陳立加 張雙喜 黃景彬 高卓維

（廣州中醫(yī)藥大學(xué)順德醫(yī)院，廣東 佛山 528300）

胃癌是一種常見惡性腫瘤，早期胃癌以手術(shù)為主，進(jìn)展期胃癌則往往需要聯(lián)合化療[1]，但化療耐藥是臨床棘手的問題。本課題從中藥單體入手，研究中藥單體-魚藤素對(duì)胃癌多藥耐藥細(xì)胞SGC7901/VCR的活性影響。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)藥物。魚藤素：相對(duì)分子質(zhì)量為394.42，由廣東藥科大學(xué)仇志坤博士饋贈(zèng)，4 ℃避光保存，臨用時(shí)配成實(shí)驗(yàn)所需濃度。

1.2 細(xì)胞系：胃癌細(xì)胞SGC7901/VCR，由廣東藥科大學(xué)仇志坤博士饋贈(zèng)，實(shí)驗(yàn)室傳代培養(yǎng)。

1.3 試劑和儀器：RPMI 1640培養(yǎng)基、0.25%胰酶、胎牛血清（美國HyClone公司）；細(xì)胞增殖與活性檢測(cè)試劑盒（Cell Counting Kit，CCK-8）。

1.4 方法：將胃癌細(xì)胞SGC7901/VCR培養(yǎng)于體積分?jǐn)?shù)為10%胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基中，置37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

CCK-8法測(cè)定肺癌細(xì)胞的活力：將胃癌細(xì)胞SGC7901/VCR接種于96孔培養(yǎng)板中，每孔細(xì)胞數(shù)2.5×103個(gè)。細(xì)胞分為3組。第1組為實(shí)驗(yàn)組，分別加入含苦參堿濃度為5、50、100、250、500 μg/mL的完全培養(yǎng)基，終體積為100 μL，每濃度組設(shè)3個(gè)復(fù)孔。第2組為陰性對(duì)照組，細(xì)胞培養(yǎng)體系中不加藥物，設(shè)3個(gè)復(fù)孔。第3組為空白調(diào)零組，僅加等體積的培養(yǎng)液。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)12或24 h后，加入終濃度為10 μL/mL CCK8溶液，在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1 h后上酶標(biāo)儀檢測(cè)450 nm處的吸光度（A值）。細(xì)胞活力（%）=[A（加藥）-A（空白）]/[A（0加藥）-A（空白）]×100。

2 結(jié) 果

CCK-8檢測(cè)肺癌細(xì)胞活力的變化：魚藤素在不同濃度（100、250、500 μg/mL）對(duì)胃癌細(xì)胞SGC7901/VCR活力有不同程度的抑制作用，并呈現(xiàn)出濃度和時(shí)間梯度依賴性，當(dāng)藥物終濃度為250 μg/mL作用時(shí)間為12、24 h時(shí)，對(duì)胃癌細(xì)胞SGC7901/VCR胞的抑制率分別為36.70%、41.10%。

3 討 論

胃癌是世界范圍內(nèi)最常見的惡性腫瘤之一，據(jù)2000年資料統(tǒng)計(jì)，全球每年新發(fā)胃癌87.6萬例，占所有新發(fā)癌癥病例的9%，僅次于肺癌、乳腺癌和腸癌之后，位居第4位。每年約有64.7萬人因胃癌死亡，位居癌癥死因的第2位[2]?，F(xiàn)階段胃癌的治療仍是以綜合治療為主，當(dāng)然手術(shù)是主要治療手段，由于許多胃癌發(fā)現(xiàn)就屬于中晚期，失去了手術(shù)機(jī)會(huì)，化療是提高治愈的主要手段[3]。但多藥耐藥（multi drug resistance，MDR）是化療失敗的主要因素[4]。因此本研究以胃癌多藥耐藥細(xì)胞SGC7901/VCR為研究對(duì)象。試圖探討中藥單體對(duì)抗胃癌耐藥的可能機(jī)制。

魚藤素是從豆科家族絹毛萌豆中提取的一種黃酮類化合物，分子式C23H22O6，是一種有潛在應(yīng)用價(jià)值的抗癌新藥，可抑制腫瘤細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[5]。美國Anderson癌癥中心的Chun等指出，魚藤素的作用機(jī)制是高度專一性的，其主要攻擊目標(biāo)是腫瘤細(xì)胞及癌前病變細(xì)胞，對(duì)其周邊組織的正常細(xì)胞影響甚微，魚藤素在很低濃度下即可抑制多種腫瘤細(xì)胞的生長，且對(duì)腫瘤細(xì)胞的作用有較強(qiáng)的選擇性，對(duì)正常細(xì)胞的不良反應(yīng)小，具有高效低毒特點(diǎn)，其作用機(jī)制以誘導(dǎo)凋亡為主[6]。美國癌癥研究協(xié)會(huì)的研究表明，魚藤素可對(duì)多種進(jìn)展期腫瘤，如結(jié)腸癌、肺癌、皮膚癌和乳腺癌等有治療作用[7]。體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，魚藤素可抑制肺癌、白血病等多種腫瘤細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)凋亡，還能增加腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物和放射線的敏感性[8]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示魚藤素在有效的濃度范圍發(fā)揮抗癌作用的同時(shí)未發(fā)現(xiàn)有明顯不良反應(yīng)[9]。

魚藤素對(duì)胃癌多藥耐藥細(xì)胞的作用效果既往未見報(bào)道。本課題研究結(jié)果顯示，魚藤素在不同濃度（100、250、500 μg/mL）對(duì)胃癌細(xì)胞SGC7901/VCR活力有不同程度的抑制作用，并呈現(xiàn)出濃度和時(shí)間梯度依賴性，當(dāng)藥物終濃度為250 μg/mL作用時(shí)間為12、24 h時(shí)，對(duì)胃癌細(xì)胞SGC7901/VCR的抑制率分別為36.70%、41.10%，顯示魚藤素對(duì)胃癌細(xì)胞SGC7901/VCR的活力有抑制作用，且呈時(shí)間和濃度依賴性。本研究提示魚藤素可能是對(duì)抗胃癌多藥耐藥的一種潛在藥物，值得深入研究。