HER2在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系

李麗坤 邸雅南 彭德銀 趙煜弘

北京航天總醫(yī)院消化內(nèi)科1(100076) 北京空軍指揮學(xué)院門診部2

·短篇論著·

HER2在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系

李麗坤1*邸雅南1彭德銀1趙煜弘2

北京航天總醫(yī)院消化內(nèi)科1(100076)北京空軍指揮學(xué)院門診部2

HER2； 基因表達(dá)； 結(jié)直腸腫瘤； 預(yù)后

結(jié)直腸癌(colorectal cancer,CRC)是常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，目前其發(fā)病率和病死率在世界范圍內(nèi)均居惡性腫瘤前列[1]。近年來，隨著國人飲食結(jié)構(gòu)和生活方式的改變，我國CRC發(fā)病率呈逐年上升趨勢，5年生存率極低，對患者生活質(zhì)量和生命健康構(gòu)成極大威脅。研究證實(shí)，CRC的高度侵襲性和轉(zhuǎn)移性是其高病死率的主要原因[2]。人表皮生長因子受體2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)屬于表皮生長因子受體家族，其編碼基因是一種重要的原癌基因。研究顯示，HER2在多種惡性腫瘤中高表達(dá)，可抑制腫瘤細(xì)胞凋亡，促進(jìn)腫瘤新生血管形成，進(jìn)而增強(qiáng)腫瘤的侵襲性和轉(zhuǎn)移性[3]，已被證實(shí)為胃癌、前列腺癌、乳腺癌、膽囊腺癌等惡性腫瘤的預(yù)后不良指標(biāo)之一[4-6]。目前關(guān)于HER2在CRC中表達(dá)的研究較多，普遍認(rèn)為其在CRC中呈高表達(dá)，與腫瘤生物學(xué)行為和預(yù)后有一定相關(guān)性[3-4,7]，但亦有研究認(rèn)為HER2表達(dá)與CRC臨床病理特征和(或)患者預(yù)后無關(guān)[2,8-10]。本研究通過檢測HER2在CRC中的表達(dá)，分析其與CRC臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系，旨在為CRC的診斷、治療和預(yù)后評估提供依據(jù)。

對象與方法

一、研究對象

連續(xù)收集2010年2月—2011年2月北京航天總醫(yī)院收治的CRC患者118例，其中男性67例，女性51例，年齡 26～81歲，平均(56.3±17.2)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①接受CRC根治性手術(shù)治療；②術(shù)后病理證實(shí)為原發(fā)性CRC；③術(shù)后接受放、化療；④臨床病理資料完整；⑤患者簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①復(fù)發(fā)性CRC；②合并其他類型原發(fā)性惡性腫瘤；③合并嚴(yán)重血液、免疫、內(nèi)分泌系統(tǒng)以及心腦血管、肝、腎、肺等器官組織疾??；④術(shù)后30 d內(nèi)發(fā)生嚴(yán)重并發(fā)癥或死亡。研究方案經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審核批準(zhǔn)。

二、方法

1.HER2免疫組化染色：CRC手術(shù)標(biāo)本4%中性甲醛溶液固定，梯度乙醇脫水，石蠟包埋，4 μm厚度連續(xù)切片。石蠟切片脫蠟至水，3% H2O2封閉內(nèi)源性過氧化物酶，微波高溫抗原修復(fù)，正常山羊血清封閉。滴加HER2一抗(Bio-Rad公司，工作濃度1∶500)，4 ℃孵育過夜，滴加生物素化二抗(Bio-Rad公司，工作濃度1∶5 000)，室溫孵育10 min，滴加HRP標(biāo)記的鏈霉親和素，DAB顯色，蘇木精復(fù)染，脫水，透明，封片，光學(xué)顯微鏡下觀察。

結(jié)果判定：每張切片隨機(jī)選取5個(gè)200倍視野，觀察陽性細(xì)胞及其染色強(qiáng)度。根據(jù)美國臨床腫瘤學(xué)會相關(guān)指南將HER2表達(dá)強(qiáng)度分為4個(gè)等級：<10%的細(xì)胞膜有著色或輕微染色，(-)；10%～19%的細(xì)胞出現(xiàn)不連續(xù)的細(xì)胞膜染色，(+)；20%～30%的細(xì)胞膜出現(xiàn)完整染色但著色較弱，(++)；>30%的細(xì)胞膜出現(xiàn)完整染色且著色較強(qiáng)，(+++)。表達(dá)強(qiáng)度(-)判定為表達(dá)陰性，(+)判定為低表達(dá)，(++)和(+++)判定為高表達(dá)。所有標(biāo)本均由2名資深病理科醫(yī)師共同診斷。

