李陳辰

【摘 要】目的：探索外周血細(xì)胞黏附分子CD11c、CD18的表達(dá)在急性缺血性腦卒中（AIS）中的變化及其相關(guān)性。方法：采用回顧性分析方法，收集2017年6月至2018年6月本中心收治的AIS患者120例（病例組），出院后隨訪90d，根據(jù)改良Rankin評(píng)分（mRS）分為預(yù)后良好組（mRS≤2分）和預(yù)后不良組（mRS≥3）。另選取同期招募的健康體檢者120例（健康對(duì)照組）。對(duì)不同分組受檢者的外周血中性粒細(xì)胞（PMN）和單核細(xì)胞（MNL）表面的CD11c、CD18進(jìn)行測(cè)定，隨后對(duì)比各組受檢者各項(xiàng)數(shù)值的差異和相關(guān)性。結(jié)果：病例組MNL和PMN表面CD11c、CD18的表達(dá)量顯著高于健康對(duì)照組（P<0.05）。病例組入院第1、3、7、14天各時(shí)間段PMN和MNL表面CD11c、CD18的表達(dá)量均顯著高于健康對(duì)照組（P<0.05）。病例組PMN表面CD11c、CD18的表達(dá)量第1～3天逐漸升高，第3天達(dá)到高峰，第7天逐漸下降，但第14天仍高于健康對(duì)照組（P<0.05）；MNL表面CD11c、CD18的表達(dá)量第1～7天逐漸升高，第7天達(dá)到高峰，第14天逐漸下降，但仍高于健康對(duì)照組（P<0.05）。預(yù)后不良組MNL和PMN表面CD11c、CD18的表達(dá)量高于預(yù)后良好組（P<0.05）。MRS評(píng)分與MNL和PMN表面CD18表達(dá)量呈正相關(guān)性（P<0.05）；且與MNL和PMN表面CD11c表達(dá)量也呈正相關(guān)性（P<0.05）。結(jié)論：MNL和PMN表面CD11c、CD18表達(dá)量與AIS預(yù)后密切相關(guān)，是AIS患者潛在的預(yù)后評(píng)估標(biāo)記物。

【關(guān)鍵詞】中性粒細(xì)胞；單核細(xì)胞；急性缺血性腦卒中；預(yù)后；相關(guān)性

【中圖分類(lèi)號(hào)】R565.9 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】1005-0019（2018）20--01

急性缺血性腦卒中（acute ischemic stroke，AIS）是一種常見(jiàn)的腦卒中類(lèi)型，具有患病率高、復(fù)發(fā)率高、致殘和致死率高等“四高”的特點(diǎn)，占所有類(lèi)型腦卒中的69.6%-70.8%，不僅嚴(yán)重?fù)p害了患者的生活質(zhì)量和生命健康，同時(shí)也給患者家庭、國(guó)家和社會(huì)帶來(lái)巨大經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。近年來(lái)，隨著研究的深入，可發(fā)現(xiàn)大部分AIS患者在病情發(fā)生、發(fā)展中，可出現(xiàn)炎癥反應(yīng)，且在受到外界刺激后，可釋放受損腦組織內(nèi)氧自由基、趨化因子、細(xì)胞因子，此項(xiàng)細(xì)胞激活，可誘導(dǎo)外周白細(xì)胞粘附分子表達(dá)和內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)，激活膠質(zhì)細(xì)胞，促進(jìn)外周白細(xì)胞對(duì)缺血腦組織的浸潤(rùn)，從而進(jìn)一步釋放氧自由基和細(xì)胞因子，導(dǎo)致腦組織凋亡、壞死，加重血腦屏障破壞，影響預(yù)后[1]。既往研究顯示，外周血中性粒細(xì)胞（polymorphonuclear，PMN）和單核細(xì)胞（mononuclear leukocyte，MNL）表面的CD11c、CD18在AIS的發(fā)生和發(fā)展中起到重要作用[2]。為了盡早發(fā)現(xiàn)患者病情變化，還需加強(qiáng)臨床外周血細(xì)胞炎癥標(biāo)記物的檢測(cè)，從而為治療方案擬定提供科學(xué)依據(jù)。因此，本研究采用回顧性分析方法，對(duì)120例AIS患者實(shí)施外周血PMN和MNL表面的CD11c、CD18進(jìn)行檢測(cè)，探討CD11c和CD18的表達(dá)量在AIS患者中的變化及其相關(guān)性。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象

