羅華灶 李 雪 朱乃碩

(復(fù)旦大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院微生物感染與分子免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)室，上海 200438)

癌癥免疫治療是手術(shù)、化療和放療之外被公認(rèn)為癌癥治療的一個(gè)支柱，腫瘤免疫治療旨在靶向機(jī)體免疫系統(tǒng)，刺激宿主產(chǎn)生抗腫瘤反應(yīng)。早期的免疫檢查點(diǎn)抑制劑(靶向CTLA-4和PD-1)正從二線轉(zhuǎn)變?yōu)橥砥诜切〖?xì)胞肺癌和黑色素瘤的一線治療[1,2]。然而這些藥物治療導(dǎo)致其他免疫檢查點(diǎn)上調(diào)來誘導(dǎo)抗藥性，因此迫切需要新的抗腫瘤免疫激活劑[3]。新興藥物不僅通過阻斷免疫抑制檢查點(diǎn)，而且靶向巨噬細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞靶點(diǎn)介導(dǎo)的先天免疫過程，從而產(chǎn)生更強(qiáng)的抗腫瘤反應(yīng)。本綜述討論的新興免疫檢查點(diǎn)根據(jù)其在研究階段的綜述或研究論文進(jìn)行簡要總結(jié)，并提出未來發(fā)展趨勢的見解。

1 天然免疫

1.1巨噬細(xì)胞檢查點(diǎn)

1.1.1CD40 成功的癌癥免疫治療依賴于固有和適應(yīng)性免疫系統(tǒng)的合作。參與天然和適應(yīng)性免疫鏈接的關(guān)鍵分子是CD40，由Bj?rck等[4]在膀胱癌細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的一種Ⅱ型跨膜糖蛋白，是TNF受體超家族的成員，是一種與T細(xì)胞和B細(xì)胞功能相關(guān)的表面抗原。CD40由B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、單核細(xì)胞和血小板以及一些非造血細(xì)胞類型如成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞表達(dá)，甚至有些腫瘤細(xì)胞也表達(dá)CD40[5]。與其三聚體配體CD40L(CD154)在活化T輔助細(xì)胞上的相互作用誘導(dǎo)適應(yīng)性免疫(例如Th1細(xì)胞激活巨噬細(xì)胞)所需的APC活化，并導(dǎo)致促炎性細(xì)胞因子的分泌增加。CD40信號的影響顯然是多方面的，取決于表達(dá)CD40的細(xì)胞類型和提供CD40信號的微環(huán)境。CD40L是Ⅱ型跨膜蛋白，主要在活化的T細(xì)胞、NK細(xì)胞和B細(xì)胞以及粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和血小板上表達(dá)，在炎癥條件下也在其他細(xì)胞中表達(dá)。早期發(fā)現(xiàn)DC上的CD40與活化的CD4+T細(xì)胞上CD40配體之間的相互作用被認(rèn)為是促使DC有效遞呈抗原和激活抗原特異性CD8+T細(xì)胞的關(guān)鍵步驟。具體而言，DC上CD40與CD40L結(jié)合增強(qiáng)共刺激(例如CD80和CD86)和MHC分子的表達(dá)，誘導(dǎo)免疫刺激性細(xì)胞因子的釋放，激活抗原遞呈機(jī)制。已顯示依賴于NF-κB途徑的活化后，CD40增強(qiáng)惡性細(xì)胞的增殖、侵襲能力和耐藥性，例如CD40和CD40L的共表達(dá)增強(qiáng)了永生化人上皮細(xì)胞的體外增殖、運(yùn)動和侵襲。CD40在腫瘤免疫中的重要性在具有里程碑意義的研究中得到證實(shí)，其中在小鼠癌癥模型中施用針對CD40的激動性抗體產(chǎn)生保護(hù)性T細(xì)胞免疫。已經(jīng)研究了幾種方法來激活人體中CD40途徑：①重組人CD40配體；②CD40配體基因治療；③CD40激動劑抗體。對于重組人CD40配體(rhCD40L)，在沒有進(jìn)行性疾病或器官毒性的情況下針對晚期實(shí)體瘤和非霍奇金淋巴瘤患者中已到Ⅰ期臨床研究中。