乳腺癌組織中P38、VEGF表達與其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后的關(guān)系

陸 清 梁宏莉 江 科 夏亞琳 薛曉紅

乳腺癌組織中P38、VEGF表達與其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后的關(guān)系

陸 清 梁宏莉 江 科 夏亞琳 薛曉紅

目的探討乳腺癌組織中P38、VEGF表達與其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后的關(guān)系。方法選取經(jīng)病理證實為乳腺癌患者88例為研究對象。采用SP法檢測P38、VEGF蛋白在乳腺癌組織中的表達，應(yīng)用COX回歸模型，探討P38、VEGF表達與乳腺癌預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果88例患者中P38陽性表達67例，陰性21例；VEGF陽性56例 陰性32例。所有患者均隨訪到2016年1月31日，以死亡或腫瘤轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)為終點事件，出現(xiàn)終點事件的患者17例；P38、VEGF在Ⅲ期乳腺癌組織中表達水平明顯高于Ⅰ、Ⅱ期，而與患者年齡、腫瘤大小無明顯相關(guān)性。復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移患者中P38、VEGF陽性率明顯高于無轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)者，差異顯著，具有統(tǒng)計學(xué)意義，P<0.05；多因素分析提示：腫瘤分期(P=0.01)、P38陽性(P=0.001)、VEGF陽性(P=0.02)是乳腺癌患者轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)的獨立危險因素。結(jié)論P38、VEGF陽性表達患者的轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)率高，P38、VEGF陽性是患者轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)的獨立風(fēng)險因素。

乳腺癌；復(fù)發(fā)；轉(zhuǎn)移

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:1398～1400)

惡性腫瘤特征之一是細胞自主持續(xù)地分裂與繁殖。近年，越來越多的學(xué)者認為腫瘤是一種細胞周期疾病[1]。有關(guān)細胞周期增生調(diào)控的分子機制研究證實相關(guān)蛋白可以反映多種人體腫瘤中細胞增殖狀態(tài)的標志物[2]。分裂原活化蛋白激酶(MAPK)是細胞內(nèi)參與細胞生長、分化的主要信息傳遞系統(tǒng)，與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，P38是MAPK家族的重要成員，已有研究證實P38在乳腺癌組織中表達明顯高于正常組織[3-4]。血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)是促進血管生成的重要原因之一，在多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)過程中發(fā)揮重要作用。已有臨床研究證實，VEGF在乳腺癌患者早期即可呈陽性[5]。本研究分析我院88例乳腺癌患者病理活檢時乳腺癌組織中P38、VEGF蛋白的表達水平，探討P38、VEGF蛋白的表達水平與患者轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取本院2009年1月至2011年1月收治并經(jīng)病理證實為乳腺癌的患者88例為研究對象，入選標準：①經(jīng)病理組織學(xué)活檢確診為乳腺癌；②患者及家屬均同意進行，既往未接受化療及放療等抗癌治療；③術(shù)前行全身檢查排除遠處轉(zhuǎn)移。排除標準：①合并嚴重心血管系統(tǒng)疾病、肝腎功能不全的患者；②精神異常患者；③合并其他腫瘤的患者；④嚴重免疫功能缺陷。年齡35～65歲，平均(59.7±8.5)歲，體重43～62 kg，平均(52.3±3.5 )kg；收集患者臨床資料，記錄可能影響患者腫瘤分期、年齡、腫瘤大小、轉(zhuǎn)移例數(shù)、復(fù)發(fā)例數(shù)，所有患者均隨訪到2016年1月31日，以死亡或腫瘤轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)為終點事件。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準，所有患者均簽署知情同意書。

1.2 主要試劑

兔抗人P38多克隆抗體及VEGF兔多克隆抗體購自Cell Signaling 公司，辣根過氧化物酶標記的羊抗兔二抗、S-P超敏免疫組化試劑盒購自北京中山生物技術(shù)有限公司。

