譚立明 馮曉晶 焦安君 陳娟娟 譚福燕 何思齊 徐镠粵 蔣永清 羅 姮 李 華 吳 洋田永建 曾婷婷 余建林 曹莉萍 鄭劍峰

(南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科,南昌 330006)

強(qiáng)直性脊柱炎患者檢測(cè)骨代謝指標(biāo)潛在的臨床價(jià)值①

譚立明 馮曉晶②焦安君②陳娟娟 譚福燕②何思齊②徐镠粵②蔣永清 羅 姮 李 華 吳 洋田永建 曾婷婷 余建林 曹莉萍 鄭劍峰

(南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科,南昌 330006)

目的探討骨代謝指標(biāo)和人類(lèi)白細(xì)胞抗原B27(HLA-B27)在檢測(cè)強(qiáng)直性脊柱炎(AS)患者的臨床意義，并分析其診斷價(jià)值。方法研究對(duì)象為94例AS患者、239例其他病種對(duì)照和80例健康對(duì)照組，并對(duì)其結(jié)果進(jìn)行回顧性分析。結(jié)果AS組β-膠原特殊序列(β-CTX)高于對(duì)照組，而骨鈣素(OC)、25羥基維生素D〔25-(OH)D〕和甲狀旁腺素(PTH)低于對(duì)照組(P<0.05)；AS組C反應(yīng)蛋白(CRP)和β-CTX呈明顯的正相關(guān)(P<0.01)，25-(OH)D呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，其他骨代謝指標(biāo)和CRP無(wú)相關(guān)性；AS組HLA-B27陽(yáng)性率明顯高于其他組(P<0.05)，且HLA-B27在診斷AS時(shí)具有很高的敏感性和特異性；AS組25-(OH)D檢測(cè)的敏感性高于β-CTX，但特異性低于β-CTX。結(jié)論骨代謝指標(biāo)對(duì)AS早期篩查，臨床診斷有著重要價(jià)值，尤其是β-CTX和25-(OH)D的診斷價(jià)值更為明顯。

強(qiáng)直性脊柱炎(AS)；骨代謝指標(biāo)；C反應(yīng)蛋白(CRP)；人類(lèi)白細(xì)胞抗原B27(HLA-B27)

強(qiáng)直性脊柱炎(Ankylosing spondylitis，AS)是一種主要累及中軸關(guān)節(jié)、肌腱和韌帶骨附著點(diǎn)的慢性進(jìn)行性疾病[1,2]，發(fā)病機(jī)制十分不清楚。我國(guó)患病率約為0.25%，好發(fā)于青壯年男性，且致殘率較高，嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量[3,4]。該病早期病情較輕，癥狀與類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid arthritis，RA)和骨性關(guān)節(jié)炎(Osteoarthritis，OA)等疾病相似，容易出現(xiàn)誤診甚至漏診，延誤早期治療[5,6]。更嚴(yán)重的是，絕大多數(shù)AS患者在患病早期就會(huì)出現(xiàn)骨代謝異常，骨量丟失率高達(dá)50%～92%[7-10]，當(dāng)骨量丟失到一定程度就會(huì)出現(xiàn)骨質(zhì)疏松。目前，人類(lèi)白細(xì)胞抗原B27(HLA-B27)成為研究AS的熱點(diǎn)[11-13]，CRP早已應(yīng)用于臨床輔助診斷AS。但近年有研究發(fā)現(xiàn)，骨代謝指標(biāo)與AS病情活動(dòng)和關(guān)節(jié)損害有一定的聯(lián)系，并可為AS的早期診斷、病情評(píng)估及治療提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1材料 收集南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院2014年3月至2017年3月期間住院及門(mén)診收治的94例AS患者、89例RA患者、78例痛風(fēng)(Gout)患者、16例脊柱骨折患(Spine Fracture，SF)者、56例OA患者和80例健康對(duì)照組均為南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院健康體檢者。AS組患者中男72例，女22例，年齡20～68歲，平均35.43歲；RA組患者中男30例，女59例，年齡34～73歲，平均59.81歲；Gout組患者中男61例，女17例，年齡22～87歲，平均59.34歲；SF組患者中男11例，女5例，年齡25～68歲，平均48.47歲；OA組患者中男17例，女39例，年齡37～85歲，平均67.68歲；健康對(duì)照組中男45例，女35例，年齡21～63歲，平均38.47歲。

1.2方法

1.2.1診斷標(biāo)準(zhǔn) 采用美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)推薦的AS分類(lèi)診斷標(biāo)準(zhǔn)(2009年)，根據(jù)起病年齡(<45歲)、臨床癥狀、體征并結(jié)合影像學(xué)等其他實(shí)驗(yàn)室檢查進(jìn)行診斷。

