學(xué)報，2013，3（3）：10-12.

［12］ 李艷梅，李小六，曹志梅. 24 種中草藥提取液對蝴蝶蘭軟腐病軟病原菌的抑菌作用研究［J］. 唐山師范學(xué)院學(xué)報，2007，29（5）：39-41.

［13］ 尤毅，李佐，肖文芳，等. 殺菌劑對蝴蝶蘭軟腐病菌毒力測定［C］. 中國觀賞園藝研究進(jìn)展，2012：696-699.

［14］ 姚廷山，周彥，周常勇. 應(yīng)用銅制劑防治柑橘潰瘍病的研究進(jìn)展［J］. 園藝學(xué)報，2016，43（9）：1711-1718.

［15］ 張德雍，黃華，廖苑其，等. 新型無機(jī)銅基殺菌劑王銅的研制與開發(fā)［J］. 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2009，30（3）：36-40.

［16］ 杜啟蘭. 蝴蝶蘭軟腐病藥劑防治試驗(yàn)研究［J］.農(nóng)業(yè)科技通訊，2009（5）：68-69.

（責(zé)任編輯 楊賢智）

Screening of chemicals for controlling bacterial soft rot of phalaenopsis

SHEN Hui-fang，PU Xiao-ming，ZHANG Jing-xin，SUN Da-yuan，HUANG Ning，LIN Bi-run
（Institute of Plant Protection，Guangdong Academy of Agricultural Sciences/Key Laboratory of New Technique for Plant Protection in Guangdong，Guangzhou 510640，China）

S482.2

B

1004-874X（2017）06-0104-05

沈會芳，蒲小明，張景欣，等.蝴蝶蘭細(xì)菌性軟腐病綠色防治藥劑篩選試驗(yàn)［J］.廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2017，44（6）：104-108.

2017-03-05

廣東省自然科學(xué)基金團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目（2015A030312002）；廣東省科技計劃項(xiàng)目（2016B020202003）；廣州市科技計劃項(xiàng)目（2014J4500034）

沈會芳（1973-），女，碩士，研究員，E-mail：951781658@qq.com

林壁潤（1963-），男，博士，研究員，E-mail：linbr@126.com