對于使用表達(dá)CD40配體腺病毒載體的CD40配體基因療法(AdCD40L)，一項(xiàng)研究報(bào)道了8例膀胱癌患者接受AdCD40L治療后減少了惡性細(xì)胞的負(fù)荷[6]?？傊?，這些臨床研究展示了使用基于CD40配體的策略來激活患者中的CD40用于癌癥治療的前景。迄今為止在體內(nèi)激活CD40的最先進(jìn)的臨床方法涉及使用激動性CD40單克隆抗體。腫瘤中使用CD40激動劑的益處：①直接的抗腫瘤活性；②誘導(dǎo)T細(xì)胞免疫；③激活先天性免疫監(jiān)視。在晚期實(shí)體惡性腫瘤患者中，首次報(bào)道了全人源和選擇性激動性CD40抗體的CP-870893激動劑單克隆抗體(mAb)，設(shè)計(jì)出Fc受體結(jié)合活性最弱的IgG2同種型抗體。第二代CD40激動劑基于增加對FcγRIIB的Fc親和力效力的CD40激動劑在鼠模型中顯示交聯(lián)活性，已經(jīng)用IgG1Fc結(jié)構(gòu)域工程化，以增強(qiáng)Fcγ受體(FcγR)的相互作用。在過去的十年中，已經(jīng)開發(fā)了幾種靶向CD40的臨床級抗體。每一種都具有獨(dú)特性質(zhì)：①對CD40的結(jié)合親和力；②同種型；③交聯(lián)活性；④阻斷CD40配體結(jié)合的能力。目前主要包括以下幾種在研抗體：CP-870893、APX005M、ADC-1013、Dacetuzu-mab、SEA-CD40、ChiLob 7/4、Lucatumumab[7-11]。

1.1.2CD47/SIRPα CD47稱為整聯(lián)相關(guān)蛋白(IAP)，是一種約50 kD高度糖基化的免疫球蛋白超家族成員，廣泛表達(dá)的膜蛋白，其N末端具有單個(gè)IgV樣結(jié)構(gòu)域，CD47的Ig結(jié)構(gòu)域與幾種蛋白[包括β3整合素蛋白，血小板反應(yīng)蛋白(TSP)和信號調(diào)節(jié)蛋白α(SIRPα)]相互作用，以調(diào)節(jié)各種細(xì)胞功能，包括細(xì)胞遷移、軸突延伸、細(xì)胞因子產(chǎn)生和T細(xì)胞活化。與整聯(lián)蛋白結(jié)合，CD47介導(dǎo)白細(xì)胞黏附和遷移。通過與血小板反應(yīng)蛋白結(jié)合，CD47也參與血小板活化，并且發(fā)現(xiàn)其抑制血管細(xì)胞中的一氧化氮(NO)信號傳導(dǎo)。CD47通過與SIRPα相互作用在穩(wěn)態(tài)中起關(guān)鍵作用，誘導(dǎo)樹突狀細(xì)胞的成熟并負(fù)責(zé)細(xì)胞凋亡調(diào)控。CD47在各種類型的人類腫瘤中高度表達(dá)，包括急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞、原發(fā)滲出性淋巴瘤細(xì)胞、非霍奇金淋巴瘤(NHL)細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞、膀胱腫瘤起始細(xì)胞、急性髓細(xì)胞白血病干細(xì)胞、頭頸部鱗狀細(xì)胞癌、乳腺癌、肝細(xì)胞癌、胰腺導(dǎo)管腺癌、前列腺腫瘤細(xì)胞和結(jié)腸膠質(zhì)母細(xì)胞瘤。CD47-/-敲除小鼠的發(fā)展促使對CD47的功能進(jìn)行深入評估，從而證明其作為免疫調(diào)節(jié)分子的作用。Oldenborg等[12]發(fā)現(xiàn)將CD47-/-紅細(xì)胞輸入野生型小鼠后，缺乏CD47的紅細(xì)胞迅速從血液循環(huán)中被清除。此外，當(dāng)從CD47-/-來源的骨髓細(xì)胞移植到野生型小鼠中時(shí)未能成功，表明CD47在保護(hù)干細(xì)胞和祖細(xì)胞免于被巨噬細(xì)胞清除。臨床調(diào)查表明，與CD47低表達(dá)的患者相比，CD47表達(dá)增加的患者總體生存率明顯較差，通過嗎啉阻斷CTSS/PAR2信號抑制CD47表達(dá)后，抑制肝細(xì)胞癌的體內(nèi)生長[13]。