2.術(shù)后隨訪：所有患者術(shù)后均以電話或門診復(fù)查形式進(jìn)行隨訪，以確診當(dāng)日作為隨訪起點(diǎn)，隨訪截止日期為2016年2月28日。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，計(jì)數(shù)資料以百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，預(yù)后影響因素的分析采用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

一、HER2表達(dá)及其與CRC臨床病理特征的關(guān)系

免疫組化染色顯示，118例CRC患者中41例(34.7%)癌組織HER2表達(dá)陽性，其中高表達(dá)18例(15.3%)，低表達(dá)23例(19.5%)，77例(65.3%)HER2表達(dá)陰性。分析發(fā)現(xiàn)HER2表達(dá)與腫瘤浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期呈顯著正相關(guān)(P<0.05)，與性別、發(fā)病年齡、腫瘤直徑、腫瘤部位、分化程度無明顯相關(guān)性(P>0.05)(表1)。

二、HER2表達(dá)與CRC預(yù)后的關(guān)系

至隨訪截止日，共38例患者死亡，12例患者失訪，隨訪率為89.8%(106/118)。106例納入分析的患者中11例HER2高表達(dá)，23例低表達(dá)，72例表達(dá)陰性，隨訪期內(nèi)3組死亡率分別為63.6%(7/11)、43.5(10/23)和29.2%(21/72)，HER2高表達(dá)者高于低表達(dá)和表達(dá)陰性者，低表達(dá)者高于表達(dá)陰性者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。Cox多因素分析顯示，腫瘤浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期和HER2是患者預(yù)后的獨(dú)立影響因素(P<0.05)(表2)。

表1 HER2表達(dá)與CRC臨床病理特征的關(guān)系n(%)

表2 CRC患者預(yù)后影響因素的多因素分析(Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型)

變量BSEP值RR95%CI浸潤深度0．8720．1250．0431．2311．201～1．743淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移1．8420．1130．0271．5271．033～1．905TNM分期0．5760．1090．0311．4901．071～2．139HER20．4240．2160．0062．1341．172～2．415

討 論

HER2基因定位于17號染色體，主要編碼HER2蛋白。HER2蛋白是一種具有酪氨酸激酶活性的跨膜糖蛋白，在細(xì)胞增殖、分化、血管生成等過程中發(fā)揮重要作用，其過表達(dá)可加速細(xì)胞分裂，使其增殖、分化過程失衡，最終轉(zhuǎn)變?yōu)榘┘?xì)胞[11]。HER2高表達(dá)通常只出現(xiàn)于胎兒期，正常人體組織中其表達(dá)量極低，但可在某些體內(nèi)、外因素的作用下被激活，出現(xiàn)表達(dá)上調(diào)。近年研究發(fā)現(xiàn)多種腺癌(包括乳腺癌、胃癌、非小細(xì)胞肺癌、卵巢癌)中存在HER2基因擴(kuò)增及其蛋白表達(dá)增加，可作為腫瘤預(yù)后評估指標(biāo)[4-6]。HER2在乳腺癌和胃癌中的研究最為成熟，研究表明乳腺癌發(fā)病與HER2過表達(dá)有關(guān)，HER2表達(dá)水平與患者預(yù)后顯著相關(guān)[12]。

目前關(guān)于HER2表達(dá)與CRC臨床病理特征和預(yù)后關(guān)系的研究報(bào)道眾多，但結(jié)果存在分歧。多數(shù)研究[3,7]顯示CRC組織中的HER2表達(dá)水平顯著高于正常結(jié)直腸組織，且與術(shù)后生存率呈負(fù)相關(guān)。HER2過表達(dá)導(dǎo)致酪氨酸激酶活性增強(qiáng)，而酪氨酸磷酸化可激活多種細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，如PI3K/Akt、Ras/MAPK等，從而促進(jìn)細(xì)胞增殖，抑制細(xì)胞凋亡[13-14]。此外，有研究發(fā)現(xiàn)HER2高表達(dá)可增加腫瘤細(xì)胞的遷移率、體外侵襲率和Ⅳ型膠原酶活性，且可干擾黏附分子合成，從而促進(jìn)腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)[15]。體外研究顯示，以RNA干擾技術(shù)下調(diào)結(jié)腸癌細(xì)胞中的HER2表達(dá)，可明顯抑制細(xì)胞增殖[16]。然而亦有研究發(fā)現(xiàn)CRC中的HER2表達(dá)未見明顯增加，且其表達(dá)與腫瘤臨床病理特征和(或)患者預(yù)后無明顯相關(guān)性[2,8-10]，推測可能與患者曾接受放、化療以及檢測方法、結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)不同等因素有關(guān)。本研究中CRC患者癌組織HER2表達(dá)陽性率為34.7%，且其表達(dá)與腫瘤浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期呈顯著正相關(guān)；在術(shù)后隨訪期內(nèi)，HER2表達(dá)陰性、低表達(dá)和高表達(dá)患者的死亡率依次增高；HER2表達(dá)是影響患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。