1.2.2納入標(biāo)準(zhǔn) 符合上述診斷標(biāo)準(zhǔn)，腰背痛≥3個(gè)月者。

1.2.3排除標(biāo)準(zhǔn) 女性已絕經(jīng)或者月經(jīng)出現(xiàn)明顯紊亂者；妊娠或哺乳期婦女及精神病患者；曾經(jīng)使用激素患者；內(nèi)分泌疾病患者；合并重度營(yíng)養(yǎng)不良或伴有腦、腎、心、造血系統(tǒng)嚴(yán)重?fù)p害者；酒精依賴(lài)者；曾經(jīng)使用過(guò)柳氮磺胺嘧啶、甲氨蝶呤和重組人 Ⅱ 型腫瘤壞死因子受體-抗體融合蛋白等治療AS藥物的患者。

1.2.4儀器和方法 骨鈣素(OC)、β-膠原特殊序列(β-CTX)、25羥基維生素D〔25-(OH)D〕和甲狀旁腺素(PTH)均采用瑞士羅氏診斷產(chǎn)品(上海)有限公司生產(chǎn)的cobas e601全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光儀檢測(cè)。25-(OH)D采用競(jìng)爭(zhēng)法，OC、β-CTX和PTH均采用雙抗體夾心法，發(fā)光試劑為羅氏診斷產(chǎn)品(上海)有限公司生產(chǎn)的配套試劑盒。BLAP使用手工法進(jìn)行體外檢測(cè)，待反應(yīng)板顯色后，與比色板比對(duì)，讀取測(cè)定結(jié)果。試劑為北京中生金域診斷技術(shù)有限公司的骨源性堿性磷酸酶(Bone alkaline phosphatase)檢測(cè)試劑盒(凝集素親和法)。CRP采用速率散射比濁法，儀器采用美國(guó)貝克曼公司產(chǎn)IMMAGE 800型全自動(dòng)特定蛋白分析系統(tǒng)及配套試劑，CRP檢測(cè)結(jié)果大于8 mg/dl為陽(yáng)性。HLA-B27采用測(cè)序的方法(PCR-SBT),試劑為HLAssureTMSBT分型試劑。具體操作嚴(yán)格按本室SOP進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1各組骨代謝檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì) AS組β-CTX高于對(duì)照組，而OC、25-(OH)D和PTH低于對(duì)照組(P<0.05)；RA組β-CTX、OC、25-(OH)D和PTH，Gout組β-CTX和PTH，SF組OC和25-(OH)D，OA組β-CTX和PTH均與AS組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。詳見(jiàn)表1。

2.2AS患者CRP與骨代謝指標(biāo)的相關(guān)性分析 AS組患者CRP與β-CTX呈明顯的正相關(guān)(P<0.01)，與25-(OH)D呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)；而OC、BLAP和PTH與CRP均不相關(guān)(P>0.05)。詳見(jiàn)表2。

表1 各組骨代謝指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果分析

Note：Compared with the control group,using the rank sum test,1)P<0.05;compared with the AS group,using the rank sum test,2)P<0.05.

表2 94例AS患者CRP與骨代謝指標(biāo)的相關(guān)性分析

表3 各組血清CRP和HLA-B27檢測(cè)結(jié)果分析

Note：Compared with the control group,using rank sum test,1)P<0.05，2)P<0.05;compared with the AS group,using the rank sum test,3)P<0.05,4)P<0.01.

2.3各組血清CRP和HLA-B27檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì) AS組CRP陽(yáng)性率明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，HLA-B27陽(yáng)性率明顯高于其他組(P<0.01)。詳見(jiàn)表3。

2.4血清CRP和HLA-B27檢測(cè)結(jié)果臨床評(píng)價(jià) 經(jīng)分析，HLA-B27檢測(cè)的敏感性、特異性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值均高于CRP。詳見(jiàn)表4。

2.5血清β-CTX和25-(OH)D檢測(cè)結(jié)果ROC曲線分析 經(jīng)分析，β-CTX和25-(OH)D檢測(cè)對(duì)診斷AS具有一定的準(zhǔn)確性；25-(OH)D檢測(cè)的敏感性高于β-CTX，但特異性低于β-CTX。詳見(jiàn)表5。