參與細(xì)胞運(yùn)動、增殖和分化調(diào)控的細(xì)胞外基質(zhì)糖蛋白家族的TSP-1蛋白最早被確定與CD47相互作用。然而，最近的研究集中在CD47/SIRPα上，因?yàn)樗谕淌勺饔弥芯哂幸种谱饔?。SIRPα又稱為Src同源2結(jié)構(gòu)域蛋白酪氨酸磷酸酶底物1/分化抗原簇家族成員A(SHPS-1/BIT/CD172a)，是免疫球蛋白超家族的另一種膜蛋白，特別在骨髓譜系造血細(xì)胞中表達(dá)豐富，如巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞[14]。通過與CD47相互作用，激活SIRPα阻止吞噬突觸處的肌球蛋白Ⅱ聚集并抑制呼吸爆發(fā)來抑制吞噬作用[15]，由于抗原呈遞細(xì)胞攝取的腫瘤細(xì)胞減少，間接導(dǎo)致T細(xì)胞活化被抑制，此外，幼稚T細(xì)胞上CD47的激活促進(jìn)Tregs的形成并抑制Th1效應(yīng)細(xì)胞的形成。CD47/SIRP 是一種關(guān)鍵的分子互作系統(tǒng)，抑制巨噬細(xì)胞和其他骨髓細(xì)胞對腫瘤的激活，作為負(fù)調(diào)免疫檢查點(diǎn)發(fā)送一個(gè)“不吃我”的信號，以確保健康的自體細(xì)胞不被不恰當(dāng)?shù)赝淌?。在體外通過巨噬細(xì)胞CD47/SIRPα阻斷來誘導(dǎo)癌細(xì)胞的吞噬作用。在使用NOD-scid-IL2Rnull(NSG)小鼠的各種異種移植瘤模型中，使用人CD47阻斷性單克隆抗體已經(jīng)證實(shí)對人急性淋巴細(xì)胞性白血病、急性骨髓性白血病、平滑肌肉瘤和實(shí)體瘤有巨大臨床益處。靶向CD47/SIRPα的多種治療劑處于臨床前和臨床研究中，包括常規(guī)抗體，重組多肽和雙特異性分子。來源于SIRP 的重組多肽也被開發(fā)為CD47阻斷劑，通過與CD47結(jié)合并與免疫細(xì)胞上的內(nèi)源性SIRP 競爭而作為誘餌受體。通過將野生型SIRP 融合至人Fc結(jié)構(gòu)域來構(gòu)建一種突變體，在體外，當(dāng)巨噬細(xì)胞用IFN-γ和脂多糖預(yù)活化時(shí)，它能夠刺激人急性髓細(xì)胞白血病(AML)細(xì)胞的吞噬作用，TTI-621正是基于此機(jī)制進(jìn)入臨床試驗(yàn)的第一批藥物。為實(shí)現(xiàn)對腫瘤的更高特異性和避免對表達(dá)CD47的健康細(xì)胞的靶向毒性，已經(jīng)開發(fā)了雙特異性試劑。當(dāng)與抗CD20抗體1E4-cIgGb組合時(shí)，能夠根除小鼠淋巴瘤。基于靶向CD20和CD47的組合在臨床前也成功消除B細(xì)胞惡性腫瘤，這些雙特異性抗體包括NI-1701和NI-1801。迄今為止，抗CD47抗體是針對CD47/SIRP 的最佳表觀療法，包括Hu5F9-G4、CC-90002、IgG4亞類的人源化CD47抗體[16]。另有全人源CD47抗體SRF231，通過噬菌體展示手段產(chǎn)生的，目前正在評估白血病的臨床前模型。還有高親和力SIRP 突變體ALX148和SIRP 抗體Effi-DEM在臨床前或一期臨床作為單藥或聯(lián)合atezolizumab或trastuzumab治療實(shí)體瘤和淋巴瘤。為了更好地治療癌癥，CD47檢查點(diǎn)拮抗劑的靶向遞送可以作為與其他靶點(diǎn)抗體協(xié)同作用的潛在助推劑，正如Ⅰ期臨床試驗(yàn)用西妥昔單抗或利妥昔單抗聯(lián)合治療所反映的益處。