綜上所述，CRC中的HER2表達(dá)與腫瘤臨床分期和患者預(yù)后有關(guān)，因此其檢測具有重要臨床意義，有望成為CRC預(yù)后評估的生物學(xué)標(biāo)記物。HER2在CRC中的具體調(diào)控機(jī)制有待后續(xù)進(jìn)一步研究探討。

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(2017-03-09收稿；2017-04-14修回)

ExpressionofHER2inColorectalCanceranditsCorrelationWithPrognosis

LILikun1,DIYanan1,PENGDeyin1,ZHAOYuhong2.

1DepartmentofGastroenterology,BeijingAerospaceGeneralHospital,Beijing(100076);2AirForceCommandCollegeClinics,Beijing

HER2; Gene Expression; Colorectal Neoplasms; Prognosis

10.3969/j.issn.1008-7125.2017.10.008

*Email:lilikun63@163.com

背景：結(jié)直腸癌(CRC)是常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，具有高度侵襲性和轉(zhuǎn)移性，病死率高。人表皮生長因子受體2(HER2)在多種腫瘤中存在高表達(dá)，可抑制腫瘤細(xì)胞凋亡，是腫瘤預(yù)后不良的指標(biāo)之一。目的研究CRC組織中的HER2表達(dá)及其與腫瘤臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系。方法連續(xù)收集2010年2月─2011年2月北京航天總醫(yī)院118例CRC患者，采用免疫組化染色檢測癌組織HER2表達(dá)水平，分析其表達(dá)與腫瘤臨床病理參數(shù)和患者預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果CRC組織中HER2表達(dá)陽性率為34.7%(41/118)，其中高表達(dá)18例(15.3%)，低表達(dá)23例(19.5%)。HER2表達(dá)與腫瘤浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期顯著相關(guān)(P<0.05)。HER2表達(dá)陰性、低表達(dá)、高表達(dá)患者隨訪期內(nèi)死亡率依次增高，組間兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析顯示HER2是CRC患者預(yù)后的獨(dú)立影響因素(RR=2.134,95% CI:1.172～2.415,P=0.006)。結(jié)論HER2高表達(dá)與CRC臨床分期和患者預(yù)后有關(guān)，有望成為CRC預(yù)后評估的生物學(xué)標(biāo)記物。

Background:Colorectal cancer (CRC) is a common malignant tumor in digestive system with high invasive and metastatic properties and has a high mortality rate.Human epidermal growth factor receptor 2 (HER2) is highly expressed in a variety of tumors and can inhibit tumor cell apoptosis.It is an indicator of poor prognosis in some malignancies.AimsTo study the expression of HER2 and its correlation with clinicopathological characteristics and prognosis of CRC.MethodsA total of 118 patients with CRC admitted from Feb.2010 to Feb.2011 consecutively at the Beijing Aerospace General Hospital were recruited.Expression level of HER2 protein in CRC tissue was determined immunohistochemically and its correlations with clinicopathological parameters and prognosis of CRC were analyzed.ResultsImmunohisto-chemically,positive staining for HER2 was found in 41 cases of the CRC tissues (34.7%),of which 18 (15.3%) were strongly positive and 23 (19.5%) were weakly positive.There were significant correlations between HER2 expression and depth of invasion,lymph node metastasis and TNM staging of CRC (P<0.05).Follow-up study revealed that the mortality rate increased with the increase of intensity of HER2 staining (P<0.05).Cox proportional hazard model confirmed that HER2 was an independent prognostic factor in CRC patients (RR=2.134,95% CI:1.172-2.415,P=0.006).ConclusionsHigh expression of HER2 is correlated with clinical staging and prognosis of CRC,and might be used as a biomarker for prediction of prognosis in CRC patients.