陳鵬 鄭彥慧

(1.石家莊生產力促進中心，河北 石家莊 050091;2.石家莊財經(jīng)職業(yè)學院,河北 石家莊 050061)

膠束熒光分光光度法測定鹽酸小檗堿片中小檗堿的含量

陳鵬1鄭彥慧2

(1.石家莊生產力促進中心，河北 石家莊 050091;2.石家莊財經(jīng)職業(yè)學院,河北 石家莊 050061)

用乙醇提取鹽酸小檗堿片中小檗堿，加入十二烷基硫酸鈉(SDS)，用膠束熒光分光光度法測定小檗堿含量。熒光檢測波長,Ex=345nm,Em=530nm,工作曲線線性范圍0.16μg.mL-1～1.8μg.mL-1，檢出限6.67ng.mL-1，回收率為100.38%(RSD=0.83%)，測得鹽酸小檗堿片中每片含0.109g鹽酸小檗堿，與規(guī)定值0.1g/片相近。本方法簡單、無毒、準確，具有一定的參考價值。

小檗堿；十二烷基硫酸鈉；膠束熒光分光光度法

對于小檗堿含量的測定已經(jīng)有多種方法，如高效液相色譜法[1]，薄層色譜-熒光分光光度法[2]，酸性染料比色法[3]，熒光分光光度法[4]，紫外分光光度法[5]等。熒光分光光度法靈敏度高，檢出限低，但鹽酸小檗堿本身的熒光強度很弱[6]，熒光量子產率只有0.008，本文采用膠束熒光分光光度法，用無水乙醇浸泡鹽酸小檗堿片溶出鹽酸小檗堿，加入十二烷基硫酸鈉(SDS)提高靈敏度，測量鹽酸小檗堿片中鹽酸小檗堿的含量。實驗結果表明：膠束熒光分光光度法具有設備簡單，操作方便，測定的小檗堿含量準確，可用于藥品中小檗堿的質量控制。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

F-4500熒光分光光度計(Hitachi)； 868型PH/ISE測試儀(Orion)。

1.2 試劑

鹽酸小檗堿(Berberine Hydrochloride Berb編號:110713-200208，中國藥品生物制品檢定所)；鹽酸小檗堿片(東北制藥總廠，每片0.15g含0.1g鹽酸小檗堿)，十二烷基硫酸鈉(SDS分析純)，三酸(磷酸、硼酸和乙酸)與氫氧化鈉溶液。

2 方法與結果

2.1 試液的制備

(1)對照品溶液的制備。精密稱定干燥至恒重的鹽酸小檗堿純品4.00mg， 用乙醇溶解并定容于100mL容量瓶中,得40.00μg﹒mL-1的貯備液。(2)供試品溶液的制備。鹽酸小檗堿片,研磨成粉末,分別精密稱取適量粉末3份于3個錐形瓶中，用乙醇浸泡24小時后，過濾，用乙醇定容于100ml容量瓶中，即得供試品溶液。(3)SDS溶液的制備。精密稱定7.20gSDS,用純凈水溶解，定容于250ml容量瓶中，得0.10mol﹒L-1的SDS溶液。

2.2 測定條件的確定

(1)SDS的影響。SDS為表面活性劑，能形成膠束，膠束的存在,大大降低了熒光分子的非輻射過程速率,而輻射速率常數(shù)改變不大，因此,量子效率增加,激發(fā)光壽命增長,客體分子穿入、吸附和包絡于膠束內外,使其行動受到限制,客體分子有效吸光面積、摩爾吸光系數(shù)增加,其激發(fā)態(tài)也不易被溶液中熒光熄滅體碰撞而獲得保護,從而熒光增強[6]。

加入SDS后，小檗堿的熒光量子產率提高，提高了靈敏度，用熒光分光光度計掃描，鹽酸小檗堿的最大激發(fā)波長為345nm，最大發(fā)射波長為530nm，SDS在此處無熒光，當鹽酸小檗堿加入SDS后，此處熒光強度增強，未見紅移和紫移現(xiàn)象，且當達到SDS的臨界濃度0.008mol﹒L-1后，SDS形成穩(wěn)定的膠束，鹽酸小檗堿的熒光強度幾乎不變。