1.1.3IDO 吲哚胺2,3-雙加氧酶(Indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)是一種催化色氨酸沿犬尿氨酸路徑氧化分解代謝的首個(gè)關(guān)鍵酶，IDO是一種含血紅素的氧化還原酶，催化色氨酸分解的初始和限速步驟。吲哚胺2,3-雙加氧酶1(IDO1)是最先發(fā)現(xiàn)的IDO亞型，新發(fā)現(xiàn)的其他兩種亞型，分別為色氨酸2,3-雙加氧酶(Tryptophan 2,3-dioxygnease，TDO)和吲哚胺 2,3-雙加氧酶2(Indoleamine 2,3-dioxy-genase，IDO2)，都參與犬尿氨酸途徑，但底物特異性和組織表達(dá)范圍不同。一般情況下IDO即指IDO1，IDO1底物研究更多，最初是從兔腸中分離。在正常免疫系統(tǒng)的情況下，IDO在肺、腸、眼、附睪和胸腺的上皮組織以及許多免疫細(xì)胞(樹突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞、多形核粒細(xì)胞)中廣泛表達(dá)。IDO的免疫調(diào)節(jié)作用最初是在母胎界面通過胎盤表達(dá)促使母體T細(xì)胞對同種異體耐受過程中被發(fā)現(xiàn)。隨后IDO被發(fā)現(xiàn)是各種生理和病理環(huán)境中免疫應(yīng)答的中心調(diào)節(jié)者。IDO可降解人體內(nèi)90%的色氨酸，在免疫系統(tǒng)中起抑制作用，因?yàn)榭乖蕾囆约せ畹腡細(xì)胞需要色氨酸用于細(xì)胞增殖和存活。IDO-犬尿氨酸途徑的主要調(diào)節(jié)功能是作為多層面的負(fù)反饋機(jī)制來限制Th1和Th2應(yīng)答并控制Th1/Th2平衡。在惡性黑色素瘤中，IDO上調(diào)與Treg數(shù)量增加有關(guān)，涉及Treg分化和激活的幾個(gè)階段。有報(bào)道揭示IDO起到特異性和瞬時(shí)重塑NK細(xì)胞的能力，從而失去由NKp46和NKG2D受體識別靶標(biāo)的殺傷能力，以及與樹突狀細(xì)胞相互作用被功能性地重定向。越來越多的證據(jù)表明，IDO參與促進(jìn)瘤內(nèi)骨髓來源的抑制性細(xì)胞(Myeloid-derived suppressor cells，MDSCs)積聚和活性，也可以作為MDSCs自身潛在的免疫抑制分子。IDO的活性對局部組織微環(huán)境的色氨酸有分解耗竭及產(chǎn)生犬尿氨酸的雙重作用，缺乏游離的色氨酸激活了細(xì)胞內(nèi)源性的蛋白激酶-真核起始因子2α激酶(GCN2-eIF2α)應(yīng)激信號通路，導(dǎo)致細(xì)胞周期停滯和無能誘導(dǎo)。IDO在大多數(shù)腫瘤浸潤組織和腫瘤引流淋巴結(jié)中過表達(dá)，并且在幫助腫瘤逃避免疫系統(tǒng)攻擊方面起重要作用，與預(yù)后不良相關(guān)。最近的證據(jù)表明IDO蛋白質(zhì)水平在腫瘤內(nèi)可持續(xù)的方式之一是由于自分泌信號傳導(dǎo)環(huán)路，這種自分泌環(huán)路負(fù)責(zé)抑制T細(xì)胞增殖[17]。IDO表達(dá)受到抑癌基因Bin1的遺傳控制，在免疫活性小鼠模型中，BIN1敲除誘導(dǎo)更高水平的IFN-γ，刺激IDO表達(dá)并導(dǎo)致腫瘤增長，使用Bin1敲除小鼠的初步研究揭示了Bin1喪失與年齡相關(guān)的肺癌和肝癌發(fā)病率增加之間的關(guān)系。接種IDO轉(zhuǎn)染細(xì)胞系可抑制其在腫瘤抗原免疫小鼠中的排斥，已經(jīng)在許多小鼠腫瘤模型中顯示IDO的藥理學(xué)抑制，以刺激強(qiáng)大的T細(xì)胞應(yīng)答并抑制腫瘤進(jìn)展。有研究表明過表達(dá)IDO的大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)可以通過有效調(diào)節(jié)免疫DC、T 細(xì)胞及炎性細(xì)胞因子，從多個(gè)免疫層面改善移植心臟存活[18]。IDO抑制劑阻斷分解色氨酸的IDO酶，增強(qiáng)對腫瘤的免疫應(yīng)答。目前正在進(jìn)行多種IDO小分子抑制劑單藥或聯(lián)合疫苗、免疫檢查點(diǎn)抑制劑及細(xì)胞毒性化療的臨床試驗(yàn)。其中使用IDO抑制劑IMT(1-methyl tryptophan)證實(shí)了IDO的活性是促進(jìn)小鼠腫瘤生長的條件。最近報(bào)道，IMT的右旋糖異構(gòu)體(D-IMT)可作為新鑒定的IDO旁系同源物IDO2的選擇性抑制劑。