徐 勇 孫培龍 張安強(qiáng)

姬松茸多糖提取、生物活性及產(chǎn)品開發(fā)研究進(jìn)展

徐 勇 孫培龍 張安強(qiáng)*

（浙江工業(yè)大學(xué)食品科學(xué)技術(shù)系，浙江杭州 310014）

姬松茸藥食兼用，營(yíng)養(yǎng)豐富，而姬松茸多糖是其重要的生物活性成分，具有抗腫瘤、抗氧化、抗輻射、免疫調(diào)節(jié)、抗病毒和降血糖等作用。綜述姬松茸多糖的提取、分離純化、結(jié)構(gòu)分析、生物學(xué)活性以及產(chǎn)品開發(fā)現(xiàn)狀及其市場(chǎng)化前景。

姬松茸多糖；分離純化；結(jié)構(gòu)分析；生物學(xué)活性；產(chǎn)品開發(fā)

姬松茸（Murill，ABM）又名巴西蘑菇，原產(chǎn)于巴西，是一種藥食兼用的珍稀食用菌，因具有重要的藥用價(jià)值，我國(guó)和日本廣泛種植。姬松茸富含多糖、蛋白質(zhì)、核酸、脂肪、皂甙、單寧、甾醇、礦物質(zhì)、微量元素及人體必需的氨基酸等[1]，其中姬松茸多糖是其發(fā)揮作用的主要活性物質(zhì)[2]。其在抗腫瘤[3]、降低血糖[4]、抗疲勞[5]、抗氧化[6]等方面具有顯著效果，可用來治療癌癥、心臟病、肥胖癥等疾病[7～9]。

1 姬松茸多糖的提取分離制備及其結(jié)構(gòu)分析

1.1 姬松茸多糖提取

目前姬松茸多糖提取分為子實(shí)體多糖提取[9]和菌絲體發(fā)酵多糖提取[10]，提取方法主要有溶劑提取法（熱水浸提法）、酶提取法、超聲波提取法、微波提取法、高速剪切提取法和堿提法（表1）。為提高多糖的得率，須對(duì)各方法進(jìn)行溫度、料液比、提取時(shí)間、萃取介質(zhì)、超聲功率等因素的響應(yīng)面優(yōu)化。

表1 姬松茸多糖的提取工藝

1.2 姬松茸多糖的分離純化和結(jié)構(gòu)研究

目前多糖常采用離子交換和凝膠分子篩層析等方法進(jìn)行分離純化，高效液相色譜（HPLC）法用于多糖的純度鑒定和分子量的測(cè)定，應(yīng)用紫外光譜法（UV）、紅外光譜（IR）、質(zhì)譜（MS）、核磁共振（NMR）等進(jìn)行多糖結(jié)構(gòu)鑒定等。

孫培龍采用分級(jí)醇沉得到ABMP-Ⅰ和ABMP-Ⅱ兩純品，分子量分別為＞2 000 kDa和1 400 kDa[16]。經(jīng)鑒定，ABMP-Ⅰ其糖鏈?zhǔn)且?,4連接的吡喃型葡萄糖為主鏈并含有少量結(jié)合蛋白的非淀粉α葡聚糖；而ABMP-Ⅱ可能是含有一吡喃型葡萄糖基的蛋白聚糖[16]。Gonzaga從姬松茸子實(shí)體多糖中分離得到β-葡聚糖，并且實(shí)驗(yàn)分析結(jié)構(gòu)為β-1,6-葡聚糖[17]。Liu分離純化得到的ABP-AW1組分，經(jīng)鑒定其主鏈由（1→6）-β-D-吡喃半乳糖基，（1→6）-β-D-吡喃葡萄糖基和（1→3,6）-β-D-吡喃葡萄糖基組成，側(cè)鏈連接在（1→3,6）-β-L-吡喃葡萄糖基的O-3位置上，由（1→）-β-L-阿拉伯呋喃糖苷和（1→）-β- D-吡喃葡萄糖組成，6種糖基比例為20︰10︰10︰6︰6︰2︰2[18]。

2 姬松茸多糖的生物學(xué)活性

2.1 抗腫瘤

研究表明，多糖的糖鏈能通過抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和分化直接作用于腫瘤細(xì)胞，調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長(zhǎng)與衰老，也可通過增強(qiáng)免疫力或誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡而發(fā)揮抗腫瘤作用[19～21]。Vercosa等在pH 4和pH 7條件下分別用熱水浸提和超聲提取得到4種姬松茸多糖，研究其對(duì)腫瘤誘導(dǎo)的γ球蛋白含量的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)姬松茸多糖具有抗腫瘤活性[22]。秦曉飛等研究姬松茸多糖對(duì)體外培養(yǎng)小鼠樹突狀細(xì)胞（DC）的影響，發(fā)現(xiàn)姬松茸多糖能促進(jìn)DC分化成熟，增強(qiáng)DC的抗腫瘤作用[23]。孫培龍等將小鼠接種S180實(shí)體瘤腫瘤細(xì)胞，后又做肝癌腹水小鼠實(shí)體瘤試驗(yàn)，分別用分離純化得到的ABMP-Ⅰ和ABMP-Ⅱ兩種姬松茸多糖純品灌胃給藥，發(fā)現(xiàn)姬松茸多糖有較好的抑瘤作用，其中ABMP-Ⅰ組分多糖抑瘤率分別為46.3%和53.4%，ABMP-Ⅱ組分多糖抑瘤率分別為38.7%和40.1%[16]。

