王素琴，沈瑩華，于福利

（陜西省農(nóng)藥管理檢定所，西安 710003）

◆環(huán)境與殘留◆

苯醚甲環(huán)唑和嘧菌酯在石榴中的殘留行為與合理使用評價

王素琴，沈瑩華，于福利

（陜西省農(nóng)藥管理檢定所，西安 710003）

采用田間小區(qū)方法進行苯醚甲環(huán)唑和嘧菌酯在石榴中的最終殘留和消解動態(tài)試驗，為兩者的合理使用及其安全性評價提供科學依據(jù)。樣品經(jīng)乙腈提取，固相萃取法凈化，GC-ECD進行測定。苯醚甲環(huán)唑和嘧菌酯在石榴中的降解規(guī)律符合一級動力學指數(shù)模型，消解半衰期分別為2.7～7.7 d和2.3～5.9 d。325 g/L苯甲·嘧菌酯懸浮劑在有效成分用量216.7～325.1 mg/kg，施藥3～4次，施藥間隔7～10 d，采收間隔21 d時，苯醚甲環(huán)唑在石榴籽中的殘留量＜0.02 mg/kg，嘧菌酯在石榴籽中的殘留量≤0.050 mg/kg。膳食風險評估結果表明：兩者對8類人群的膳食攝入風險均低。采用325g/L苯甲·嘧菌酯懸浮劑防治石榴葉斑病，建議有效成分最高用藥量為216.7 mg/kg，每季宜施藥2～3次，安全間隔期21 d。

苯醚甲環(huán)唑；嘧菌酯；石榴；消解動態(tài)；殘留；膳食暴露；風險評估

石榴為石榴科植物，漢朝年間由西域引進，現(xiàn)中國南北地區(qū)均有栽培[1]。石榴葉斑病是石榴的一種常見病害，石榴栽培區(qū)發(fā)生較普遍。該病主要危害石榴葉片，也可危害果實。植株受害嚴重時，葉片提早落光，嚴重影響植株生長發(fā)育。嘧菌酯是新型甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑，對幾乎所有真菌病害有效。苯醚甲環(huán)唑是三唑類殺菌劑，具有保護和治療作用。將兩者復配能有效防治石榴葉斑病[2-3]。

本文采用GC-ECD測定石榴中苯醚甲環(huán)唑和嘧菌酯的殘留量，對苯醚甲環(huán)唑和嘧菌酯在石榴中的消解規(guī)律進行了系統(tǒng)研究，并運用風險商對其結果進行了評估，旨在為苯醚甲環(huán)唑和嘧菌酯在防治石榴葉斑病過程中的合理使用及其安全性評價提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

供試農(nóng)藥：325 g/L苯甲·嘧菌酯懸浮劑（125 g/L苯醚甲環(huán)唑＋200 g/L嘧菌酯），江陰蘇利化學股份有限公司提供。供試石榴品種：陜西為凈皮甜；安徽為紅白皮。

1.2 田間試驗設計

試驗地點：陜西西安、安徽蕭縣；試驗時間：2013—2014年。

1.2.1 消解動態(tài)試驗

果實長至一半大時用藥，采用手動噴霧器均勻噴霧石榴樹全株，至藥液開始從葉片滴下為止。有效成分用藥量為325.1 mg/kg（1 000倍稀釋液），施藥后2 h、1,3,5,7,14,21,30,45 d采樣，重復3次，處理間設保護隔離區(qū)，另設清水空白對照。

1.2.2 最終殘留試驗

試驗設2個施藥量：低有效成分用藥量216.7mg/kg（1 500倍稀釋液）、高有效成分用藥量325.1 mg/kg（1 000倍稀釋液）。試驗設3次和4次施藥處理，每個處理3次重復，每個小區(qū)3株果樹，施藥間隔期7～10 d。最后1次施藥后7,14,21 d采樣。另設清水空白對照，處理間設保護帶。

1.2.3 樣品采集

采集石榴樹上、中、下、內、外、陰、陽部位生長正常、無病害的果實，每小區(qū)采集石榴果實不少于12個，用不銹鋼刀縱向切成均勻的4瓣，取對角的2瓣收集300 g石榴籽樣品2份，分別裝入封口樣品容器中，貼好標簽，放置-20℃冰箱中貯存?zhèn)錅y。

1.3 分析方法

1.3.1 儀器和試劑

GC-2010 Plus氣相色譜儀（帶ECD檢測器）、電子天平、勻漿機、離心機、氮吹儀、Rtx-1毛細色譜柱、弗羅里硅土柱及各種玻璃器皿。丙酮、乙腈、正己烷均為色譜純試劑；氯化鈉、碳酸鈉為分析純；淋洗液：丙酮＋正己烷（體積比2∶8）；苯醚甲環(huán)唑標準品（99.1%）、嘧菌酯標準品（99.0%），國家農(nóng)藥質量監(jiān)督檢驗中心（北京）。

