馬鈴薯干腐病鐮刀菌的分離及生物學(xué)特性研究

劉麗萍，方鵬鵬

(隴東學(xué)院 生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，甘肅 慶陽(yáng) 745000)

馬鈴薯干腐病鐮刀菌的分離及生物學(xué)特性研究

劉麗萍，方鵬鵬

(隴東學(xué)院 生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，甘肅 慶陽(yáng) 745000)

為確定華池縣馬鈴薯干腐病的病原菌，采集有干腐病癥狀的馬鈴薯塊莖為試驗(yàn)材料，采用組織塊法和孢子稀釋法分離純化病原菌，參照鐮刀菌分類系統(tǒng)進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定；并采用單因素法考察了氮源、溫度、碳源和pH值對(duì)病原菌生長(zhǎng)的影響。結(jié)果表明：從采樣區(qū)分離純化出35株鐮刀菌，鑒定為F.acuminatum和F.sambicinum，優(yōu)勢(shì)菌是F.acuminatum，分離頻率為62.9%，按照科赫氏法對(duì)其進(jìn)行致病性測(cè)定，證實(shí)了兩種鐮刀菌對(duì)馬鈴薯塊莖的致病性。優(yōu)勢(shì)菌F.acuminatum的最佳生長(zhǎng)條件為最適溫度為28℃，最佳氮源是玉米粉，最適pH值為9，最佳碳源是蔗糖。

馬鈴薯干腐??；致病力測(cè)定；生物學(xué)特性；分離純化；F.acuminatum

Abstract： In order to clarify pathogenic bacteria of potato dry rot and growth characteristic,potato tuber of dry rot in Huachi County were used as the experimental material.The pathogen was isolated and purified by tissue block method and single separation,the relationships of growth rate and temperature,pH,carbon source and nitrogen source have been studied.The results shows that 35 pathogenic stains was isolated and purified,preliminary identification of the stains wasF.sambicinumandF.acuminatum,F.acuminatumwas dominant pathogen in Huachi County with a frequency of 62.9%.F.sambicinumandF.acuminatumwas pathogenic according to pathogenicity determination.The best temperature,pH,carbon source and nitrogen were 28℃,9,sucrose and corn flour.

Keywords： potato dry rot;pathogenicity determination;biological characteristic;isolation and purification;F.acuminatum

馬鈴薯是繼水稻、小麥和玉米之后世界第四大糧食作物，我國(guó)是馬鈴薯種植面積最大的國(guó)家之一[1-4]，但馬鈴薯儲(chǔ)藏期病害嚴(yán)重，其中主要病害之一就是馬鈴薯干腐病[5]；干腐病對(duì)種薯和商品薯的安全儲(chǔ)藏威脅很大，其常年發(fā)病率最高可達(dá)60%[6]。終致薯塊干腐僵縮，嚴(yán)重降低馬鈴薯的外在觀感、內(nèi)在品質(zhì)及利用率[7，8]。攜帶致病菌的土壤或種薯生長(zhǎng)期的馬鈴薯塊莖通過(guò)昆蟲、病菌及傷口侵入，在儲(chǔ)藏期發(fā)展為干腐病[9]。據(jù)報(bào)道F.sambicinum、F.sulphureum、F.avenaceum、F.redolens、F.solani、F.moniliforme、F.oxysporum、F.equiseti等多種鐮刀菌均可引起馬鈴薯干腐病[10-16]。為實(shí)現(xiàn)干腐病病害的準(zhǔn)確診斷和科學(xué)防控，需要明確不同地區(qū)的干腐病致病菌種類。本試驗(yàn)以甘肅慶陽(yáng)市華池縣患有干腐病的馬鈴薯薯塊為研究對(duì)象，分離純化出干腐病的病原菌，并對(duì)優(yōu)勢(shì)病原菌的生長(zhǎng)特性進(jìn)行研究，從而為揭示當(dāng)?shù)伛R鈴薯干腐病的病原菌種類及科學(xué)防治提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