在臨床研究中，大部分患者對IDO抑制劑epacadostat(INCB024360)和indoximod(NLG-8189)耐受良好，疾病穩(wěn)定，然而單獨(dú)治療的IDO抑制劑根除腫瘤沒有實(shí)現(xiàn)，但是在將IDO抑制劑與免疫檢查點(diǎn)阻斷相結(jié)合的研究中獲得了更令人欣喜的結(jié)果。在黑素瘤中，indoximod與檢查點(diǎn)抑制劑Yervoy(易普利姆瑪；BMS)組合的Ⅰ/Ⅱ期研究預(yù)計(jì)很快將被報(bào)道(NCT02073123)。epacadostat聯(lián)合抗PD-1藥物pembrolizumab，在15/19晚期實(shí)體惡性腫瘤患者中觀察到腫瘤負(fù)荷的降低，其中包括在黑素瘤患者中的2個(gè)完全反應(yīng)。前期研究表明IDO在多種腫瘤組織中的高表達(dá)，改造了腫瘤微環(huán)境中浸潤的免疫細(xì)胞類型及數(shù)量，在免疫逃逸中IDO占據(jù)重要作用，相信在未來，隨著新抑制劑及其與IDO復(fù)合物結(jié)構(gòu)信息的豐富，會有更多療效更好的、靶向性高的、副作用小的IDO抑制劑進(jìn)入到臨床研究，并最終用于人類腫瘤疾病的治療中。

1.1.4Siglecs 唾液酸結(jié)合性免疫球蛋白樣凝集素(Siglecs)是通過對唾液酸黏附素(Siglec-1；CD169)和CD22(Siglec-2)的會聚研究發(fā)現(xiàn)的免疫調(diào)節(jié)受體家族，其功能受其共聚糖配體調(diào)節(jié)。目前發(fā)現(xiàn)15種人源和9種鼠源的Siglec分子，Siglec特異性表達(dá)于髓系細(xì)胞和免疫細(xì)胞表面。Siglec-1為識別唾液酸的巨噬細(xì)胞黏附受體，為免疫球蛋白超家族(IgSF)成員，Siglec-2被鑒定為IgSF的B細(xì)胞抑制性受體和識別唾液酸。Siglecs家族分為兩類：哺乳動物中序列保守的一類，如sialoadhesin、CD22、MAG和Siglec-15，以及一組CD33相關(guān)的序列可變Siglecs。大多數(shù)Siglecs的胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域具有基于免疫受體酪氨酸的抑制基序(ITIM)，并通過招募酪氨酸磷酸酶如SHP-1和SHP-2(酪氨酸蛋白磷酸酶非受體6和11型)發(fā)揮免疫抑制功能。由于Siglecs的細(xì)胞類型特異性表達(dá)模式，內(nèi)吞性質(zhì)，某些淋巴瘤/白血病的高表達(dá)和調(diào)節(jié)受體信號的能力，使其成為理想的治療靶點(diǎn)，大部分Siglecs在與抗體[19]或聚糖配體[20]結(jié)合后迅速被特異性表達(dá)的細(xì)胞內(nèi)吞。Siglecs參與機(jī)體抗腫瘤免疫調(diào)節(jié)，包括Siglec-1、Siglec-2、Siglec-3(CD33)、Siglec-7以及Siglec-10(Siglec-G)等，Siglecs缺失可導(dǎo)致白血病和淋巴瘤發(fā)生[21]。靶向Siglec的抗體可通過募集免疫系統(tǒng)的效應(yīng)細(xì)胞，遞送藥物、釋放毒素或直接誘導(dǎo)凋亡信號來殺傷表達(dá)Siglec的細(xì)胞，可以減少抗體依賴性細(xì)胞毒性(ADCC)和補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性(CDC)。有報(bào)道發(fā)現(xiàn)表達(dá)Siglec-1的巨噬細(xì)胞數(shù)量越多，結(jié)腸癌患者的存活期越長；多變量分析證明Siglec-1可作為結(jié)腸癌患者預(yù)后和生存期的標(biāo)志物；表達(dá)Siglec-1的巨噬細(xì)胞與局部腫瘤浸潤C(jī)D8+T細(xì)胞的數(shù)量正相關(guān)，提示表達(dá)Siglec-1的巨噬細(xì)胞可以促進(jìn)CD8+T細(xì)胞介導(dǎo)的抗腫瘤免疫。2000年，抗CD33抗體-烯二炔類高效抗腫瘤抗生素綴合物Mylotarg(gemtuzumab ozogamicin)被批準(zhǔn)用于治療AML。