(2)pH的影響。固定鹽酸小檗堿的濃度，固定SDS的濃度為0.01mol ﹒L-1，改變pH 值，見圖1。

圖1 鹽酸小檗堿在不同pH下的熒光光譜(左)和530nm處熒光強度隨PH變化曲線(右)

鹽酸小檗堿的熒光性質穩(wěn)定，熒光強度隨PH變化穩(wěn)定，測鹽酸小檗堿片中鹽酸小檗堿的含量時，加入SDS，選擇中性條件下，固定激發(fā)波長345nm，發(fā)射波長530nm進行測定。

2.3 實驗方法

(1)工作曲線的繪制。分別吸取濃度為40.00μg﹒mL-1的鹽酸小檗堿純品溶液0.04，0.05，0.08，0.1，0.15，0.2，0.25，0.35,0.45ml于10ml容量瓶中，再分別加入5.00ml 0.10mol﹒L-1的SDS溶液，用純凈水定容于10ml，搖勻，在Ex=345nm、Em=530nm波長處掃描熒光光譜，見圖2。以熒光強度為縱坐標，含量為橫坐標作工作曲線，見圖3。鹽酸小檗堿含量在0.16～1.80μg﹒mL-1范圍內線性關系良好，回歸方程為： Y＝42.45026 ＋335.66581X ，r=0.99934。

圖2 鹽酸小檗堿激發(fā)，發(fā)射光譜圖

圖3 工作曲線圖

(2)檢出限。在激發(fā)波長345nm，發(fā)射波長530nm處，掃描空白信號，測得鹽酸小檗堿的最低檢測限為6.67ng﹒mL-1。

(3)精密度實驗。分別精密量取鹽酸小檗堿貯備液0.20ml于六個10ml容量瓶中,分別加入5ml0.1mol﹒L-1的SDS溶液，用純凈水定容于10ml，搖勻，在Ex=345nm、Em=530nm波長處測定熒光強度，按2.3.1法測定，RSD(%)為1.36%(n=6)。

(4)加樣回收率實驗。精密稱取已知含量的同一樣品共五份,分別精密加入鹽酸小檗堿純品貯備液0.05ml,各份依照樣品測定方法操作,計算回收率，見表1。

表1 鹽酸小檗堿片中的回收率

2.4 供試品溶液中鹽酸小檗堿含量測定

分別從三份供試品溶液中精密吸取一定量的溶液于10ml容量瓶中，分別加入5.00ml 0.1mol﹒L-1的SDS溶液，用純凈水定容，按2.3.1法測定，用回歸方程計算小檗堿含量。測定結果見表2。

表2 供試品中鹽酸小檗堿的含量

3 討論

實驗中，用乙醇浸泡鹽酸小檗堿片12，14，18，20，24小時，測得鹽酸小檗堿的含量相近，所以，用乙醇浸泡12小時時，鹽酸小檗堿幾乎全部溶出。

小檗堿含量測定方法中，高效液相層析法,薄層掃描法等有很高的精確度和準確度，并能快速的測定含量，但都會用到有毒溶劑，有一定的局限性。本方法無有毒試劑，測得小檗堿的含量的精密度、檢出限和回收率均能得到滿意的結果，可作為藥品中小檗堿的質量評價。

[1]黃海燕,薛漓.高效液相色譜法測定三黃片中鹽酸小檗堿的含量[J],藥物鑒定,2006,15(10):18-19.

[2]楊廣德,楊二庫,王嗣岑,賀浪沖.薄層色譜-熒光分光光度法測定黃連中小檗堿的含量[J],西北藥學雜志,2000,15(4):159.

[3]左梅香,龔經(jīng)瑋,喬志儉.酸性染料比色法測定黃連中小檗堿的含量[J].蘭州醫(yī)學院學報,2000,3(1):10-11.

[4]王大杰.熒光分光光度法測定小檗堿的含量[J].成都大學學報,2005,24(4):262-264.

[5]洪美華.紫外分光光度法測定鹽酸小檗堿片含量[J],實用醫(yī)學雜志,1998,14(10):778-779.

[6]潘祖亭,關洪亮,原華平,李微,陳果.熒光光譜法在藥物分析中的應用[J],吉首大學學報(自然科學版),2005,26(3):28－34.

陳鵬(1982- )，男，漢，河北石家莊人，助理研究員，碩士學位，主要從事科研和科技服務工作。

國家自然科學基金資助(20675025)