霍林林

摘 要：本文采用高效液相法對(duì)頭孢拉定原料中的2-萘酚的含量進(jìn)行測(cè)定并對(duì)2-萘酚的控制方法進(jìn)行研究。采用奧泰公司C18色譜柱（220mm×4.6mm，5μm），乙腈-甲醇-水（45：5：50）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為225nm，流速為1.0ml/min，柱溫為30℃。2-萘酚在0.005～1.28μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。2-萘酚平均回收率分別為99.5%。結(jié)論：本法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，可用于頭孢拉定原料中殘留2-萘酚的研究。

關(guān)鍵詞：頭孢拉定；2-萘酚；控制

頭孢拉定（Cephradine， Velosef）別名：先鋒霉素Ⅵ、頭孢菌素Ⅵ等，為第一代半合成頭孢菌素。頭孢拉定對(duì)耐藥性金葡菌及其它多種對(duì)廣譜抗生素耐藥的桿菌等有迅速而可靠的殺菌作用，主要用于呼吸道、泌尿道、皮膚和軟組織等的感染。部分生產(chǎn)企業(yè)用2-萘酚作為沉淀劑，將反應(yīng)體系中的頭孢拉定完全得到分離。2-萘酚中文別名2-羥基萘、乙萘酚、β-萘酚、beta-萘酚、β-羥基萘、B萘酚。2-萘酚不溶于冷水，易溶于熱水、乙醚、氯仿、乙醇、苯、甘油及堿液。2-萘酚毒理和苯酚相似而且是更強(qiáng)的腐蝕劑。2-萘酚對(duì)血液循環(huán)和腎臟有毒害作用[1]。本文采用高效液相法對(duì)頭孢拉定原料中的2-萘酚的含量進(jìn)行測(cè)定并對(duì)2-萘酚的控制方法進(jìn)行研究。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：ZXTA-20雙極反滲透實(shí)驗(yàn)室超純水機(jī)（北京卓信博澳儀器有限公司）；SCQ-K001空氣超聲波清洗器（上海聲彥超聲儀器有限公司）；UV765紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海分析儀器廠）；FA124電子分析天平（上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司）；L-3000四元低壓自動(dòng)進(jìn)樣高效液相色譜系統(tǒng)（上海添時(shí)科學(xué)儀器有限公司）；LC-5520高效液相色譜儀（北京東西分析儀器有限公司）；STI-501Plus等度高效液相色譜儀（賽智科技（杭州）有限公司）；SPCC-220E-國(guó)產(chǎn)全自動(dòng)實(shí)驗(yàn)室洗瓶機(jī)（東莞市譜標(biāo)實(shí)驗(yàn)器材科技有限公司）；PHS-3C型PH計(jì)（上海雷磁儀器廠）。

1.2 色譜柱：奧泰公司C18色譜柱（220mm×4.6mm，5μm）。

1.3 對(duì)照品：2-萘酚

1.4 試劑：甲醇（山東省禹城市中美色譜產(chǎn)品廠）、乙腈（山東省禹城市中美色譜產(chǎn)品廠）、三乙胺（南京科捷分析儀器有限公司）、磷酸（南京科捷分析儀器有限公司）、磷酸二氫鉀（北京京科瑞達(dá)科技公司）、冰醋酸（山東省禹城市中美色譜產(chǎn)品廠）。

1.5 試藥：頭孢拉定原料

2 測(cè)定方法確定

2.1 色譜條件

依據(jù)查閱文獻(xiàn)及考查的結(jié)果，確定色譜條件如下[2-3]。流動(dòng)相：乙腈-甲醇-水（45：5：50）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)：225nm，流速：1.0ml·min-1。柱溫：30℃。理論板數(shù)按2-萘酚峰計(jì)算應(yīng)不得低于2000。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取2-萘酚對(duì)照品適量，置容量瓶中，加流動(dòng)相制成每1mL含0.05μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取供試品，精密稱取，置容量中，精密加入流動(dòng)相10mL，充分振搖后離心取上清液，即得。