本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，收集2017年6月至2018年6月本中心收治的AIS患者120例（病例組），其中，男71例，女49例；年齡42～76歲，平均（62.18±3.69）歲。入選標(biāo)準(zhǔn)：（1）年齡18-80周歲，性別不限；（2）均符合《中國(guó)急性缺血性腦卒中診治指南2018》的診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]，且經(jīng)顱腦MRI或CT確診。（3）臨床首次發(fā)病，且發(fā)病后72h內(nèi)入院；（4）均無(wú)嚴(yán)重抵觸情緒或精神家族史現(xiàn)象；（5）無(wú)溝通障礙或語(yǔ)言表達(dá)障礙；（6）無(wú)慢性感染病史；（7）患者或家屬簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）既往卒中或此次合并腦出血的患者；（2）妊娠期或哺乳期婦女；（3）有嚴(yán)重的心、肺、肝、腎及腫瘤性疾??；（4）存在自身免疫性疾??；（5）依從性差、不能按研究方案完成隨訪者；（6）正在參加其他臨床試驗(yàn)。另選取同期招募的健康體檢者120例（健康對(duì)照組），其中，男68例，女52例；年齡41～77歲，平均（62.56±3.28）歲。兩組受檢者在性別和年齡方面比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 檢測(cè)項(xiàng)目 藻紅蛋白（PE）標(biāo)記MNL表面CD18的平均熒光強(qiáng)度（MFI）；異硫氰酸熒光素（FITC）標(biāo)記MNL表面CD11c的MFI；PE標(biāo)記PMN表面CD11c的MFI；PE標(biāo)記PMN表面CD18的MFI。

1.2.2 檢測(cè)方法 健康對(duì)照組在體檢當(dāng)天，病例組在入院第1、3、7、14天，抽取受檢者空腹靜脈血5ml，首先將其置入抗凝劑的試管中混均，內(nèi)含有乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K2）抗凝劑，首先將其分別放入含有20ul FITC標(biāo)記的PE標(biāo)記、CD11c單抗標(biāo)記的FITC、PE標(biāo)記的陰性對(duì)照單抗試管以及全血100ul內(nèi)，混勻，隨后將其放置在常溫避光條件下待檢，孵育30分鐘后，加入2ml專(zhuān)用溶血素，且按照1：10的比例稀釋?zhuān)ゼt細(xì)胞，對(duì)其進(jìn)行血清分離處理，離心5分鐘，保持1000r速度，將上清液丟去，再加入1ml的PBS緩沖液，進(jìn)行離心處理五分鐘，維持1000r速度，連續(xù)進(jìn)行2次，將上清液丟去后，再加入PBS 0.5ml懸浮細(xì)胞，調(diào)整白細(xì)胞數(shù)為1×106個(gè)待檢。最后標(biāo)記好PE標(biāo)記的陰性對(duì)照單抗、FITC標(biāo)記、PR標(biāo)記的CD18單抗、PITC標(biāo)記的CD11c單抗，所有試劑均由美國(guó)Caltag公司提供。

1.3 預(yù)后評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)及隨訪

通過(guò)門(mén)診復(fù)診、信件以及電話方式進(jìn)行隨訪。隨訪時(shí)間截止至2018年9月。隨訪90天時(shí)采用改良Rankin量表（mRS）評(píng)估病例組預(yù)后情況[4]：mRS≤2分為預(yù)后良好組（100例）；mRS≥3為預(yù)后不良組（20例）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理與分析。MNL和PMN表面CD11c、CD18等計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ ）表示，采用t檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用Pearson直線相關(guān)分析法。以P≤0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2組MNL和PMN表面CD11c、CD18的表達(dá)量比較