雖然抗CD22抗體治療B細(xì)胞白血病/淋巴瘤還沒有被批準(zhǔn)上市，但有幾種化合物處于Ⅱ期和Ⅲ期臨床試驗(yàn)。研究最深入的是奧莫加霉素(inotuzumab)，已經(jīng)開展針對復(fù)發(fā)或難治性B細(xì)胞急性淋巴細(xì)胞白血病(BALL)的Ⅲ期臨床試驗(yàn)中。另外包括CMC544治療非霍奇金淋巴瘤進(jìn)入臨床Ⅱ/Ⅲ期，BL22治療毛細(xì)胞白血病已進(jìn)入臨床Ⅱ期，Epratuzumab 治療毛細(xì)胞白血病進(jìn)入臨床Ⅲ期。近來發(fā)現(xiàn)，組蛋白去乙酰化酶抑制劑HDACi可以調(diào)節(jié)細(xì)胞表面Siglecs表達(dá)；HDAC抑制劑AR42抑制HB22.7(抗CD22單抗)介導(dǎo)的CD22內(nèi)化，可降低CD22膜表達(dá)，從而增強(qiáng)HB22.7的療效[22]。已經(jīng)開發(fā)了識別B細(xì)胞上的CD22和CD19或CD22和CD20的雙特異性抗體，并且與單獨(dú)靶向任一受體的抗體相比，功效顯著增強(qiáng)[23]。利用合成糖基化配體靶向Siglec成為一種新興的治療方式。合成的配體與B細(xì)胞表面CD22結(jié)合，并呈現(xiàn)類似于順式結(jié)合方式，阻斷與外源配體的結(jié)合。最近還有研究發(fā)現(xiàn)，利用脂質(zhì)體包裹CD22和CD33雙配體，通過靶向表達(dá)CD22和CD33的外周血細(xì)胞，具有治療髓系淋巴瘤和B細(xì)胞淋巴瘤的潛能[24]。Siglec分子參與了多種疾病的免疫調(diào)節(jié)和病理過程，可作為一種有效的臨床免疫性疾病的治療靶點(diǎn)。未來對該家族免疫功能的深入研究，將有助于揭示Siglec家族在免疫調(diào)控中的作用機(jī)制，以及拓展其在免疫性疾病中的治療潛能。

1.2自然殺傷細(xì)胞檢查點(diǎn)

1.2.1CD160 CD160是由Bensussan實(shí)驗(yàn)室通過用人源NK細(xì)胞系白血病YT2C2免疫小鼠發(fā)現(xiàn)的NK細(xì)胞特異性受體，證實(shí)了其在人外周血(PB)NK細(xì)胞中的激活功能，并產(chǎn)生稱為BY55的NK特異性IgM單克隆抗體(mAb)[25]。CD160 cDNA編碼具有181個(gè)氨基酸的開放閱讀框，具有單個(gè)IgV樣結(jié)構(gòu)域和GPI錨定的膜蛋白。CD160由循環(huán)毒性淋巴細(xì)胞表達(dá)，主要包括CD16+NK細(xì)胞亞群， T細(xì)胞，小部分表達(dá)顆粒酶B和穿孔素的CD8+/CD95+/CD28-T細(xì)胞亞群和大多數(shù)腸上皮內(nèi)CD8+、CD4+T細(xì)胞以及活化的內(nèi)皮細(xì)胞。CD160的共表達(dá)是NK細(xì)胞毒亞群的標(biāo)記，高表達(dá)CD160的NK細(xì)胞比CD160表達(dá)下調(diào)的NK細(xì)胞毒性更強(qiáng)。CD160能廣泛與經(jīng)典和非經(jīng)典的MHC 類分子結(jié)合，包括經(jīng)典HLA-A2、HLA-B7、HLA-Cw3和非經(jīng)典HLA-E、HLA-G。CD160與HLA-C結(jié)合后能誘導(dǎo)NK細(xì)胞或CD8+T細(xì)胞毒活性，并誘導(dǎo)一些細(xì)胞因子如TNF-α、IFN-γ、IL-6和IL-8等分泌。Bessusan等[26]通過共聚焦顯微鏡發(fā)現(xiàn)PI3K和CD160共定位于膜上，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)加入PI3K阻斷劑后，CD160活化的特定細(xì)胞分裂百分比下降，細(xì)胞因子的分泌隨之減少。證實(shí)了PI3K在這一信號傳導(dǎo)過程中起重要作用。在人PB-NK細(xì)胞中，CD160特異性參與募集PI3K并誘導(dǎo)Akt磷酸化和細(xì)胞外信號相關(guān)激酶下游信號傳導(dǎo)，來自慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL)表達(dá)CD160的B細(xì)胞使用類似的CD160介導(dǎo)的途徑來增強(qiáng)其存活和細(xì)胞激活，導(dǎo)致IL-6產(chǎn)生[27]。在CD4+T細(xì)胞上表達(dá)的CD160與HVEM相互作用，抑制T細(xì)胞活化。當(dāng)使用抗CD160單克隆抗體交聯(lián)PB-NK上CD160受體時(shí)，CD160能夠引起細(xì)胞殺傷活性和細(xì)胞因子分泌，因此CD160可以作為T細(xì)胞的免疫抑制檢查點(diǎn)[28]。