1.1.1 材料采集

于2014年3月，從慶陽(yáng)市華池縣悅樂(lè)鎮(zhèn)、城壕鄉(xiāng)、柔遠(yuǎn)鎮(zhèn)、南梁鄉(xiāng)四個(gè)采樣點(diǎn)的貯藏窖中，用隨機(jī)抽樣法采集干腐病癥狀的薯塊35～40個(gè)作為鐮刀菌分離材料。

1.1.2 試驗(yàn)藥品

葡萄糖，瓊脂，尿素，木糖，硫酸鏈霉素，蛋白胨，麥芽糖，磷酸二氫鉀，酵母粉，乳糖，蔗糖，鹽酸，玉米粉，硫酸鎂，淀粉，氯化銨，氫氧化鈉等，所用試劑均為分析純。

1.1.3 培養(yǎng)基

PDA培養(yǎng)基：用于培養(yǎng)干腐病鐮刀菌，常規(guī)方法配制，用時(shí)需加1%鏈霉素。

WA培養(yǎng)基的配方：用于單孢分離鐮刀菌，配制方法為100ml水中加入瓊脂粉2g，用時(shí)需加1%鏈霉素。

SNA培養(yǎng)基:磷酸二氫鉀1.0g，氯化鉀0.5g，硝酸鉀31.0g，葡萄糖0.2g，蔗糖0.2g，硫酸鎂0.5g，瓊脂粉20g，水1L，臨用時(shí)加入1%鏈霉素；用于觀察孢子和保存。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1 病原菌分離

每個(gè)樣點(diǎn)分別選取有干腐病癥狀的馬鈴薯塊莖各6個(gè)，置于流水中沖洗30min，將病薯放入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)，用70%乙醇擦拭塊莖表面消毒，用解剖刀以組織塊分離的方法分離干腐病病斑[14]，每個(gè)病薯選擇1～2個(gè)病斑，每病斑分離出4塊組織，病斑組織切成6mm×6mm左右的小塊。再將病斑組織塊放入3%～5%次氯酸鈉中消毒，取出并用無(wú)菌水沖洗后，放入PDA培養(yǎng)基上，在25℃培養(yǎng)7d。待長(zhǎng)出菌落，先用無(wú)菌水制成菌懸液，再用龍膽紫染液染色制片，然后置于油鏡下觀察。依據(jù)分離菌落和鏡檢特征，選取馬鈴薯干腐病鐮刀菌，將其菌落接種到新鮮的PDA培養(yǎng)基上純化培養(yǎng)。

1.2.2 孢子分離

釆用孢子稀釋法。從培養(yǎng)好的鐮刀菌菌落上挑取孢子放入無(wú)菌水中制成孢子懸浮液，吸取1ml鐮刀菌孢子懸浮液放入WA平板上，然后將WA平板置于顯微鏡下鏡檢，在10×10倍鏡下要求每視野1～3個(gè)孢子。再用解剖刀將含孢子液的培養(yǎng)基劃成1cm2左右的小塊，在10×10倍鏡下檢查時(shí)，每個(gè)視野1個(gè)孢子即可。最后用解剖刀將培養(yǎng)基小塊切成1mm2大小，選擇只有一個(gè)孢子的小塊轉(zhuǎn)移到PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)。

1.2.3 形態(tài)學(xué)鑒定與分離頻率的計(jì)算

切取直徑6mm的鐮刀菌菌餅分別在25℃和30℃黑暗條件下培養(yǎng)3d后，測(cè)量菌落直徑。依據(jù)鐮刀菌在PDA培養(yǎng)基上的菌落特征，以及大型、小型分生孢子和厚垣孢子的有無(wú)及形態(tài)等進(jìn)行鑒定。

統(tǒng)計(jì)純化得到的鐮刀菌菌株數(shù)、種類和總數(shù)，計(jì)算鐮刀菌菌株總數(shù)中各種鐮刀菌的所占比例，即為鐮刀菌不同種類在該采樣地的分離頻率。