1.3 P38、VEGF免疫組織化學(xué)染色及檢測

采用SP法檢測乳腺癌組織中P38、VEGF表達：組織標本以10%甲醛液固定24 h，常規(guī)石蠟包埋，制備5 μm厚連續(xù)切片，貼附于涂有APES處理的載玻片上，60 ℃烤片2 h。免疫組織化學(xué)染色：①石蠟切片脫蠟至水；②3%H2O2室溫孵育5～10 min，以消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性，蒸餾水沖洗，PBS浸泡5 min；③微波抗原修復(fù)；④5%～10%正常山羊血清封閉，室溫孵育10 min，傾去血清，分別滴加P38、VEGF-抗工作液，37 ℃孵育1～2 h，PBS沖洗，5 min×3次。⑤滴加生物素標記的二抗，37 ℃孵育20～30 min，PBS沖洗，5 min/次，共3次。⑥滴加辣根酶標記鏈酶卵白素，37 ℃孵育20～30 min，PBS沖洗，5 min/次，共3次。⑦DAB顯色；⑧自來水充分沖洗、復(fù)染、封片。用已知陽性標本作陽性對照，以PBS代替一抗作陰性對照。陽性結(jié)果呈棕黃色或棕褐色顆粒，不同生物學(xué)指標在細胞中的著色部位不同。每張切片隨機取3個高倍視野，以陽性細胞比例的平均值定義為該腫瘤的陽性細胞百分比。

1.4 隨訪

所有患者每隔3個月進行隨訪，以死亡或腫瘤轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)為終點事件，最后一次隨訪時間為2016年1月30日。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 一般資料

88例患者，P38陽性表達67例，陰性21例；VEGF陽性56例 陰性32例。所有患者均隨訪到2016年1月31日，以死亡或腫瘤轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)為終點事件，出現(xiàn)終點事件的患者17例。

2.2 P38、VEGF表達與乳腺癌臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)的關(guān)系

P38、VEGF在Ⅲ期乳腺癌組織中表達水平明顯高于Ⅰ、Ⅱ期，而其與患者年齡、腫瘤大小無明顯相關(guān)性。復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移患者中P38、VEGF陽性率明顯高于無轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)者，差異顯著，P<0.05，見表1。

表1 P38、VEGF表達與乳腺癌臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的關(guān)系/例

2.3 P38、VEGF表達與患者轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的關(guān)系

17例復(fù)發(fā)者中，P38、VEGF陽性率明顯高于未復(fù)發(fā)者。將性別、年齡、腫瘤大學(xué)、腫瘤分期、P38、VEGF水平等作為變量引入Cox回歸模型，單因素分析提示：術(shù)前腫瘤分期(P=0.02)、P38陽性(P=0.03)、VEGF陽性(P=0.001)與乳腺癌患者轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)密切相關(guān)，具體見表2，多因素分析提示：腫瘤分期(P=0.01)、P38陽性(P=0.001)、VEGF陽性(P=0.02)是乳腺癌患者轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)的獨立危險因素，具體見表3。

表2 影響乳腺癌患者轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)的單因素分析

表3 影響乳腺癌患者轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)的多因素分析

3 討論

乳腺癌是婦女常見惡性腫瘤之一，近年，乳腺癌發(fā)病率和死亡率逐年上升。腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移是腫瘤治療的最大障礙和直接導(dǎo)致患者死亡的主要原因。學(xué)者提出腫瘤需要突破血管再生調(diào)控抑制因子與刺激因子作用的平衡，進而達到從血管前期的靜止狀態(tài)發(fā)展到伴隨腫瘤血管新生的浸潤狀態(tài)[6]。

腫瘤新生血管為腫瘤細胞與個體的血管循環(huán)系統(tǒng)直接相通，是惡性腫瘤發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移播散的必要條件。血管新生與實體瘤的生長、浸潤、轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)，血管生成最重要的正性調(diào)控因子是血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)及堿性成纖維細胞生長因子[7]。新生的血管不僅提供腫瘤血供，而且增加腫瘤轉(zhuǎn)移率。VEGF作為血管生成的主要調(diào)控因子，特異性地作用與血管內(nèi)皮細胞，進而促進細胞有絲分裂，增加毛細血管通透性，最終促進腫瘤生長。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，VEGF與腫瘤分期、大小呈正相關(guān)[8]。