1.3.2 樣品的制備

冷凍的石榴籽樣品用組織搗碎機粉碎。稱取石榴籽樣品12.5 g于100 mL離心管中，加入25.0 mL乙腈，高速勻漿1 min，再加入4.0 g無水氯化鈉渦旋混合1 min，2 500 r/min離心5 min，靜置1 h。取上清液5.0 mL置于20 mL刻度試管中，于70℃下通氮氣蒸發(fā)近干，加入2.5 mL淋洗液后蓋上塞子，待凈化。

將弗羅里硅土柱依次用5.0 mL淋洗液、5.0 mL正己烷預淋洗，當溶劑液面到達柱吸附層表面時，立即倒入上述待凈化溶液，用20 mL刻度試管接收洗脫液。用5.0 mL淋洗液淋洗刻度試管，并重復1次。將盛有淋洗液的刻度試管置于氮吹儀上，在水浴溫度50℃下通氮氣蒸發(fā)近干，用淋洗液定容至2.5 mL，在混合器上混勻，移入樣品瓶中，待測。

1.3.3 實驗條件

色譜柱：Rtx-1柱（30 m×0.53 mm，1.0 μm）；進樣口溫度：280℃，不分流模式；載氣流速（N2）：67.0mL/min；升溫程序：起始溫度200℃，保持3 min，以15℃/min升到250℃，保持11 min，再以15℃/min升到280℃，保持4 min；檢測器溫度：290℃；進樣體積：0.2 μL。

1.4 膳食暴露風險評估

1.4.1 風險評估數(shù)據(jù)來源

石榴籽中苯醚甲環(huán)唑和嘧菌酯殘留量（mg/kg）采用試驗測定數(shù)據(jù)；目標人群平均體重（kg）采用文獻[1]中發(fā)布的不同年齡及性別人群的體重；消費數(shù)據(jù)由文獻[4]計算而來。1.4.2 膳食暴露量評估

膳食暴露量主要用來評估可能接觸的暴露途徑及劑量水平，明確實際與預期暴露的劑量水平及可能受危害的敏感人群。通過食用被污染的食物是人群暴露的主要途徑，本研究僅以石榴為單一的農(nóng)藥殘留暴露途徑，以風險商（RQ，risk quotient）和風險概率（RP，risk probability）分別進行慢性風險和急性風險評估，根據(jù)公式（1）～公式（3）計算。

式（1）中：EED為估計膳食暴露量，mg/(kg bw·d)；RL為試驗中獲得的石榴中農(nóng)藥殘留量（本文采用試驗測得的最大殘留量），mg/kg；FI為日均食物攝入量，kg/d；bw為體重（不同人群體重見表1），kg。

表1 不同人群的體重和石榴攝入量

式（2）中：RQ為風險商；ADI為每日允許攝入量，mg/(kg bw·d)。

RQ≥1，風險不可接受；RQ＜1，風險可接受。

式（3）中：RP為風險概率，%；ARfD為急性參考劑量，mg/(kg bw·d)。

RP≥100%，風險不可接受；RP＜100%，風險可接受。

2 結果與討論

2.1 添加回收率

在空白石榴籽樣品中，添加質量分數(shù)分別為0.02,0.1,0.5 mg/kg的混合標樣溶液，放置2 h后，提取、檢測。嘧菌酯的添加回收率在90.7%～116.3%之間，相對標準偏差在2.3%～5.9%之間；苯醚甲環(huán)唑的添加回收率在85.1%～110.2%之間，相對標準偏差在4.8%～6.0%之間（見表2）。

表2 石榴籽中嘧菌酯和苯醚甲環(huán)唑的添加回收率

方法符合農(nóng)藥殘留分析要求。

2.2 苯醚甲環(huán)唑和嘧菌酯在石榴中的殘留消解動態(tài)

2013—2014年，陜西、安徽石榴中的消解動態(tài)試驗結果表明：苯醚甲環(huán)唑在石榴中的原始沉積量在0.29～0.53 mg/kg之間，半衰期在2.7～7.7 d之間；嘧菌酯在石榴中的原始沉積量為0.21～0.87 mg/kg，半衰期在2.3～5.9 d之間。2種農(nóng)藥均屬于易降解農(nóng)藥（T1/2＜30 d），兩者消解動態(tài)符合一級動力學方程，消解行為差異不明顯（見表3）。

表3 嘧菌酯和苯醚甲環(huán)唑在石榴中的消解動態(tài)方程、相關系數(shù)及半衰期

2.3 最終殘留量

2013—2014年，325 g/L苯甲·嘧菌酯懸浮劑以有效成分用量為216.7～325.1 mg/kg，在果實長至一半大小時施藥3～4次（間隔7～10 d）。陜西、安徽最終殘留試驗結果顯示：采收間隔7 d時，石榴籽中苯醚甲環(huán)唑的殘留量在＜0.02～0.078 mg/kg之間；石榴籽中嘧菌酯的殘留量在＜0.02～0.16 mg/kg之間。采收間隔14 d時，苯醚甲環(huán)唑在石榴籽中的殘留量均＜0.02 mg/kg；嘧菌酯在石榴籽中的殘留量為＜0.02～0.081 mg/kg。采收間隔期為21 d時，苯醚甲環(huán)唑在石榴籽中的殘留量均＜0.02 mg/kg；嘧菌酯在石榴籽中的殘留量為＜0.02～0.050 mg/kg。具體結果見表4。