近幾年，姬松茸多糖的抗腫瘤活性機(jī)理研究是一個(gè)熱門，有學(xué)者通過試驗(yàn)分析了抗腫瘤活性的潛在機(jī)理。Liu等分析證明姬松茸多糖是特異性TLR2激動(dòng)劑，并且通過與Gr-1（+）CD11b（+）MDSCs相反的抑制功能而具有抗腫瘤活性[24]。林祥偉等實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)姬松茸粗多糖能抑制K562細(xì)胞增殖，并且可以誘導(dǎo)其凋亡，其作用機(jī)制與NF-κB通道的異常激活明顯相關(guān)[25]。

2.2 免疫調(diào)節(jié)

大量研究表明，姬松茸多糖具有免疫調(diào)節(jié)活性。國(guó)內(nèi)外學(xué)者利用小鼠脾細(xì)胞等不同的研究對(duì)象，通過不同的試驗(yàn)方法，探究姬松茸多糖的免疫調(diào)節(jié)活性機(jī)理。Martins等研究發(fā)現(xiàn)用巴西乳桿菌的酸處理姬松茸多糖富集部分（ATF）可顯著增加單核細(xì)胞對(duì)白色念珠菌的粘附/吞噬作用[26]。李晨光等研究發(fā)現(xiàn)熱水浸提除蛋白后得到的姬松茸子實(shí)體多糖可以促進(jìn)巨噬細(xì)胞生成細(xì)胞因子IL-1β、TNF-α、IFN-β[4]。王宏艷等發(fā)現(xiàn)低分子多糖（LMPAB，50 kD）可明顯促進(jìn)免疫小鼠Ig G1、Ig G2b和Ig G表達(dá)[27]。蔣麗艷等發(fā)現(xiàn)姬松茸水溶性多糖（ABP-AW1）能顯著促進(jìn)免疫低下小鼠脾T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)[28]。路垚等通過測(cè)脾臟中細(xì)胞因子IL-2、IL-4、INF-γ 的相對(duì)表達(dá)量，發(fā)現(xiàn)姬松茸多糖有良好的免疫調(diào)節(jié)作用，且磷酸化姬松茸多糖對(duì)小鼠脾臟細(xì)胞因子表達(dá)的影響高于姬松茸多糖[29]。

2.3 降血糖

糖尿病在我國(guó)發(fā)病率極高。人體胰島素分泌缺乏會(huì)影響人體糖、脂肪、蛋白質(zhì)的正常代謝，從而導(dǎo)致糖尿病的形成，所以降低血糖的食品越來越受到人們的重視和關(guān)注。呂娟等對(duì)小鼠注射滅菌鏈脲佐菌素成功建立糖尿?。―M）大鼠試驗(yàn)?zāi)Ｐ?，發(fā)現(xiàn)姬松茸多糖具有降血糖作用，并且具有一定的量效關(guān)系[30]。李龍等給小鼠注射鏈脲佐霉素，誘導(dǎo)非胰島素依賴型糖尿病模型，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，姬松茸多糖可降低Ⅱ型糖尿病小鼠的空腹血糖，提高空腹胰島素水平，改善胰島β細(xì)胞分泌[31]。

2.4 防輻射

太陽(yáng)光、手機(jī)、電腦、醫(yī)院放射設(shè)備等放出的紫外線、X射線等，都可能會(huì)對(duì)人體健康造成不良影響。輻射可引起機(jī)體物質(zhì)代謝紊亂、造成機(jī)體免疫系統(tǒng)損傷，還會(huì)引起機(jī)體多種器官的氧化損傷，嚴(yán)重破壞體內(nèi)防御系統(tǒng)[32]，所以輻射保護(hù)越來越受到人們的關(guān)注。

周國(guó)清等通過大鼠給予直線加速器X射線建模，發(fā)現(xiàn)姬松茸多糖可顯著提高輻射損傷大鼠的淋巴細(xì)胞增殖活性和紅細(xì)胞溶血度，對(duì)輻射損傷大鼠的免疫調(diào)節(jié)具有一定的保護(hù)作用[32]。朱燕等選擇人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞（HaCaT）作為受試細(xì)胞，在體外建立中波紫外線（UVB）照射致 HaCaT 細(xì)胞光損傷模型，發(fā)現(xiàn)姬松茸粗多糖在適宜濃度時(shí)可抑制UVB誘導(dǎo)的細(xì)胞光損傷，并提高其細(xì)胞存活率[33]。