P38是由360個氨基酸構(gòu)成的分子量為38KDa的蛋白質(zhì)，是MAPK家族的重要成員。多種刺激因子使P38蘇氨酸和絡(luò)氨酸雙磷酸化，激活P38,使其進入細胞核，調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子的活性，影響細胞內(nèi)多種基因的轉(zhuǎn)錄、蛋白合成及細胞表面受體表達和細胞骨架結(jié)構(gòu)改變，在細胞遷移、腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移方面具有重要的調(diào)控功能[9]。臨床研究發(fā)現(xiàn)P38與乳腺癌臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，提示P38MAPK信號傳導(dǎo)途徑可能在乳腺癌的侵襲與轉(zhuǎn)移中起著重要作用[10-12]。

本研究結(jié)果顯示P38、VEGF在Ⅲ期乳腺癌組織中表達明顯高于Ⅰ、Ⅱ期，而與患者年齡、腫瘤大小無明顯相關(guān)性。復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移患者中P38、VEGF陽性率明顯高于無轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)者，差異顯著，具有統(tǒng)計學(xué)意義，P<0.05；多因素分析提示：腫瘤分期(P=0.01)、P38陽性(P=0.001)、VEGF陽性(P=0.02)是乳腺癌患者轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)的獨立危險因素。提示我們P38、VEGF陽性表達患者的轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)率高，P38、VEGF陽性是患者轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)的獨立風(fēng)險因素。其他類似研究結(jié)果顯示VEGF及P38MAPK表達與人類多種惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展及侵襲轉(zhuǎn)移之間具有相關(guān)性，并且發(fā)現(xiàn)VEGF在人類鱗狀細胞癌中的上調(diào)是通過P38MAPK介導(dǎo)的。乳腺癌患者各種生長因子等細胞外信號作用于腫瘤細胞膜上的受體，將信號轉(zhuǎn)導(dǎo)至細胞內(nèi)，使P38MAPK磷酸化，促進VEGF蛋白表達并向腫瘤細胞外分泌，促進淋巴管內(nèi)皮細胞增生，從而增加癌細胞進入淋巴管密度，促進淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移[13-15]。

[1] 唐 莉,葛夢圓,韋 達,等.Hsa-miR-145調(diào)控Rab GTP酶家族成員27A基因?qū)θ橄侔┘毎闙DA-MB-231遷移和侵襲的影響〔J〕.中華實驗外科雜志,2014,31(9):1929-1932.

[2] 韓艷春,劉魯英,張 騫,等.乳腺癌組織中VEGF-C和p38MAPK的表達及與伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系〔J〕.中國組織化學(xué)與細胞化學(xué)雜志,2013,22(1):20-24.

[3] 韓艷春,張 騫,董孟華,等.乳腺癌中磷酸化p38和MMP-7的表達〔J〕.臨床與實驗病理學(xué)雜志,2014,30(7):732-735.

[4] 安淑香,孫硼朋,龍振海,等.p-p38和SIAH2在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中表達的意義〔J〕.中國血液流變學(xué)雜志,2014,(1):149-152.

[5] 黃 芳.VEGF和CA153表達水平與乳腺癌疾病進展的關(guān)系〔J〕.國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2013,34(2):147-148.

[6] 張聚良,姚 青,陳江浩,等.CD147 siRNA對乳腺癌細胞HIF-1α、MMP-2與VEGF表達及細胞凋亡的影響〔J〕.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué),2013,21(2):247-249.

[7] 韓中保,戴小麗,韓扣蘭,等.NF-κB、 HER-2和VEGF-C在乳腺癌組織中的表達及相關(guān)性分析〔J〕.重慶醫(yī)學(xué),2013,42(18):2080-2082.

