松花粉輔助紫杉醇聯(lián)合鉑類化療的增效減毒作用

趙學(xué)友，鞏 萍，孫 銅，馬玉奎

(1.山東省臨朐縣人民醫(yī)院，山東 臨朐 262600； 2.山東省食品藥品檢驗(yàn)研究院，濟(jì)南 250101； 3.山東省藥學(xué)科學(xué)院，濟(jì)南 250100)

研究報(bào)告

松花粉輔助紫杉醇聯(lián)合鉑類化療的增效減毒作用

趙學(xué)友1，鞏 萍1，孫 銅2，馬玉奎3*

(1.山東省臨朐縣人民醫(yī)院，山東 臨朐 262600； 2.山東省食品藥品檢驗(yàn)研究院，濟(jì)南 250101； 3.山東省藥學(xué)科學(xué)院，濟(jì)南 250100)

目的研究松花粉對(duì)紫杉醇聯(lián)合鉑類(paclitaxel and cisplatin, TP)方案化療有無(wú)減毒和增效作用。方法取人肺癌H460細(xì)胞株制備的移植瘤裸鼠48只，按瘤體積均衡原則分為模型組、松花粉600、300、150 mg/kg三個(gè)劑量+TP方案化療組、單用TP方案化療組、單用松花粉600、300、150 mg/kg三個(gè)單劑量組，每組6只。各組給予相應(yīng)的藥物后以裸鼠的體重、進(jìn)食量、抑瘤率、血液學(xué)和肝腎功能等為評(píng)價(jià)指標(biāo)，全面評(píng)價(jià)松花粉對(duì)TP化療方案有無(wú)增效和減毒作用。結(jié)果模型動(dòng)物給予TP方案化療的同時(shí)灌胃給予松花粉(150、300、600 mg/kg)可明顯提高單用TP化療方案的抑瘤率，抑制化療藥物引起的體重減輕和攝食量的減少、抑制化療引起的白細(xì)胞降低和肝腎功能的損傷。結(jié)論TP方案化療的同時(shí)給予松花粉具有明顯的增效減毒作用。

松花粉；增效；減毒；肺癌

松花粉(Pini Pollen)藥名松花、松黃，最早記載于唐代的《新修本草》。松花粉是我國(guó)傳統(tǒng)藥材，可藥食兼用的花粉品種，在我國(guó)具有悠久的藥用歷史?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》和《本草綱目》中均記載其“氣味甘平無(wú)毒”，具有潤(rùn)心肺、益氣、利小便、消瘀血等功效，亦可用于釀酒。松花粉富含蛋白質(zhì)、磷脂、礦物質(zhì)和多種維生素和微量元素等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)[1]?，F(xiàn)代藥理研究證明，松花粉具有降脂、延緩衰老、美容養(yǎng)顏、保肝、降糖、提高機(jī)體免疫力等眾多功效[2]。 盡管研究證明眾多中藥均具有抗腫瘤作用，但單味中藥用于抗腫瘤臨床上幾乎沒(méi)有確切療效，臨床一般多輔助化療藥物應(yīng)用[3]。故本文采用人肺癌H460裸鼠移植瘤模型初步考察了松花粉對(duì)TP方案化療的增效和減毒作用，為松花粉進(jìn)一步研究和開(kāi)發(fā)利用提供參考。

1 材料和方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及瘤珠

BALB/c裸鼠，雄性，SPF級(jí)，4周齡，15～17 g，購(gòu)自北京華阜康生物科技股份有限公司[SCXK(京)2014-0004]提供。飼養(yǎng)于山東省藥學(xué)科學(xué)院獨(dú)立送風(fēng)IVC籠具中[SYXK(魯) 2010-0005]。室溫20℃ ～23℃，相對(duì)濕度 40% ～60%。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)過(guò)山東省藥學(xué)科學(xué)院新藥評(píng)價(jià)中心實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用與管理委員會(huì)審查，編號(hào)為IACUC-2015068。人肺癌H460細(xì)胞系，濟(jì)南天長(zhǎng)商貿(mào)有限公司提供。

1.2主要試劑與儀器

松花粉(批號(hào)：14010412，煙臺(tái)新時(shí)代健康產(chǎn)業(yè)有限公司)；紫杉醇注射液(TAX，批號(hào)：E1400520，江蘇奧賽康藥業(yè)股份有限公司)；注射用順鉑(CDDP，批號(hào)：140728，上海新百合藥業(yè)股份有限公司)。