2.4 膳食攝入風險

苯醚甲環(huán)唑和嘧菌酯的ADI值分別為0.01和0.2 mg/(kg bw·d)[5]。根據(jù)JMPR評估報告，嘧菌酯屬于不需要制定ARfD的農(nóng)藥，苯醚甲環(huán)唑的ARfD值為0.3 mg/(kg bw·d)[6-7]。風險評估結果表明（表5和表6）：距最后1次施藥間隔7,14,21 d時，石榴籽中苯醚甲環(huán)唑和嘧菌酯對8類人群的風險商（RQ）均遠小于1，慢性風險可接受；苯醚甲環(huán)唑對8類人群的RP亦遠小于100%，急性風險可接受。

表4 苯醚甲環(huán)唑和嘧菌酯在石榴籽中的最終殘留量

表5 不同采收間隔期嘧菌酯的膳食暴露量和風險商

表6 不同采收間隔期苯醚甲環(huán)唑的膳食暴露量、風險商和風險概率

3 結論

通過田間試驗，采用GC-ECD方法，研究了苯醚甲環(huán)唑和嘧菌酯在石榴中的消解規(guī)律、最終殘留水平以及膳食攝入風險。結果表明：苯醚甲環(huán)唑和嘧菌酯在石榴中降解規(guī)律符合一級動力學指數(shù)模型，其消解半衰期分別為2.7～7.7 d和2.3～5.9 d。325 g/L苯甲·嘧菌酯懸浮劑用藥量為216.7～325.1 mg/kg，施藥3～4次，施藥間隔7～10 d，采收間隔21 d時，苯醚甲環(huán)唑在石榴籽中的殘留量均＜0.02 mg/kg；嘧菌酯在石榴籽中的殘留量為＜0.02～0.050 mg/kg。急（慢）性膳食風險評估結果表明：兩者對8類人群的急（慢）性膳食攝入風險均較低。因此，建議采用325g/L苯甲·嘧菌酯懸浮劑防治石榴葉斑病，有效成分用藥量為216.7 mg/kg，施藥2～3次，安全間隔期21 d。

[1]王隴德.中國居民營養(yǎng)與健康狀況調查報告之一:2002綜合報告[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2007.

[2]候生英,王愛玲.張貴,等.3%苯醚甲環(huán)唑懸浮種衣劑防治小麥全蝕病試驗[J].植物保護,2005,31(5):88-90.

[3]薄海波,畢陽,陳立仁.氣相色譜法測定甜瓜和蘋果中嘧菌酯殘留[J].分析化學,2005,33(5):695-698.

[4]金水高.中國居民營養(yǎng)與健康狀況調查報告之十:2002營養(yǎng)與健康狀況數(shù)據(jù)集[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2008.

[5]張麗英,陶傳江.農(nóng)藥每日允許攝入量手冊 [M].北京:化學工業(yè)出版社,2015.

[6]Food and Agriculture Organization of the United Nations.Azoxystro-bin[EB/OL].[2017-06-05].http://www.fao.org/fileadmin/templates/agphome/documents/Pests_Pesticides/JMPR/Evaluation13/Azoxystrobin.pdf.

[7]Food and Agriculture Organization of the United Nations.Difenoconazole[EB/OL].[2017-06-05].http://www.fao.org/fileadmin/tem plates/agphome/documents/Pests_Pesticides/JMPR/Evaluation2015/DIFENOCONAZOLE__224_.pdf.

Residue Dynamics and Reasonable Use of Difenoconazole and Azoxystrobin in Pomegranate

WANG Su-qin,SHEN Ying-hua,YU Fu-li
(Institute for the Control of Agrochemicals of Shaanxi Province,Xi'an 710003,China)

To evaluate the residue dynamics of difenoconazole and azoxystrobin in pomegranate,and provide the scientific basis for rational use and safety assessment,the field experiments were carried out in 2013-2014.The samples were extracted with acetonitrile,cleaned up by Florisil extract column and detected by GC-ECD.The half-lives of difenoconazole and azoxystrobin in pomegranate were 2.7-7.7 d and 2.3-5.9 d,respectively.The residues of difenoconazole in pomegranate were less than 0.02 mg/kg,the residues of azoxystrobin were less than or equal to 0.050 mg/kg.The results indicated that the RQ and RP were under 1 and 100%,respectively.The preharvest interval of difenoconazole+azoxystrobin 325 g/L SC was 21 d,it could be sprayed 2-3 times,and the highest dose was 216.7 mg/kg.

difenoconazole;azoxystrobin;pomegranate;degradation dynamics;residue;dietary exposure;risk assessment

TQ 450.2＋63

A

10.3969/j.issn.1671-5284.2017.06.013

2017-06-05

王素琴（1982—），女，湖南省攸縣人，主要從事農(nóng)藥質量與殘留檢測工作。E-mail：wangsuqin1982@163.com

（責任編輯：柏亞羅）