病例組MNL和PMN表面CD11c、CD18的表達(dá)量顯著高于健康對(duì)照組（P<0.05）。見(jiàn)表1。

2.2 2組MNL和PMN表面CD11c、CD18的表達(dá)量比較

病例組入院第1、3、7、14天各時(shí)間段PMN和MNL表面CD11c、CD18的表達(dá)量均顯著高于健康對(duì)照組（P<0.05）。病例組PMN表面CD11c、CD18的表達(dá)量第1～3天逐漸升高，第3天達(dá)到高峰，第7天逐漸下降，但第14天仍高于健康對(duì)照組（P<0.05）；MNL表面CD11c、CD18的表達(dá)量第1～7天逐漸升高，第7天達(dá)到高峰，第14天逐漸下降，但仍高于健康對(duì)照組（P<0.05）。見(jiàn)表2。

2.3 不同預(yù)后程度AIS患者M(jìn)NL和PMN表面CD11c、CD18的表達(dá)量比較

預(yù)后不良組MNL和PMN表面CD11c、CD18的表達(dá)量高于預(yù)后良好組（P<0.05）。如表3所示：

2.4 相關(guān)性分析 相關(guān)性分析顯示：MNL和PMN表面CD11c表達(dá)量與MRS評(píng)分呈線性正相關(guān)（r=0.5369，P<0.05；r=0.1785，P<0.05）；而MNL和PMN表面CD18表達(dá)量與MRS評(píng)分亦呈線性正相關(guān)（r=0.1235，P<0.05；r=0.2365，P<0.05）。

3 討論

AIS早期的主要特征為腦組織血流突然性減少，若長(zhǎng)時(shí)間處于缺血狀態(tài)，可導(dǎo)致腦組織所需的氧供中斷和葡萄糖中斷，引起神經(jīng)功能缺損，一旦治療不及時(shí)，還可危及生命安全，具有較高的病死率和致殘率[5]。由于AIS患者在發(fā)病期間可激活膠質(zhì)細(xì)胞，引起外周血白細(xì)胞粘附分子表達(dá)，激活氧自由基，釋放細(xì)胞因子，炎癥指標(biāo)可出現(xiàn)明顯變化，對(duì)此還需加強(qiáng)外周血細(xì)胞炎癥標(biāo)記物的檢測(cè)，從而對(duì)疾病起到預(yù)防作用[6]。

CDllc、CDl8在AIS發(fā)生中參與了血管內(nèi)皮損傷、細(xì)胞黏附和炎癥反應(yīng)過(guò)程。當(dāng)腦組織缺血時(shí)，可出現(xiàn)穿越血管內(nèi)皮細(xì)胞浸潤(rùn)和白細(xì)胞粘附現(xiàn)象，進(jìn)而增加趨化因子mR-NA、細(xì)胞因子mRNA、粘附分子的分泌[7]。而細(xì)胞粘附分子根據(jù)功能和基因結(jié)構(gòu)的不同，可分為鈣黏蛋白家族、選擇素家族、免疫球蛋白超家族、整合素家族，以上共同點(diǎn)在于屬于整膜蛋白，是細(xì)胞膜分子。其中整合素的功能時(shí)細(xì)胞外基質(zhì)和細(xì)胞粘附分子的相結(jié)合，可增強(qiáng)細(xì)胞間粘附，而整合素家族又稱(chēng)之為膜受體糖蛋白家族，屬于一組糖蛋白反應(yīng)指標(biāo)[8]。而MNL和PMN與血管內(nèi)皮細(xì)胞黏附增強(qiáng)，可促使大量活化的PMN粘附于缺血區(qū)微血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)，對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞具有較強(qiáng)的粘附性，可促使微血管出現(xiàn)阻塞，在缺血組織灌注中起到“無(wú)復(fù)流”、“低灌注”等作用，可加重腦組織缺血缺氧狀態(tài)[9]。其中MNL可分化為小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，可穿過(guò)血管內(nèi)皮細(xì)胞，游離至缺血區(qū)域，進(jìn)而吞噬幸存神經(jīng)元。而PMN能夠釋放膠質(zhì)細(xì)胞，從而加重神經(jīng)組織損傷，釋放神經(jīng)毒性物質(zhì)（包括蛋白水解酶、一氧化氮、興奮性氨基酸、氧自由基、細(xì)胞因子）。

