錢婉霞

摘 要：本文采用高校液相測(cè)定了黃連上清膠囊中大黃酚和大黃素的含量，固定相為：安捷倫Cl8（4.6mm×250mm，5um），以甲醇-乙腈-0.1%磷酸（75∶5∶20）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm；大黃素在20～160μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系；大黃酚在50～350μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。大黃素和大黃酚的平均回收率分別為99.6%、99.7%，RSD為0.73%（n=6）、0.66%（n=6）；此方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于黃連上清膠囊中大黃素和大黃酚的含量測(cè)定。

關(guān)鍵詞：黃連上清膠囊；大黃素；大黃酚

黃連上清膠囊具有清熱通便，散風(fēng)止痛等功效。黃連上清膠囊用于上焦風(fēng)熱所致的頭暈?zāi)X脹、牙齦腫痛、暴發(fā)火眼、口舌生瘡、咽喉紅腫、大便干燥等。黃連上清膠囊由黃連、大黃、連翹、薄荷、旋覆花、黃芩、荊芥、梔子、防風(fēng)、石膏、桔梗、黃柏、蔓荊子（炒）、白芷、甘草、川芎、菊花組成。本文采用高校液相測(cè)定了黃連上清膠囊中大黃酚和大黃素的含量。

1 儀器與試藥

STI-501Plus梯度高效液相色譜儀（賽智科技（杭州）有限公司）；UV-6雙光束掃描型紫外可見分光光度計(jì)（上海美譜達(dá)儀器有限公司）；PH-660高精度實(shí)驗(yàn)室酸度計(jì)（上海禾工科學(xué)儀器有限公司）；HN-6AL功率可調(diào)超聲波清洗（上海汗諾儀器有限公司）；XSYF-D實(shí)驗(yàn)室廢水處理設(shè)備（北京湘順源科技有限公司）；PH-660高精度實(shí)驗(yàn)室酸度計(jì)（上海禾工科學(xué)儀器有限公司）；BT賽多利斯電子天平（北京五洲東方科技發(fā)展有限公司）。大黃素和大黃酚對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。磷酸二氫銨（杭州匯普化工儀器有限公司）、乙腈（杭州匯普化工儀器有限公司）、三乙胺（天津市順隆達(dá)科技有限公司）、磷酸二氫鈉（天津市順隆達(dá)科技有限公司）、磷酸（天津市順隆達(dá)科技有限公司）、甲醇（杭州匯普化工儀器有限公司）。

2 含量測(cè)定

2.1 色譜條件：依據(jù)查閱文獻(xiàn)及考查的結(jié)果，確定色譜條件如下[1-5]。色譜柱為安捷倫Cl8規(guī)格為（4.6mm×250mm，5μm）；以甲醇-乙腈-0.1%磷酸（75∶5∶20）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm；流速1.0mL·min-1；柱溫：30℃。理論板數(shù)按大黃酚峰計(jì)算應(yīng)不得低于2000。

2.2 供試品溶液的制備

取黃連上清膠囊內(nèi)容物，精密加甲醇25ml，稱定重量，加熱回流30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10ml，置50ml圓底燒瓶中，揮去甲醇，加2.5mol/L硫酸溶液10ml，超聲處理5分鐘，再加氯仿10ml，加熱回流1小時(shí)，冷卻，移置分液漏斗中，用少量氯仿洗滌容器，并入分液漏斗中，分取氯仿層，酸液用氯仿提取2次，每次10ml，合并氯仿液，氯仿液移至錐形瓶中，揮去氯仿，殘?jiān)芗蛹状?5ml，稱定重量，置水浴中微熱溶解殘?jiān)爬浜?，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，即得。

2.3 對(duì)照品溶液的制備

分別精密稱取大黃酚和大黃素對(duì)照品12mg、6mg，置100mL容量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

制備濃度為20μg·mL-1、40μg·mL-1、60μg·mL-1、80μg·mL-1、100μg·mL-1、120μg·mL-1、140μg·mL-1、160μg·mL-1的大黃素對(duì)照品溶液，制備濃度為50μg·mL-1、100μg·mL-1、150μg·mL-1、200μg·mL-1、250μg·mL-1、300μg·mL-1、350μg·mL-1的大黃酚對(duì)照品溶液。分別按大黃素、大黃酚的測(cè)定參數(shù)繼續(xù)測(cè)定。以吸光度為橫坐標(biāo)，濃度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。試驗(yàn)表明，大黃素在20～160μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系；大黃酚在50～350μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn)

依照2.3項(xiàng)下制備對(duì)照品溶液，分別精密吸取大黃素和大黃酚對(duì)照品溶液重復(fù)測(cè)定6次，測(cè)定峰面積積分值，對(duì)照品峰面積積分值的RSD分別為0.63%和0.73%。結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)精密度良好。

2.6 重現(xiàn)性試驗(yàn)

分別稱取同批黃連上清膠囊樣品6份，分別依照2.3項(xiàng)下供試品制備方法制備供試品，按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)含量測(cè)定項(xiàng)下方法測(cè)定含量，并計(jì)算樣品的RSD值，RSD值為0.79%，0.81%，結(jié)果表明，此含量測(cè)定方法的重現(xiàn)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

依照2.3項(xiàng)下供試品制備方法制備供試品溶液，分別在0，2，4小時(shí)進(jìn)樣測(cè)定，供試品大黃素和大黃酚峰面積的RSD分別為0.81%和0.75%。結(jié)果表明大黃素和大黃酚至少在4小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 回收率試驗(yàn)

采用加樣回收試驗(yàn)，取已知含量的同一批供試品各6份，分精密添加一定量的大黃素和大黃酚對(duì)照品，按供試品制備所述方法制備供試品溶液，測(cè)定含量，計(jì)算回收率。6次測(cè)定的平均回收率分別為99.6%和99.7%，RSD分別為0.73%和0.66%。

2.9 樣品含量測(cè)定

依照上述含量測(cè)定方法，測(cè)定黃連上清膠囊中大黃素和大黃酚的含量，結(jié)果結(jié)果三批樣品的大黃素和大黃酚的總含量分別為1.52mg/粒、1.59mg/粒、1.56mg/粒。

3 討論

分別考察0.067moloL-1磷酸二氫銨溶液-乙腈-三乙胺（60∶40：0.02），乙腈-0.05%磷酸二氫鈉-三乙胺-磷酸（50：50：0.01：0.01），甲醇-乙腈-0.1%磷酸（75∶10∶15），甲醇-乙腈-0.1%磷酸（75∶5∶20），甲醇-乙腈-pH6.5磷酸鹽緩沖液（20∶20∶60），甲醇-0.08%磷酸溶液（25：75），0.2mol/L的乙酸-甲醇（80：20），甲醇-0.1%磷酸（70∶30），水-甲醇-磷酸（10：90：0.01）為流動(dòng)相，結(jié)果以甲醇-乙腈-0.1%磷酸（75∶5∶20）為流動(dòng)相，供試品各峰分離效果最好，故選用甲醇-乙腈-0.1%磷酸（75∶5∶20）為流動(dòng)相。

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