朱金艷，鄭鳳娥，孫淼淼

（1．莊河市食品檢驗(yàn)監(jiān)測中心，遼寧 莊河 116400；2．沈陽市食品檢驗(yàn)所，遼寧 沈陽 110000；3．莊河市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心，遼寧 莊河 116400）

水產(chǎn)制品中山梨酸的不同提取方法的研究

朱金艷1，鄭鳳娥2，孫淼淼3

（1．莊河市食品檢驗(yàn)監(jiān)測中心，遼寧 莊河 116400；2．沈陽市食品檢驗(yàn)所，遼寧 沈陽 110000；3．莊河市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心，遼寧 莊河 116400）

山梨酸能有效地抑制霉菌，酵母菌和好氧性細(xì)菌的活性，還能防止肉毒桿菌、葡萄球菌、沙門氏菌等有害微生物的生長和繁殖，但對厭氧性芽孢菌與嗜酸乳桿菌等有益微生物幾乎無效，其抑止發(fā)育的作用比殺菌作用更強(qiáng)，從而達(dá)到有效地延長食品的保存時(shí)間，并保持原有食品的風(fēng)味，其防腐效果是同類產(chǎn)品苯甲酸鈉的5～10倍，所以在食品加工生產(chǎn)中應(yīng)用廣泛。如果食品中添加的山梨酸超標(biāo)嚴(yán)重，消費(fèi)者長期食用，在一定程度上會抑制骨骼生長，危害腎、肝臟的健康。在2760-2014《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》中，規(guī)定山梨酸在水產(chǎn)制品中的最大使用量為1．0克/公斤。針對目前在水產(chǎn)制品中山梨酸檢測方法存在著提取困難的問題，本文引入超聲輔助提取的方法，提高水產(chǎn)制品的提取率，提高檢測的回收率和準(zhǔn)確性。

1 材料與方法

1.1 儀器

Aligent1260高效液相色譜儀、高速組織粉碎機(jī)、超聲波清洗器、天平。

1.2 試劑

山梨酸標(biāo)準(zhǔn)品、氨水溶液(1+99)、亞鐵氰化鉀溶液(92克/升)、乙酸鋅溶液(183克/升)、乙酸銨溶液(20毫摩/升)、甲酸-乙酸銨溶液(2毫摩/升甲酸+20毫摩/升乙酸銨)。

圖1 山梨酸圖譜

1.3 色譜條件

色譜柱：C18柱，柱長250毫米，內(nèi)徑4．6毫米，粒徑5微米，流動相：甲醇+乙酸銨溶液（5：95），流速：1毫升/分，檢測波長：230納米，進(jìn)樣量：10微升。

圖2 山梨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

1.4 試驗(yàn)方法

將100個(gè)鱈魚片（干），用高速組織粉碎機(jī)制樣，在試樣中準(zhǔn)確稱取2克，共20份，分別放置50毫升具塞離心管中（其中10份添加相同量的山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，作為測量回收率的樣品，剩余10份作為測中山梨酸含量的樣品），加水約25毫升，渦旋混勻，于50℃水無超聲，50℃水超聲15、20、25、30分鐘，冷卻至室溫后加亞鐵氰化鉀溶液2毫升和乙酸鋅溶液2毫升，混勻，于8000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘，將水相轉(zhuǎn)移至50毫升容量瓶中，于殘?jiān)屑铀?0毫升，渦旋混勻后超聲5分鐘，于8000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘，將水相轉(zhuǎn)移到同一50毫升容量瓶中，并用水定容至刻度，混勻。取適量上清液過0．22微米濾膜，待液相色譜測，每種條件做雙平行，取平均值。外標(biāo)法定量，譜圖如圖1，標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖2。

圖3 不同處理?xiàng)l件下山梨酸含量的變化

2 結(jié)果與討論

2.1 不同處理?xiàng)l件下樣品中山梨酸含量變化

根據(jù)圖3可以看出，超聲對樣品中山梨酸測定含量有一定影響，同樣50℃水溫下，有超聲比沒有超聲作用，測定含量高出0．06克/公斤以上，主要原因在超聲波使樣品中的山梨酸更容易釋放出來，殘留在樣品中的山梨酸減少。

2.2 不同處理?xiàng)l件下樣品中山梨酸的回收率變化

圖4 不同處理?xiàng)l件下山梨酸回收率變化

從圖4中的變化趨勢可以看出，超聲作用較無超聲作用可以明顯提高樣品中山梨酸的回收率，原因同樣可能是超聲波可促進(jìn)山梨酸從樣品游離到溶液中，使得回收率變高。同時(shí)，可以發(fā)現(xiàn)隨著超聲時(shí)間延長，回收率不斷增加，但25分鐘與30分鐘基本一致。

通過以上試驗(yàn)結(jié)果，超聲波輔助提取水產(chǎn)制品中的添加劑——山梨酸可以起到提高檢測準(zhǔn)確性的目的。同時(shí)也說明在食品檢測領(lǐng)域，超聲波有提高某些目標(biāo)物質(zhì)提取率的作用，是很好的輔助提取措施。