3 討論

AS是一種以脊柱、骶髖關(guān)節(jié)慢性炎癥為主的風(fēng)濕性疾病[14]。在大多數(shù)AS患者中，骨量減少甚至骨質(zhì)疏松極為普遍，這大大增加了骨骼的脆性[15]，降低了本病的愈后率[16,17]。骨的轉(zhuǎn)化是一個(gè)動(dòng)態(tài)平衡的過(guò)程，是由破骨細(xì)胞吸收舊骨和成骨細(xì)胞生成新骨共同完成的[18]。在維持這個(gè)動(dòng)態(tài)平衡的過(guò)程中，骨代謝指標(biāo)發(fā)揮了非常重要的調(diào)節(jié)作用[19]。骨代謝指標(biāo)包括骨吸收指標(biāo)β-CTX，骨形成指標(biāo)如OC和BLAP，骨轉(zhuǎn)換標(biāo)志物25-(OH)D和PTH等。有研究表明，骨代謝指標(biāo)的改變往往先于局部性關(guān)節(jié)損傷和全身性骨質(zhì)疏松，更有利于了解相關(guān)疾病骨代謝的動(dòng)態(tài)變化，為其早期診斷提供重要依據(jù)[20]。

表4 CRP和HLA-B27檢測(cè)結(jié)果臨床評(píng)價(jià)

Note：Sen.Represents sensitivity;Spe.Represents specificity;PPV.Represents positive predictive value;NPV.Represents negative predictive value;+LR.Represents positive likelihood ratio;-LR.Represents negative likelihood ratio.

表5 β-CTX和25-(OH)D檢測(cè)結(jié)果ROC曲線分析

在骨吸收指標(biāo)中，β-CTX是Ⅰ型膠原C端肽分解的片段，目前有研究認(rèn)為其是評(píng)價(jià)骨吸收的一個(gè)很有價(jià)值、可靠的指標(biāo)[21,22]。本研究AS組β-CTX水平明顯高于對(duì)照組、Gout組和OA組，低于RA組(P<0.05)，而且β-CTX水平與CRP水平呈較強(qiáng)的正相關(guān)(P<0.05)，這結(jié)果與孔維萍等[23]研究一致，說(shuō)明AS患者存在高程度的骨吸收，并且炎癥能夠促進(jìn)骨吸收，這也與陳鵬凱等[24]報(bào)道基本一致。經(jīng)ROC曲線分析，β-CTX用于AS診斷時(shí)，AUC為0.796，具有一定的準(zhǔn)確率。由此可知，血清β-CTX能更好地體現(xiàn)AS患者的骨代謝異常程度，并為診斷早期的AS提供更好的依據(jù)。在骨形成指標(biāo)中，OC和BLAP是由成骨細(xì)胞合成的，能較好地反映成骨細(xì)胞的活性，其在血清中含量的增減能代表骨形成速率的快慢[25]。本研究AS組的OC水平低于對(duì)照組和SF組，高于RA組(P<0.05)，SF組OC水平高于對(duì)照組，RA組OC水平低于對(duì)照組(P<0.05)。由此分析可得，OC能夠作為鑒別AS和SF的輔助診斷指標(biāo)。而B(niǎo)LAP水平與對(duì)照組無(wú)明顯異常，OC和BLAP與CRP無(wú)相關(guān)性(P>0.05)，提示AS患者可能存在與炎癥無(wú)關(guān)的低程度骨形成抑制體系，這與XU等[26]報(bào)道基本一致。在本研究中，BLAP在診斷AS無(wú)意義，這也與 Arends等[27]研究一致，因此BLAP用于研究AS還有待驗(yàn)證；OC作為骨形成的敏感性指標(biāo)，能夠較好地反映AS患者骨形成抑制程度，為診斷AS病情提供依據(jù)。

在骨轉(zhuǎn)換標(biāo)志物中，因?yàn)榫S生素D活性形式1,25-(OH)2D3不易檢測(cè)，目前臨床上主要通過(guò)檢測(cè)血清25-(OH)D來(lái)反映其變化[28]。PTH是甲狀旁腺主細(xì)胞分泌的堿性單鏈多肽類(lèi)激素，能夠精細(xì)調(diào)節(jié)骨的代謝[29]。本研究AS組25-(OH)D水平顯著低于對(duì)照組、RA組和SF組，其他疾病組25-(OH)D水平也顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，經(jīng)過(guò)相關(guān)性分析，AS組25-(OH)D水平與CRP呈明顯的負(fù)相關(guān)(P<0.05)。國(guó)內(nèi)外許多研究都表明AS患者存在維生素D缺乏與炎癥和免疫異常的特點(diǎn)[30,31]，炎癥和免疫異常在一定程度上能影響相關(guān)器官的生成和分泌功能。而且經(jīng)ROC曲線分析，25-(OH)D用于AS診斷時(shí)，AUC為0.753，具有一定的準(zhǔn)確率。因此，25-(OH)D也能用于診斷和評(píng)估AS病情。AS組PTH水平低于對(duì)照組、RA組和Gout組，且RA組和Gout組PTH水平明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，但經(jīng)相關(guān)性分析，AS組PTH水平和CRP無(wú)相關(guān)性，其原因可能是OC活性降低，導(dǎo)致PTH活性降低，這與路平等報(bào)道基本一致[32]。這說(shuō)明PTH能作為鑒別AS、RA和痛風(fēng)的輔助指標(biāo)。