Hemavet 950型全自動(dòng)血球計(jì)數(shù)儀(Drew Scientific公司)；日立7180全自動(dòng)生化分析儀(日本株式會(huì)社日立高新技術(shù))；BPN-50CH(UV)二氧化碳培養(yǎng)箱(上海一恒科學(xué)儀器有限公司)；XSP-18C型倒置生物顯微鏡(上海巴拓儀器有限公司)；電子數(shù)顯卡尺(深圳市格雷創(chuàng)科技有限公司)。

1.3實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 裸鼠移植瘤模型建立及動(dòng)物分組

常規(guī)傳代培養(yǎng)人肺癌H460細(xì)胞，收集細(xì)胞懸液后調(diào)整細(xì)胞數(shù)為每毫升1.0×108～2.0×108個(gè)細(xì)胞。在無(wú)菌條件下將腫瘤細(xì)胞接種于裸鼠右腋皮下，每只0.1 mL。接種后定期測(cè)量腫瘤長(zhǎng)徑、寬徑和高，計(jì)算瘤體積(V=3. 14×寬徑×長(zhǎng)徑×高/6)[4]，當(dāng)腫瘤體積為150～300 mm3時(shí)，按瘤體積均衡原則分為模型組、松花粉600、300、150 mg/kg三個(gè)劑量+TP方案化療組、單用TP方案化療組、單用松花粉600、300、150 mg/kg三個(gè)單劑量組，每組6只。

1.3.2 分組后給藥

松花粉各劑量組裸鼠每天灌胃1次，給予相應(yīng)劑量的藥物溶液，連續(xù)給藥21 d；TP方案化療組于分組后第8天和16天按照16 mg/kg劑量各腹腔注射1次TAX，第10、12和14天按照6.7 mg/kg劑量各腹腔注射1次CDDP。松花粉+TP方案化療組在給予TP方案化療的基礎(chǔ)上給予松花粉；模型組灌胃給予等體積的純水和腹腔注射等體積的0.9%氯化鈉注射液。

1.3.3 結(jié)果檢測(cè)和評(píng)價(jià)

體重和飼料消耗量每3 d稱量1次，21 d藥后3 h戊巴比妥鈉麻醉后腹主動(dòng)脈采血，檢測(cè)主要血液學(xué)指標(biāo)：紅細(xì)胞(RBC)、白細(xì)胞(WBC)、血紅蛋白 (HB)和肝腎功能指標(biāo)：谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、尿素氮(BUN)、肌酐(CR)。采血后取每只動(dòng)物的瘤塊并稱瘤重，按下面公式計(jì)算出抑瘤率和q值[5,6]。

腫瘤抑制率=(A-B)/A×100%，B為藥物組平均瘤重，A為模型組平均瘤重。

q值=E(ab)/[Ea+(1-Ea) ×Eb]，E(ab)為兩種藥物合用的腫瘤抑制率，Ea、Eb為兩種藥物單用的腫瘤抑制率，q大于0.85提示兩種藥物合用有協(xié)同作用。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1松花粉對(duì)化療裸鼠攝食量的影響

裸鼠給予化療藥物后攝食量減少，而同時(shí)給予松花粉后，裸鼠攝食量隨著給藥時(shí)間延長(zhǎng)逐漸恢復(fù)，其中給藥21 d后化療和松花粉300、600 mg/kg合用組裸鼠的攝食量與模型組基本一致。見(jiàn)表1。

2.2松花粉對(duì)化療裸鼠體重的影響

TP方案化療后裸鼠體重逐漸減輕，自12 d開(kāi)始體重明顯低于模型組(P﹤0.05)，而同時(shí)給予松花粉后，裸鼠體重隨給藥時(shí)間延長(zhǎng)逐漸恢復(fù)，給藥21 d后體重明顯高于TP化療組(P﹤0.05)，而與模型組體重基本一致。結(jié)果見(jiàn)表2。

2.3松花粉對(duì)化療藥物的增效作用

與模型組比較，松花粉和TP方案化療合用后瘤重明顯減輕，抑瘤率明顯高于化療或松花粉單用組，其中松花粉300、600 mg/kg和化療合用后q值大于0.85，說(shuō)明松花粉在300 mg/kg以上劑量時(shí)可明顯增強(qiáng)TP方案化療的抗腫瘤作用。結(jié)果見(jiàn)表3。

表1 松花粉對(duì)裸鼠攝食量的影響(n=6)

Tab.2Effects of Pini Pollen on body weight of the model nude mice

組 別Groups劑量/mg/kgDoses體重/g Bodyweight0d6d12d18d21d模型Model—232±17246±20248±17259±19263±17紫杉醇+順鉑Paclitaxel+Cisplatin16+67231±19232±18218±19?212±18?210±21?松花粉+紫杉醇+順鉑PiniPollen+Paclitaxel+Cisplatin600+16+67235±16233±16224±12237±21#242±21#300+16+67230±22229±19222±16234±20#239±19#150+16+67236±20230±18219±16223±15234±14#

注：與模型組比較,*P﹤0.05；與TP組比較,#P﹤0.05。

Note.*P﹤0.05,vs the model group；#P﹤0.05, vs the TP group.