[8] 陳文有,周 松,劉 靜,等.乳腺癌VEGF-C的表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后的關(guān)系〔J〕.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué),2013,21(3):533-535.

[9] 楊德華,王明軍,于龍飛,等.p16/p38 MAPK/p53/Wip1通路在乳腺癌發(fā)生、發(fā)展中的作用及其臨床意義〔J〕.中華實驗外科雜志,2010,27(8):1086-1087.

[10] 王 睿,李照青,宋 敏,等.整合素β3,p38MAPK及MMP-2在乳腺癌中存在功能性的聯(lián)系〔J〕.解剖科學(xué)進展,2011,17(2):108-112.

[11] 韓艷春,曾憲旭,王 睿,等.p38MAPK信號通路與uPA在乳腺癌細胞及組織中表達的相關(guān)性〔J〕.癌癥,2007,26(1):48-53.

[12] 唐 勇,王 輝,陳偉娟,等.EMT經(jīng)p38-MAPK調(diào)節(jié)乳腺癌MCF-7細胞P-gp介導(dǎo)的多藥耐藥〔J〕.中國腫瘤生物治療雜志,2010,17(2):144-148.

[13] 李志剛,馬 輝,黃桂林,等.乳腺癌外周血中VEGF-C與癌組織中C-erbB-2蛋白的表達及臨床意義〔J〕.石河子大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版),2008,26(3):338-341.

[14] 許志杰,王誠銓,謝亞鋒,等.乳腺癌組織中COX-2、VEGF-C表達與淋巴轉(zhuǎn)移的相關(guān)性研究〔J〕.國際外科學(xué)雜志,2008,35(8):521-524.

[15] 李栢林,韓 碩,李 鳳,等.p38信號蛋白在乳腺癌組織中表達的研究〔J〕.中國老年學(xué)雜志,2006,26(3):346-349.

(編輯：吳小紅)

RelationshipbetweenExpressionofP38,VEGFinBreastCancerandLymphNodeMetastasisandPrognosis

LUQing,LIANGHongli,JIANGKe,etal.

YueyangHospitalofIntegratedTraditionalChineseandWesternMedicine,ShanghaiUniversityofTraditionalChineseMedicine,Shanghai,200437

ObjectiveTo investigate the relationship between expression of P38,VEGF in breast cancer and lymph node metastasis and prognosis.Methods88 cases of patients with breast cancer confirmed by pathology were selected as the research objects.SP method was used to detect p38,VEGF protein expression in breast carcinoma tissues and to investigate the protein expression levels and breast cancer metastasis and recurrence effect,Cox regression model was used to explore the relationship between p38,VEGF expression and breast cancer prognosis.ResultsAmong 88 cases,P38 positive expression in 67 cases,negative in 21 cases,VEGF positive expression in 56 cases and negative in 32 cases.All patients were followed up to January 31,2016,to death or tumor metastasis and recurrence as the endpoint,17 patients had endpoint events;p38 and VEGF expression in stage Ⅲ breast cancer tissues was significantly higher than that in stage Ⅰ and Ⅱ,and had no significant correlation with age and tumor size.P38 and VEGF positive rates in patients with recurrence and metastasis were significantly higher than patients without metastasis and recurrence,there had statistical difference (P<0.05).Multivariate analysis showed that tumor staging (P=0.01),p38 positive (P=0.001),VEGF positive (P=0.02) were independent risk factors for metastasis and recurrence of breast cancer.ConclusionMetastasis and recurrence rates of patients with P38,VEGF positive expression are high,P38 and VEGF positive expression are independent risk factors for metastasis and recurrence.

Breast cancer;Recurrence;Metastasis

上海市教育委員會(編號：2015YSN44)；上海市科學(xué)技術(shù)委員會(編號：14401933200)

200437 上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬岳陽中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院

薛曉紅

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.09.002

R737.9

A

1001-5930(2017)09-1398-03

2016-06-07

2017-01-12)