1.2.4 致病力測(cè)定

選擇健康、大小均勻的馬鈴薯塊莖流水沖洗干凈，用70%乙醇對(duì)塊莖表面消毒3min后自然干燥。將分離純化得到的干腐病鐮刀菌接種于PDA培養(yǎng)上培養(yǎng)48h，用打孔器從培養(yǎng)基菌落上打取直徑為6mm的菌餅，用于接種健康馬鈴薯塊莖。之后再用打孔器從馬鈴薯塊莖中取出一塊莖組織，將打取的菌餅放入塊莖的穴窩中，蓋上取出的塊莖組織[17,18]，以接種PDA培養(yǎng)基的薯塊為空白對(duì)照。將接種后的馬鈴薯都放入25℃的恒溫培養(yǎng)箱中黑暗培養(yǎng)20d，選擇在干腐病癥狀明顯的塊莖中重新分離鐮刀菌并進(jìn)行鑒定。

1.2.5 單因子對(duì)病原菌生物學(xué)特性的影響

(1)溫度對(duì)干腐病鐮刀菌生長(zhǎng)的影響。在PDA鐮刀菌菌落邊緣打取直徑為6mm的菌餅，接種到新鮮培養(yǎng)基的中央，然后分別放入4℃、10℃、16℃、22℃、28℃、34℃和40℃的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)3d，每個(gè)處理進(jìn)行5次重復(fù)，測(cè)量不同培養(yǎng)溫度下鐮刀菌菌落直徑并計(jì)算平均生長(zhǎng)速率。

(2)碳源對(duì)干腐病鐮刀菌生長(zhǎng)的影響。培養(yǎng)基的其他成分保持不變，分別添加3g葡萄糖、木糖、蔗糖、乳糖、麥芽糖、淀粉為碳源配制供試培養(yǎng)基，在新鮮培養(yǎng)基中央接種直徑6mm的菌餅，每個(gè)處理進(jìn)行5次重復(fù)，放入25℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)3d，測(cè)量不同碳源上鐮刀菌菌落直徑并計(jì)算平均生長(zhǎng)速率。

(3)氮源對(duì)干腐病鐮刀菌生長(zhǎng)的影響。在PDA培養(yǎng)基中分別添加3g尿素、蛋白胨、酵母粉、氯化銨、玉米粉為氮源配制供試培養(yǎng)基，對(duì)照組是PDA培養(yǎng)基。在新鮮培養(yǎng)基中央接種直徑6mm的菌餅，每個(gè)處理進(jìn)行5次重復(fù)，放入25℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)3d，測(cè)量不同氮源上鐮刀菌菌落直徑并計(jì)算平均生長(zhǎng)速率。

(4)pH值對(duì)干腐病鐮刀菌生長(zhǎng)的影響。將培養(yǎng)基的pH值分別調(diào)整為6、7、8、9、10和11，對(duì)照組的PDA pH值自然。在新鮮培養(yǎng)基中央接種直徑6mm的菌碟，每個(gè)處理進(jìn)行5次重復(fù)，放入25℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)3d，測(cè)量不同pH值下鐮刀菌的菌落直徑并計(jì)算平均生長(zhǎng)速率。

平均生長(zhǎng)速率=(測(cè)定菌落平均直徑-初始菌碟直徑)/培養(yǎng)天數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1干腐病病原菌的分離鑒定

2.1.1 馬鈴薯干腐病病害特征

患有干腐病的馬鈴薯塊莖表面皺縮，病斑從受害部位向周邊健康組織擴(kuò)展，受害部位下陷、皺縮，形成腔穴，內(nèi)部變成褐色，空心且長(zhǎng)滿白色、粉色、黃色的菌絲或孢子團(tuán)塊，造成塊莖糜爛。嚴(yán)重時(shí)，整個(gè)馬鈴薯塊莖糜爛皺縮，塊莖干而硬，并變輕，不能食用，在濕潤(rùn)環(huán)境下則轉(zhuǎn)變成軟腐。

2.1.2 病原菌的分離鑒定

將采集的馬鈴薯塊莖采用組織塊分離法接種到PDA培養(yǎng)基上，放入25℃培養(yǎng)箱黑暗培養(yǎng)7d，在培養(yǎng)基上發(fā)現(xiàn)病斑組織周圍長(zhǎng)出白色致密的羊毛狀菌絲，部分菌絲為淡玫紅色。依據(jù)菌落特征和顯微特征選取鐮刀菌的菌落，經(jīng)孢子稀釋法純化后獲得共35株鐮刀菌。根據(jù)鐮刀菌形態(tài)學(xué)分類系統(tǒng)，對(duì)得到的35株鐮刀菌株進(jìn)行形態(tài)鑒定，發(fā)現(xiàn)這些鐮刀菌株為F.sambicinum和F.acuminatum兩種，其中13株為F.sambicinum，分離頻率為37.1%；22株為F.acuminatum，分離頻率為62.9%，優(yōu)勢(shì)種為F.acuminatum。