Tab.3Synergistic effects of Pini Pollen on chemotherapy in the model nude mice

組 別Groups劑量/mg/kgDoses瘤重/gTumorweight抑瘤率/%Tumorinhibitionrateq值qvalue模型Model—152±043 ——紫杉醇+順鉑Paclitaxel+Cisplatin16+67070±016?539—松花粉PiniPollen600098±016?##355—300108±026#289—150112±032#263—松花粉+紫杉醇+順鉑PiniPollen+Paclitaxel+Cisplatin600+16+67038±017??750107300+16+67056±026??632094150+16+67068±015?553084

注：與模型組比較,*P﹤0.05,**P﹤0.01; 與松花粉+TP組比較,#P﹤0.05,##P﹤0.01。

Note.*P﹤0.05,**P﹤0.01, vs the model group；#P﹤0.05,##P﹤0.01 vs the Pini Pollen plus TP group.

Tab.4Attenuation effects of Pini Pollen on hematological and blood biochemical toxicity caused by chemotherapy in the model nude mice

組 別Groups劑量/mg/kgDosesWBC/109/LRBC/1012/LHB/g/LALT/U/LAST/U/LCR/μmol/LBUN/mmol/L模型Model—731±099101±15136±21691±1781487±194300±3569±12紫杉醇+順鉑Paclitaxel+Cisplatin16+67451±067??91±09120±221250±299?2211±324??542±40??107±20?松花粉+紫杉醇+順鉑PiniPollen+Paclitaxel+Cisplatin600+16+67688±195#104±20126±21791±211#1623±215#351±76#79±11#300+16+67631±099#98±16113±19855±178#1802±243#419±68#83±12#150+16+67560±122?100±20122±10982±254?1972±310?461±64??87±21

注：與模型組比較,*P﹤0.05,**P﹤0.01；與TP化療藥物組比較,#P﹤0.05。

Note.*P﹤0.05,**P﹤0.01, vs the model group；#P﹤0.05, vs the TP group.

2.4松花粉對(duì)化療引起的血液學(xué)和血液生化學(xué)毒性減毒作用

與模型組比較，裸鼠WBC數(shù)量化療后明顯減少，血清中ALT、AST、CR和BUN含量明顯升高，與單用化療藥物組比較，同時(shí)給予松花粉300、600 mg/kg后裸鼠WBC數(shù)量明顯增多，血清中ALT、AST、CR和BUN含量明顯降低(P﹤0.05)，說(shuō)明松花粉在300 mg/kg以上劑量可明顯抑制TP方案化療藥物引起的白細(xì)胞減少和肝腎功能損傷。各個(gè)劑量對(duì)RBC和HB無(wú)明顯影響。結(jié)果見(jiàn)表4。

3 討論

我國(guó)惡性腫瘤的發(fā)病率和死亡率逐年上升，我國(guó)每年新發(fā)腫瘤病例300多萬(wàn)，腫瘤病人死亡人數(shù)占全球的四分之一左右，已成人類死亡的主要原因[7]。臨床上根據(jù)腫瘤的不同生長(zhǎng)部位、不同病理類型、不同分期、患者的具體情況等會(huì)選擇化療、放療、手術(shù)治療以及中醫(yī)藥治療等不同的治療方式。其中，化療時(shí)最常用的治療方式，但多數(shù)化療藥物存在選擇性差，毒副作用大，容易耐藥等缺陷，嚴(yán)重制約著化療的效果。而中醫(yī)藥治療具有多靶點(diǎn)和多環(huán)節(jié)效應(yīng)以及副作用小等化藥不具有的優(yōu)勢(shì)，但也存在諸如治療的腫瘤和療效有限、作用機(jī)制不明確等眾多缺陷，故臨床上中藥多與化療藥物合用，通過(guò)增強(qiáng)機(jī)體免疫力、活血化瘀、扶正驅(qū)邪、補(bǔ)氣養(yǎng)血、清熱解毒、調(diào)理臟腑等多個(gè)方面增強(qiáng)化療藥物療效的同時(shí)降低毒副反應(yīng)，改善腫瘤患者的生活狀態(tài)，提高腫瘤患者化療的耐受性等[8,9]。