1.2.2KIRs KIR是人NK細(xì)胞功能關(guān)鍵的激活和抑制性調(diào)節(jié)受體，屬于免疫球蛋白超家族，結(jié)構(gòu)上以2或3個(gè)胞外結(jié)構(gòu)域和可以轉(zhuǎn)導(dǎo)活化或抑制信號的短(S)或長(L)胞質(zhì)尾部為特征。KIR的主要配體是經(jīng)典的HLAⅠ類分子，KIR阻止了NK細(xì)胞殺傷表達(dá)HLAⅠ類分子的正常細(xì)胞。KIR包含MHCⅠ結(jié)合分子的多樣性，其負(fù)調(diào)節(jié)NK功能以保護(hù)細(xì)胞免受NK介導(dǎo)的細(xì)胞溶解，這種KIR/HLA強(qiáng)相互作用可以抑制NK激活信號。一些KIR家族成員(KIR2DL1-3、KIR3DL1)通過與MHC分子(HLA-C/HLA-B)結(jié)合發(fā)揮抑制功能[29]。NK細(xì)胞上的KIR表達(dá)是一種NK細(xì)胞避免自我識別的機(jī)制。由于它們高度多態(tài)性，各種KIR基因和配體的組合影響自身免疫和癌癥等疾病風(fēng)險(xiǎn)[30]。激活KIR基因(KIR2DS2、KIR2DS3和KIR2DS4)與改善結(jié)直腸癌和成膠質(zhì)細(xì)胞瘤患者的生存率相關(guān)[31]。在小鼠模型中，表達(dá)NK激活受體KIR2DS2的工程化嵌合抗原受體顯示出比常規(guī)共刺激分子更高的功效[32]。靶向KIR的幾種單克隆抗體正在臨床前模型和臨床試驗(yàn)中，并且已開發(fā)了非消耗性拮抗KIR2D抗體(lirilumab)。lirilumab可以阻斷大約一半的表達(dá)KIR2D受體的NK細(xì)胞中KIR/HLA相互作用，在體內(nèi)外增加活化的免疫效應(yīng)細(xì)胞的數(shù)量。Ⅰ期臨床正在研究lirilumab聯(lián)合elotuzumab治療多發(fā)性骨髓瘤患者，elotuzumab是一種針對信號轉(zhuǎn)導(dǎo)淋巴細(xì)胞活化分子F7(SLAMF7)的免疫刺激性單克隆抗體(NCT02252263)，然而單藥IPH2101(一種KIR2DL1、2和3的抗體抑制劑)的1/2期骨髓瘤試驗(yàn)顯示沒有疾病反應(yīng)，仍然還有單克隆抗KIR3DL2抗體IPH4102正在1/2期血液惡性腫瘤(NCT02921685)進(jìn)行試驗(yàn)。相信在未來結(jié)合KIR-HLA遺傳學(xué)特征、NK細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞HLA表型的組合，將預(yù)估從特定治療中受益的癌癥患者。

1.2.3HLA-G 人類白細(xì)胞抗原G(HLA-G)是一種具有良好的免疫調(diào)節(jié)活性的非典型HLAⅠ類分子，在1987年由Geraghty等[33]首次克隆成功，最初將HLA-G定義為胎兒逃避母體免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)分子。HLA-G的免疫抑制功能可以被腫瘤利用，耐受性HLA-G分子通過與免疫抑制性受體直接互作，與T、B淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞等免疫細(xì)胞表面的抑制性受體免疫球蛋白樣轉(zhuǎn)錄物2(Immunoglobulin-like transcript 2，ILT2/CD85j)、免疫球蛋白樣轉(zhuǎn)錄物4(Immunoglobulin-like transcript 4，ILT4/CD85d)和殺傷細(xì)胞免疫球蛋白樣受體(Killer cell immunoglo-bulin-likereceptor，KIR2DL4/CD158d)直接結(jié)合發(fā)揮生物學(xué)活性[34]，介導(dǎo)腫瘤的免疫逃逸過程。