2.4 檢測(cè)限以及定量限

取2-萘酚對(duì)照品，用流動(dòng)相依次稀釋。以S/N=3計(jì)，檢測(cè)限為 0.0002%；以S/N=10計(jì)，定量限為0.0006%。

2.5 精密度試驗(yàn)

精密稱取2-萘酚對(duì)照品適量，加流動(dòng)相使溶解，制成濃度為0.05μg·mL-1的供試品溶液。照上述色譜條件，精密吸取10μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果，RSD=0.93%，表明本方法精密度良好。

2.6 對(duì)照品的線性考察

精密稱取適量2-萘酚對(duì)照品，加入流動(dòng)相溶液使溶解分別配制成每毫升含0.005、0.01、0.02、0.04、0.08、0.16、0.32、0.64、1.28微克的溶液。分別精密上述溶液吸取10μL，注人液相色譜儀，依照2.1項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，記錄色譜峰。以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，對(duì)照品進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。結(jié)果表明，2-萘酚在0.005～1.28μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn)

稱取同一批的頭孢拉定原料樣品6份，按測(cè)定方法項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，測(cè)定含量，并計(jì)算樣品的RSD值，結(jié)果RSD為0.96%，結(jié)果表明此方法的重現(xiàn)性良好。

2.8 準(zhǔn)確度試驗(yàn)

采用加樣回收法，將已知含量的頭孢氨芐供試品溶液，分別加入一定量的2-萘酚，按“含量測(cè)定”項(xiàng)下方法試驗(yàn)，計(jì)算回收率為99.5%，RSD為0.86%。

2.9 樣品穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一批頭孢拉定原料樣品，按2.3項(xiàng)下的供試品制備方法制備供試品，將供試品置室溫下放置，分別于第0、1、2、3、4小時(shí)，精密吸取供試品溶液10？滋l 注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。測(cè)定頭孢拉定原料中2-萘酚的RSD=0.89%。結(jié)果表明供試品4小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.10 耐用性

在不同天用L-3000四元低壓自動(dòng)進(jìn)樣高效液相色譜系統(tǒng)及LC-5520高效液相色譜儀，分別進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，2-萘酚和主成分頭孢氨芐峰分離良好，顯示方法具有比較充分的色譜耐用性。

2.11 樣品含量測(cè)定

依照上述含量測(cè)定方法，測(cè)定頭孢拉定原料10批樣品中2-萘酚的含量，結(jié)果10批樣品的含量分別0.00078%、0%、0%、0.00681%、0.00081%、0%、0%、0%、0.00731%、0%。

3 討論

分別考察甲醇-水-三乙胺（70∶30：0.2），乙腈-甲醇-0.05%磷酸（15：15：70），乙腈-甲醇-水（45：5：50），乙腈-甲醇-水（50：5：45），乙腈-甲醇-0.2mol.L-1磷酸二氫鉀-冰醋酸（20∶5：75：0.1），甲醇-0.025moLKH2PO4（15∶85）不同比例的流動(dòng)相，結(jié)果以乙腈-甲醇-水（45：5：50）為流動(dòng)相為流動(dòng)相，供試品各峰分離效果最好，故選用乙腈-甲醇-水（45：5：50）為流動(dòng)相為流動(dòng)相。2-萘酚有未檢出和檢出，檢出含量差異較大說(shuō)明孢拉定原料在生產(chǎn)過(guò)程中2-萘酚回收工藝穩(wěn)定性較差。有部分生產(chǎn)企業(yè)用2-萘酚作為沉淀劑，將反應(yīng)體系中的頭孢拉定完全得到分離，但2-萘酚回收工藝穩(wěn)定性較差。如不能很好的回收2-萘酚應(yīng)考慮其他分離方法。

參考文獻(xiàn)

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