2.5 其他作用

姬松茸多糖還具有抗炎、抗衰老、抗氧化和提高記憶的功能。門繼光等通過雞卵白蛋白（OVA）誘導(dǎo)建立支氣管哮喘小鼠模型。結(jié)果顯示，姬松茸多糖有效抑制哮喘小鼠氣道炎癥細(xì)胞，減輕氣道炎癥反應(yīng)，具有一定的抗炎作用[34]。高尚龍等給小鼠進(jìn)行姬松茸多糖溶液灌胃，發(fā)現(xiàn)衰老小鼠的肝臟組織T-AOC活性得到顯著提高，MDA含量降低，血液中ALT活性降低，表明其具有較好的抗衰老活性[35]。呂娟等研究姬松茸多糖對(duì)糖尿病大鼠氧自由基的影響，發(fā)現(xiàn)其有抗氧化作用，能減輕腎組織氧自由基損失[36]。劉曉慶等研究姬松茸多糖清除DPPH、ABTS自由基的能力以及還原力，發(fā)現(xiàn)姬松茸多糖具有抗氧化能力[1]。黃清松等研究發(fā)現(xiàn)姬松茸粗多糖可增強(qiáng)D-半乳糖致腦老化模型小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，其作用機(jī)制與提高腦老化小鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞線粒體膜電位和抑制細(xì)胞凋亡有關(guān)[37]。

3 姬松茸產(chǎn)品開發(fā)

姬松茸在調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)，增強(qiáng)機(jī)體免疫力，防癌抗疲勞等方面療效顯著，并且無(wú)任何毒副作用，因此利用其作為材料，制成多種醫(yī)藥用品、保健品和功能食品配料等具有廣闊的開發(fā)前景。王航等以姬松茸菌絲體多糖為材料，按1︰1加入微晶纖維素制備保肝膠囊[38]。郜鵬云等在姬松茸多糖溶液中加入黃芩、板藍(lán)根、甘草、金銀花經(jīng)高壓滅菌后制成復(fù)方姬松茸口服液[39]。趙肖通等優(yōu)化姬松茸多糖泡騰片的配方，采用濕粉制粒壓片法制得的多糖分散片，可以作為保健品使用[40]。方雪等以姬松茸發(fā)酵液和牛奶為主要原料，以嗜熱鏈球菌和保加利亞乳桿菌為發(fā)酵劑，研制出一種具有營(yíng)養(yǎng)保健功能的酸奶[41]。劉亞兵等將傳統(tǒng)餅干與姬松茸、牛骨粉配合，優(yōu)化配方設(shè)計(jì)，制得的餅干既美味又營(yíng)養(yǎng)豐富[42]。張良等將金針菇煮制、脫水、配料，與姬松茸混合加油拌料，殺菌熟化制備而成姬松茸金針菇即食產(chǎn)品[43]。甄佳美等將姬松茸加到小麥粉中，采用二次擠出技術(shù)制備出姬松茸面條[44]。

4 展 望

姬松茸含有多糖、甾醇類等生物活性物質(zhì)，具有抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、抗衰老、抗疲勞、抗炎等生物活性，且營(yíng)養(yǎng)豐富，食藥兩用，開發(fā)前景廣闊。近幾年，國(guó)內(nèi)外研究人員對(duì)姬松茸的多糖結(jié)構(gòu)及生物活性進(jìn)行了大量的研究，也研發(fā)出一系列產(chǎn)品，越來越受到人們的關(guān)注。雖然研究證實(shí)姬松茸多糖活性的報(bào)道很多，但是探究其機(jī)制的卻較少，對(duì)姬松茸抑菌性方面的研究也不夠廣泛，所以應(yīng)加大對(duì)姬松茸作用機(jī)理的研究，為姬松茸多糖食品、藥品和保健品的開發(fā)提供理論指導(dǎo)，大規(guī)模、大范圍地將姬松茸產(chǎn)品市場(chǎng)化。

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Research progress on preparation analysis, biological activities and product development of polysaccharides fromMurill

Xu Yong Sun Peilong Zhang Anqiang*

（Department of Food Science and Technology, Zhejiang University of Technology, Hangzhou 310014, China）

Murill is a valuable edible and medicinal mushroom with rich nutrition. Polysaccharides are the most important active ingredients ofMurill. It has been widely concerned for its anti-tumor, anti-oxidation, anti-radiation, immune regulation, anti-virus and hypoglycemic bioactivities. In this paper, the extraction, isolation and purification, structural analysis, biological activity, and product development were reviewed for the further research ofMurill.

Murill polysaccharide; isolation and purification; structural analysis; biological activity; product development

S646

A

2095-0934（2017）05-308-05

國(guó)家自然基金面上項(xiàng)目（31671813）

徐勇，男，碩士研究生，從事食品活性物質(zhì)分離檢測(cè)

*通訊作者：張安強(qiáng)，男，博士，副教授，從事功能食品檢測(cè)與開發(fā)，E-mail：zhanganqiang@zjut.edu.cn