F.acuminatumPDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)3d，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，鐮刀菌菌落表面逐漸呈現(xiàn)淡玫瑰紅色，菌落邊緣為白色，中間為黃棕色，從反面培養(yǎng)基著色且為淡玫瑰紅色，菌絲生長(zhǎng)較快，產(chǎn)生大量卷毛狀白色菌絲。顯微鏡下菌株的菌絲存在很多分枝，分叉出的菌絲呈尖細(xì)狀，倒棍棒狀；大型分生孢子鐮刀形，幾乎沒有小型分生孢子。在25℃下平均生長(zhǎng)速率為17.3mm/d，30℃下平均生長(zhǎng)速率為18.7mm/d。

F.sambicinumPDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)3d，菌絲卷毛狀、稀疏，菌絲白色后變?yōu)榈S色，菌落中間為棕黃色。基物表面和培養(yǎng)基背面顏色不改變，培養(yǎng)基上形成許多肉色孢子，孢子聚集使得菌落透光成放射狀，復(fù)雜的孢子梗產(chǎn)生大量孢子。菌絲分叉少，但存在很多呈圓柱狀分隔菌絲，產(chǎn)孢細(xì)胞單瓶梗，瓶狀小梗為圓柱形、倒棍棒形。未觀察到小分生孢子和厚坦孢子。在25℃下平均生長(zhǎng)速率為17.8mm/d，30℃下平均生長(zhǎng)速率為16.4mm/d。

2.1.3 致病力測(cè)定

為確定分離到的鐮刀菌是否具有致病性，對(duì)F.acuminatum和F.sambicinum進(jìn)行回接試驗(yàn)。試驗(yàn)設(shè)置3次重復(fù)，每次選取10個(gè)健康馬鈴薯塊莖，以接種培養(yǎng)基為對(duì)照。接種兩種病原菌觀察馬鈴薯塊莖表面的變化，在第4d開始產(chǎn)生明顯癥狀，接種區(qū)域表皮局部略凹陷且顏色變暗、變褐或發(fā)黑，孔內(nèi)出現(xiàn)少量白色菌絲。在第6d，塊莖接種傷口處形成摺疊，可看見白色的絨狀子實(shí)體。接種后第10d，病斑擴(kuò)展，接種區(qū)域周圍組織變褐發(fā)黑，出現(xiàn)壞死，接種凹窩內(nèi)長(zhǎng)有白色或者粉色的菌絲體。接種后20d，接種F.sambicinum的馬鈴薯表面壞死薯肉增多，在接種區(qū)域形成較大空腔，出現(xiàn)較多白色霉?fàn)钗铮唤臃NF.acuminatum的馬鈴薯表面病斑在馬鈴薯表面擴(kuò)展慢，形成了較小的空腔。

將接種兩種病原菌的馬鈴薯切開如圖1所示，發(fā)現(xiàn)接種F.acuminatum的馬鈴薯塊莖如圖2(b)，可看出接種部位下陷、皺縮，形成腔穴，內(nèi)部變成褐色，空心且長(zhǎng)滿白色菌絲或孢子塊，內(nèi)部僵縮干腐，薯肉變?yōu)樯詈稚?，病原菌形成空心腔范圍較大，縱向和橫向擴(kuò)展較深，形成的染病空腔多在馬鈴薯的中央部位。接種F.sambicinum的馬鈴薯塊莖如圖2(c)所示，觀察到薯塊表面下陷皺縮形成腔穴，內(nèi)部變?yōu)榛液谏谎▋?nèi)形成白色菌絲，空心腔范圍較大，健康薯肉沒有變色。兩種病原菌相比，F(xiàn).sambicinum橫向擴(kuò)展直徑較大，縱向擴(kuò)展較淺。兩種鐮刀菌接種的馬鈴薯塊莖全部發(fā)病，出現(xiàn)干腐癥狀，病情較重；而接種PDA培養(yǎng)基的對(duì)照組如圖2(a)，馬鈴薯無(wú)干腐癥狀出現(xiàn)。