本研究結(jié)果顯示，病例組MNL和PMN表面CD11c、CD18的表達(dá)量顯著高于健康對(duì)照組（P<0.05）。病例組入院第1、3、7、14天各時(shí)間段PMN和MNL表面CD11c、CD18的表達(dá)量均顯著高于健康對(duì)照組（P<0.05）。病例組PMN表面CD11c、CD18的表達(dá)量第1～3天逐漸升高，第3天達(dá)到高峰，第7天逐漸下降，但第14天仍高于健康對(duì)照組（P<0.05）；MNL表面CD11c、CD18的表達(dá)量第1～7天逐漸升高，第7天達(dá)到高峰，第14天逐漸下降，但仍高于健康對(duì)照組（P<0.05）。此外，我們研究發(fā)現(xiàn)，預(yù)后不良組MNL和PMN表面CD11c、CD18的表達(dá)量高于預(yù)后良好組（P<0.05）。MRS評(píng)分與MNL和PMN表面CD18表達(dá)量呈正相關(guān)性（P<0.05）；且與MNL和PMN表面CD11c表達(dá)量也呈正相關(guān)性（P<0.05）。由此說(shuō)明，MNL和PMN在AIS中具有一定的數(shù)值改變，主要是因?yàn)镸NL和PMN可破壞血腦屏障，造成基底膜損傷和血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，加重腦缺血缺氧癥狀，促進(jìn)腦水腫形成，且加速細(xì)胞因子、細(xì)胞粘附分子、白細(xì)胞等炎癥介質(zhì)的釋放，進(jìn)而形成惡性循環(huán)[10]。因此在面對(duì)AIS患者，還需加強(qiáng)外周血細(xì)胞炎癥標(biāo)記物的檢測(cè)，從而為治療方案擬定提供依據(jù)。

總而言之，外周血細(xì)胞炎癥標(biāo)記物具有操作簡(jiǎn)單、所需標(biāo)本量少等特點(diǎn)，用于AIS人群中，可發(fā)揮較高的臨床應(yīng)用價(jià)值。

參考文獻(xiàn)

張潔.CD11c分子及其在抗腫瘤免疫中作用的研究進(jìn)展[J].中國(guó)免疫學(xué)雜志，2015，31（8）：1138-1142.

趙薛旭，夏文偉，李作漢，等.急性缺血性腦卒中患者外周血白細(xì)胞CD11c/CD18表達(dá)的變化[J].卒中與神經(jīng)疾病，2007，14（4）：232-234.

中華醫(yī)學(xué)會(huì)神經(jīng)病學(xué)分會(huì)，中華醫(yī)學(xué)會(huì)神經(jīng)病學(xué)分會(huì)腦血管病學(xué)組.中國(guó)急性缺血性腦卒中診治指南2018[J].中華神經(jīng)科雜志，2018，51（9）：666-682.

Huybrechts K F，Caro J J，Xenakis J J，et al.The prognostic value of the modified Rankin Scale score for long-term survival after first-ever stroke.Results from the Athens Stroke Registry[J].Cerebrovasc Dis，2008，26（4）：381-387.

王安荔，陳智才，史飛娜，等.急性缺血性卒中血管內(nèi)治療：時(shí)間就是大腦[J].中國(guó)卒中雜志，2018，13（2）：160-166.

Uotila LM，Aatonen M，Gahmberg CG.Integrin CD11c/CD18 ?±-chain phosphorylation is functionally important[J].J Biol Chem，2013，288（46）：33494-33499.

夏文偉，趙薛旭，李作漢.急性缺血性卒中患者外周血中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞CD11c、CD18的表達(dá)[J].中華神經(jīng)科雜志，2005，38（11）：709-710.

肖漓，白劍，何秀云，等.巨細(xì)胞病毒感染的腎移植受者中性粒細(xì)胞表面黏附分子的表達(dá)及意義[J].中華醫(yī)學(xué)雜志，2016，96（20）：1562-1565.

夏文偉，趙薛旭，李作漢.整合數(shù)CD11c/CD18在急性缺血性卒中患者外周血白細(xì)胞表達(dá)及意義[J].南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2005，25（11）：830-832.

毛景東，劉金華，丁寧，等.CD11b/CD18對(duì)中性粒細(xì)胞功能的調(diào)控研究進(jìn)展[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2014，35（1）：106-110.