選擇合適的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型是新藥藥效評(píng)價(jià)的重要一環(huán)，目前抗腫瘤藥物的增效減毒作用研究多采用S180腹水癌小鼠模型，研究對(duì)于環(huán)磷酰胺等單個(gè)化療藥物的輔助作用，但此模型與臨床實(shí)際應(yīng)用存在較大差異，例如腫瘤細(xì)胞來(lái)源為鼠源性而非人源性瘤株，臨床化療一般不會(huì)單個(gè)藥物而多采用多種化療藥物聯(lián)合應(yīng)用等。因此本文采用了人源性的H460非小細(xì)胞肺癌瘤珠制備裸鼠移植瘤模型，給予非小細(xì)胞肺癌國(guó)際治療指南中推薦的TP標(biāo)準(zhǔn)化療方案，選擇抑瘤率作為增效指標(biāo)，化療最常見(jiàn)的食欲不振、體重減輕、白細(xì)胞減少和肝腎功能損傷作為減毒指標(biāo)，初步模擬臨床治療現(xiàn)狀來(lái)研究松花粉的增效減毒作用。

本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果證明，裸鼠給予TP方案化療后出現(xiàn)了體重減輕、進(jìn)食量減少、WBC減少、肝腎功能受損等臨床腫瘤病人化療后最容易出現(xiàn)的不良反應(yīng)，說(shuō)明此模型復(fù)制成功，能夠較好地模擬臨床實(shí)際。化療的同時(shí)灌胃給予松花粉后，不良反應(yīng)明顯減輕，體重和進(jìn)食量隨著給藥次數(shù)增多逐漸恢復(fù)正常。與TP方案化療組小鼠比較，合用松花粉21d時(shí)檢測(cè)WBC數(shù)量明顯增多，血清中AST、ALT、CR、BUN含量明顯降低，說(shuō)明松花粉對(duì)血液系統(tǒng)和肝腎功能具有明顯保護(hù)作用。抑瘤效果顯示，TP方案化療和松花粉合用后，與單純TP方案化療相比，對(duì)H460裸鼠移植瘤的抑瘤效果顯著增強(qiáng)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果初步證明，松花粉對(duì)化療藥物具有明顯的增效和減毒作用，其作用可能與松花粉具有抗氧化、保肝、提高免疫力、抗腫瘤作用有關(guān)[2,10]，其確切的作用機(jī)制仍有待于進(jìn)一步研究。

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SynergismandattenuationeffectsofPiniPollenonpaclitaxelandcisplatinechemotherapy

ZHAO Xue-you1， GONG Ping1， SUN Tong2， MA Yu-kui3*

(1.People’s Hospital of Linqu County, Linqu 262600，China； 2.Shandong Institute for Food and Drug Control, Jinan 250101； 3.Shandong Pharmaceutical Academy, Jinan 250100)

ObjectiveTo investigate the synergism and attenuation effects of Pini Pollen on paclitaxel and cisplatin (TP) chemotherapy in model mice.MethodsForty-eight model nude mice with H456 cell line xenograft were divided into 8 groups: model group, TP chemotherapy group, Pini Pollen (150, 300 and 600 mg/kg)group and TP chemotherapy plus Pini Pollen (150, 300 and 600 mg/kg)group. The tumor inhibition rates, body weight, food intake, hematology and blood biochemistry indexes were selected to evaluate the synergism and attenuation effects of intragastric administration of Pini Pollen (150,300,600 mg/kg) on TP chemotherapy.ResultsCompared with the TP chemotherapy group, the tumor inhibition rates, body weight, food intake, white blood cell count were increased and liver and kidney function damage were alleviated significantly in the TP chemotherapy plus Pini Pollen groups.ConclusionsPini Pollen has a significant synergism and attenuation effects on TP chemotherapy.

Pini Pollen; Synergism; Attenuation; Lung Cancer

R-33

A

1671-7856(2017) 10-0047-04

10.3969.j.issn.1671-7856. 2017.10.009

2017-02-06

山東省自主創(chuàng)新及成果轉(zhuǎn)化專項(xiàng)(2014ZZCX02104)。

趙學(xué)友(1975-)，男，主管藥師，本科， 研究方向：臨床藥學(xué)。E-mail: yaoliduli@163.com

馬玉奎 (1975-)，男，主任藥師，博士，研究方向：新藥藥理毒理評(píng)價(jià)。 E-mail: yukuima@sina.com