圖1 鐮刀菌培養(yǎng)特征

2.2單因子對(duì)馬鈴薯干腐病鐮刀菌生物學(xué)特性的影響

為明確馬鈴薯干腐病優(yōu)勢(shì)菌F.acuminatum的最佳生長(zhǎng)條件，考察了溫度、碳源、pH值和氮源對(duì)鐮刀菌菌絲生長(zhǎng)和平均生長(zhǎng)速度的影響。

2.2.1 溫度對(duì)F.acuminatum生長(zhǎng)的影響

溫度的變化會(huì)影響鐮刀菌的生長(zhǎng)發(fā)育，特別是菌絲的生長(zhǎng)。鐮刀菌F.acuminatum在4℃、10℃、16℃、22℃、28℃、34℃和40℃不同溫度環(huán)境中，菌落與菌絲生長(zhǎng)差異顯著。在10～28℃范圍內(nèi)，溫度升高，菌落逐漸增大，且菌絲的長(zhǎng)度和密度也增加。28℃時(shí)菌落直徑最大，菌絲生長(zhǎng)迅速且菌落致密，菌絲呈羊毛狀且長(zhǎng)而致密。在10℃和34℃時(shí)，菌絲生長(zhǎng)明顯受到抑制，僅能在菌餅邊緣發(fā)現(xiàn)有少量白色卷毛狀細(xì)菌絲長(zhǎng)出；4℃和40℃抑制作用最為明顯，菌落不生長(zhǎng)，無(wú)菌絲出現(xiàn)。

溫度對(duì)平均生長(zhǎng)速率的影響如圖3所示，在10～28℃范圍內(nèi)，隨著溫度的升高平均生長(zhǎng)速率逐漸增大，28℃時(shí)平均生長(zhǎng)速率最高，可達(dá)到25.5mm/d。超過(guò)28℃后平均生長(zhǎng)速率迅速下降；當(dāng)溫度達(dá)到40℃時(shí)，菌落不生長(zhǎng)。方差分析結(jié)果顯示：不同溫度對(duì)平均生長(zhǎng)速率的影響達(dá)到了極顯著水平，多重比較發(fā)現(xiàn)不同溫度之間對(duì)生長(zhǎng)速度的影響均達(dá)到了極顯著水平。從菌落菌絲生長(zhǎng)和平均生長(zhǎng)速率兩個(gè)方面綜合考慮，F(xiàn).acuminatum的最佳生長(zhǎng)溫度是28℃。

圖3 溫度對(duì)F.acuminatum生長(zhǎng)的影響

2.2.2 碳源對(duì)F.acuminatum生長(zhǎng)的影響

在供試碳源的培養(yǎng)基上F.acuminatum都能正常生長(zhǎng)，在蔗糖、乳糖、淀粉的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)迅速，菌落生長(zhǎng)旺盛，菌絲呈羊毛狀且延伸短；但菌落顏色與菌絲密度不同，蔗糖培養(yǎng)基上菌落為白色，葡萄糖和淀粉培養(yǎng)基上為淡玫瑰紅色；蔗糖培養(yǎng)基上的菌絲致密，葡萄糖次之。以乳糖、木糖為碳源的培養(yǎng)基上，菌落生長(zhǎng)旺盛，但菌絲延伸較長(zhǎng)而稀疏；以麥芽糖為碳源的培養(yǎng)基，菌絲延伸長(zhǎng)而致密，但菌落生長(zhǎng)速度慢。

圖4 碳源對(duì)F.acuminatum生長(zhǎng)的影響

不同碳源的平均生長(zhǎng)速率如圖4所示，菌種在各種碳源環(huán)境下都生長(zhǎng)，當(dāng)碳源為乳糖時(shí)，生長(zhǎng)速率最快，可達(dá)到21.2mm/d；其次為蔗糖與麥芽糖；淀粉、木糖與葡萄糖的生長(zhǎng)速率相差不大。方差分析結(jié)果顯示不同碳源對(duì)平均生長(zhǎng)速率的影響達(dá)到了極顯著水平，多重比較發(fā)現(xiàn)乳糖與其他碳源處理對(duì)生長(zhǎng)速度的影響差異達(dá)到了極顯著水平。從鐮刀菌平均生長(zhǎng)速率和菌落菌絲生長(zhǎng)兩方面綜合考慮，得知蔗糖為最佳碳源。