目前應(yīng)用CRP診斷AS十分常見(jiàn)。本研究結(jié)果顯示，AS組CRP陽(yáng)性率明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，但與其他疾病組無(wú)差異。經(jīng)臨床評(píng)價(jià)，CRP在診斷AS時(shí)雖有相對(duì)較好的敏感性，但缺乏特異性，很多研究都表明它能反映AS患者炎癥程度并與其成正比，且其變化早于臨床癥狀出現(xiàn)之前[33-35]。因此，它能作為判斷AS患者炎癥程度的指標(biāo)。近年來(lái)，HLA-B27的相關(guān)研究成為研究AS發(fā)病的熱點(diǎn)。在本研究中AS組HLA-B27的陽(yáng)性率高達(dá)93.62%，明顯高于對(duì)照組和其他疾病組(P<0.01)，其敏感性和特異性都達(dá)90%以上，能夠較好地診斷AS，這與尤金彪等[36]報(bào)道基本一致。然而HLA-B27在健康人以及RA和OA等疾病中也存在一定的陽(yáng)性率，因此HLA-B27只能作為診斷AS的參考標(biāo)準(zhǔn)。

根據(jù)骨代謝指標(biāo)在以上方面的差異，尤其是β-CTX和25-(OH)D在AS患者中具有顯著的變化特點(diǎn)，再結(jié)合高敏感性和高特異性的HLA-B27進(jìn)行檢測(cè)，能夠?yàn)锳S早期診斷和鑒別提供一定的依據(jù)，為AS患者帶來(lái)福音。

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[收稿2017-04-11 修回2017-05-25]

(編輯 許四平 劉格格)

Potentialclinicalvalueofdetectingmarkersofbonemetabolisminpatientswithankylosingspondylitis

TANLi-Ming,FENGXiao-Jing,JIAOAn-Jun,CHENJuan-Juan,TANFu-Yan,HESi-Qi,XULiu-Yue,JIANGYong-Qing,LUOHeng,LIHua,WUYang,TIANYong-Jian,ZENGTing-Ting,YUJian-Lin,CAOLi-Ping,ZHENGJian-Feng.
DepartmentofClinicalLaboratory,theSecondAffiliatedHospitalofNanchangUniversity,Nanchang330006，China

Objective:To investigate the clinical significance of bone metabolism indexes and human leukocyte antigen B27(HLA-B27)in ankylosing spondylitis(AS)and analyze their diagnostic value.MethodsThe subjects were 94 cases of AS patients,239 cases with other diseases and 80 healthy controls,and the results were retrospectively surveyed.ResultsIn the AS group,the concentration of the β-collagen specific sequence(β-CTX)was higher(P<0.05)while the concentrations of osteocalcin(OC),25-hydroxyvitamin D[25-(OH)D] and parathyroid hormone(PTH)were lower than those in the control group.In the AS group,there was a positive correlation between the concentration of C-reactive protein(CRP)and β-CTX(P<0.01),and the concentration of CRP was negatively correlated with the concentration of 25-(OH)D(P<0.05).However,the concentrations of other bone metabolic indexes had no correlation with the concentration of CRP(P<0.05).The positive rate of HLA-B27 in the AS group was significantly higher than that in other groups(P<0.05),and HLA-B27 had highly sensitive and specific in the diagnosis of AS.In the AS group,the sensitivity of the concentration of 25-(OH)D was higher than β-CTX,while its specificity was lower than β-CTX.ConclusionBone metabolic indexes have great value in early screening and clinical diagnosis of AS,especially β-CTX and 25-(OH)D were more obvious.

Ankylosing spondylitis(AS);Bone metabolism indexes;C-reactive protein(CRP);Human leukocyte antigen B27(HLA-B27)

①本文為江西省科技廳重點(diǎn)科技成果轉(zhuǎn)移轉(zhuǎn)化計(jì)劃(No.20151BBI90047)和江西省科技廳社發(fā)項(xiàng)目(No.2015BBG70154)。

②南昌大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，南昌 330031。

R446.69

A

1000-484X(2017)10-1543-05

10.3969/j.issn.1000-484X.2017.10.021

譚立明(1963年-),男,教授,主任技師,碩士生導(dǎo)師,主要從事自身免疫病的病因及抗體檢測(cè)研究,E-mail:yuuje@126.com。