2.2.3 氮源對(duì)F.acuminatum生長(zhǎng)的影響

在供試氮源的培養(yǎng)基上F.acuminatum均能生長(zhǎng)，但生長(zhǎng)差異較大。不添加氮源時(shí)，菌落生長(zhǎng)較快，但菌絲延伸稀疏。添加玉米粉后，羊毛狀菌落生長(zhǎng)最旺盛，菌絲長(zhǎng)而致密，生長(zhǎng)最好。添加蛋白胨和酵母粉后，菌落生長(zhǎng)旺盛，菌絲短而致密，且菌落為淡玫瑰紅色。添加氯化銨后，菌落生長(zhǎng)緩慢，菌絲延伸慢且稀疏。添加尿素的培養(yǎng)基上，菌落不生長(zhǎng)，僅在菌碟周圍延伸出致密的白色菌絲。因此，添加蛋白胨和酵母粉菌絲生長(zhǎng)致密卻不利于菌絲延伸，添加尿素和氯化銨后不利于菌落直徑增大與菌絲的生長(zhǎng)。

不同氮源的生長(zhǎng)速率如圖5所示，可看出添加玉米粉的培養(yǎng)基上F.acuminatum的平均生長(zhǎng)速率最快，可達(dá)到28.2mm/d；其次是添加蛋白胨和酵母粉的培養(yǎng)基，平均生長(zhǎng)速率最慢的是含有尿素的培養(yǎng)基，添加蛋白胨、酵母粉和玉米粉后的鐮刀菌的平均生長(zhǎng)速度都高于對(duì)照組。方差分析結(jié)果顯示不同氮源對(duì)平均生長(zhǎng)速率的影響達(dá)到了極顯著水平，多重比較顯示蛋白胨與酵母粉處理對(duì)生長(zhǎng)速度的影響無(wú)顯著差異，其它處理對(duì)生長(zhǎng)速度的影響均達(dá)到了極顯著水平。綜合考慮平均生長(zhǎng)速率和菌落菌絲生長(zhǎng)，可知最佳氮源為玉米粉。

圖5 氮源對(duì)F.acuminatum生長(zhǎng)的影響

2.2.4 pH值對(duì)F.acuminatum生長(zhǎng)的影響

依據(jù)菌落生長(zhǎng)特征發(fā)現(xiàn)pH值在6～11的范圍內(nèi)F.acuminatum在PDA上都能正常生長(zhǎng)，在pH值為6時(shí)，菌落生長(zhǎng)最慢，菌絲延伸短而稀疏，在pH值為10、11與不調(diào)整pH值相比，菌落生長(zhǎng)速度差距較小，但菌絲延伸慢而稀疏。當(dāng)pH值為8、9時(shí)，菌落生長(zhǎng)速度快，菌絲延伸快而密集，呈羊毛狀，且pH值為9時(shí)，菌絲生長(zhǎng)最佳。

圖6 pH值對(duì)F.acuminatum生長(zhǎng)的影響

從圖6可看出：當(dāng)培養(yǎng)環(huán)境的pH值為偏堿性的9時(shí)，長(zhǎng)勢(shì)最為突出，平均生長(zhǎng)速度可達(dá)到23.6mm/d。在酸性和中性環(huán)境下，平均生長(zhǎng)速度低于自然條件下的生長(zhǎng)速度，在堿性環(huán)境平均生長(zhǎng)速度高于或接近自然組的生長(zhǎng)速度，說(shuō)明F.acuminatum喜偏堿性環(huán)境。方差分析結(jié)果顯示不同pH值對(duì)平均生長(zhǎng)速率的影響達(dá)到了極顯著水平，多重比較發(fā)現(xiàn)pH值為9、10對(duì)生長(zhǎng)速度的影響無(wú)顯著差異。從菌絲生長(zhǎng)和平均生長(zhǎng)速度綜合考慮F.acuminatum的最佳生長(zhǎng)pH值為9。

3 結(jié)論與討論

馬鈴薯儲(chǔ)藏期病害嚴(yán)重，常見的是馬鈴薯干腐病，引起干腐病的鐮刀菌種類很多，不同地區(qū)鐮刀菌優(yōu)勢(shì)菌不同。從華池縣采集的患有干腐病的馬鈴薯塊莖為試驗(yàn)材料，經(jīng)分離純化共得到35株鐮刀菌，依據(jù)病原菌的菌落特征和形態(tài)學(xué)觀察，鑒定這些菌株為F.acuminatum和F.sambicinum。其中13株為F.sambicinum，分離頻率為37.1%；22株為F.acuminatum，分離頻率為62.9%。明確了華池縣馬鈴薯干腐病的致病種群是F.acuminatum和F.sambicinum兩種鐮刀菌，優(yōu)勢(shì)菌為F.acuminatum。

F.sambicinum適應(yīng)能力強(qiáng)，分布范圍廣，是北方地區(qū)馬鈴薯干腐病的優(yōu)勢(shì)種。目前對(duì)F.sambicinum的報(bào)道較多，如F.sambicinum和F.acuminatum兩種是河北馬鈴薯干腐病的致病菌，內(nèi)蒙古馬鈴薯干腐病的優(yōu)勢(shì)菌為F.sambicinum[9]。黑龍江馬鈴薯致病力較強(qiáng)的是F.sambicinum[5]。甘肅的西和、臨洮、永登的馬鈴薯干腐病病原菌以F.sambicinum為主[7,19]。杜密茹[20]報(bào)道了內(nèi)蒙古地區(qū)馬鈴薯干腐病的主要致病菌是F.sambicinum與F.avenaceum。本研究通過(guò)對(duì)F.sambicinum的培養(yǎng)與致病力測(cè)定，發(fā)現(xiàn)F.sambicinum的致病能力較強(qiáng)。但關(guān)于F.acuminatum的報(bào)道較少，本文發(fā)現(xiàn)F.acuminatum馬鈴薯塊莖致病力較強(qiáng)，接種病原菌的馬鈴薯全部發(fā)病，而且病情較重。

對(duì)優(yōu)勢(shì)菌F.acuminatum的生物學(xué)特性進(jìn)行初步研究，發(fā)現(xiàn)其生長(zhǎng)溫度范圍為10～34℃，最佳生長(zhǎng)溫度為28℃，最佳碳源為蔗糖，最佳氮源為玉米粉，生長(zhǎng)pH值范圍為6～11，最佳pH值為9。

馬鈴薯在溫度10～30℃時(shí)均能生長(zhǎng)，而F.acuminatum適宜的生長(zhǎng)溫度范圍是10～34℃，因此，通過(guò)溫度并不能控制F.acuminatum的生長(zhǎng)及薯塊發(fā)病，但通過(guò)控制初次侵染源則是預(yù)防干腐病的有效途徑。本研究表明F.acuminatum適合在偏堿性、溫度高和濕度高的環(huán)境下生長(zhǎng)，華池地區(qū)土壤偏堿性，春夏溫度高，雨水多，為F.acuminatum的浸染和生長(zhǎng)創(chuàng)造了有利條件。因此，可通過(guò)控制土壤酸堿度、儲(chǔ)藏溫度與濕度等方法防治馬鈴薯干腐病。

需指出的是，由于采集樣品僅來(lái)自于慶陽(yáng)市華池縣，是否能代表隴東地區(qū)馬鈴薯干腐病鐮刀菌的全部種類，尚需進(jìn)一步研究和探討。

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【責(zé)任編輯趙建萍】

TheIsolationandBiologicalCharacteristicofFusariumAssociatedwithPotatoDryRot

LIU Li-ping,FANG Peng-peng

(Collegeoflifescienceandtechnology,LongdongUniversity,Qingyang745000,Gansu)

S435.32

A

1674-1730(2017)05-0062-05

2016-07-17

劉麗萍(1985—)，女，山東濰坊人，講師，碩士，主要從事微生物與生物制藥方面的教學(xué)與研究。