HLA-G通過誘導(dǎo)耐受性細(xì)胞的分化[包括TregHLA-G，CD4low和CD8low抑制性T細(xì)胞，Tr1細(xì)胞(CD4+CD25lowCD45RBlow)和DCIL-10]進(jìn)行長期的免疫調(diào)節(jié)。在生理情況下，HLA-G主要表達(dá)在絨毛外滋養(yǎng)層細(xì)胞、成人胸腺髓質(zhì)組織、角膜細(xì)胞、胰島和上皮樣祖細(xì)胞等細(xì)胞和組織；在病理情況下，HLA-G可以在腫瘤、器官移植和自身免疫性疾病等情況下產(chǎn)生。HLA-G的表達(dá)與惡性轉(zhuǎn)化相關(guān)以及與組織學(xué)高分級和晚期臨床分期相關(guān)，提出HLA-G作為預(yù)后標(biāo)志，因?yàn)榛颊哐獫{和活檢組織中HLA-G表達(dá)以及高水平可溶性HLA-G(sHLA-G)與不良預(yù)后顯著相關(guān)。最近發(fā)現(xiàn)HLA-G+腫瘤細(xì)胞在體內(nèi)誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生抗腫瘤免疫反應(yīng)耐受[35]，表達(dá)HLA-G的人或鼠腫瘤細(xì)胞可以生長在免疫活性宿主中，通過特異性抗體阻斷HLA-G的功能，抑制了腫瘤的生長。HLA-G 在腫瘤中的免疫逃逸機(jī)制涉及腫瘤免疫編輯的3個(gè)步驟：消除、平衡和逃逸。在消除階段，表達(dá)HLA-G的腫瘤細(xì)胞結(jié)合免疫細(xì)胞上ILT2和ILT4受體，抑制T和NK細(xì)胞的殺傷功能，使得腫瘤細(xì)胞逃避免疫細(xì)胞的識別和消除。此外HLA-G還可抑制細(xì)胞因子的分泌，誘導(dǎo)抗原呈遞細(xì)胞等分泌HLA-G，進(jìn)一步抑制免疫功能。在平衡階段細(xì)胞吞噬機(jī)制發(fā)揮作用，此時(shí)HLA-G處于低水平表達(dá)，但仍能減弱免疫細(xì)胞的活性，促進(jìn)調(diào)節(jié)細(xì)胞和免疫抑制因子如IL-10等生成。在逃逸階段，各種因素促進(jìn)HLA-G的表達(dá)，最大程度抑制免疫細(xì)胞的活性，使得腫瘤快速進(jìn)展，造成局部微環(huán)境低氧，進(jìn)一步促進(jìn)IL-10等細(xì)胞因子的生成，再次上調(diào)HLA-G表達(dá)，在這種正反饋機(jī)制的作用下，腫瘤最終臨床可見。臨床上設(shè)計(jì)以HLA-G為靶位點(diǎn)的藥物，通過阻斷、干擾甚至下調(diào) HLA-G來切斷腫瘤的免疫逃逸途徑，改變腫瘤生存的免疫環(huán)境，對HLA-G陽性的腫瘤細(xì)胞定向清除而減少腫瘤的復(fù)發(fā)，達(dá)到根治腫瘤的目的。另外HLA-G作為臨床診斷上確定腫瘤的惡性程度和判斷預(yù)后，揭示了更廣闊的治療前景[36]。

2 討論

免疫治療藥物的開發(fā)和臨床試驗(yàn)正在迅速發(fā)展，已成為國際生物醫(yī)藥領(lǐng)域的一大熱點(diǎn)，國際競爭日趨激烈。早期免疫檢查點(diǎn)抑制劑CTLA-4和PD-1/PD-L1的成功導(dǎo)致癌癥免疫治療的關(guān)注度急劇上升。腫瘤免疫療法的發(fā)展與突破和免疫學(xué)的基礎(chǔ)研究進(jìn)展緊密相關(guān)，免疫機(jī)制相關(guān)研究對于治療靶點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)以及治療手段的提出至關(guān)重要。新發(fā)現(xiàn)的靶標(biāo)和藥物如何納入臨床實(shí)踐之中是當(dāng)前臨床癌癥研究的主要焦點(diǎn)。目前許多新興的免疫抑制劑正在聯(lián)合PD-1/PD-L1和CTLA-4抑制劑進(jìn)行療效評價(jià)，但是不同患者療效和毒性仍有不確定性，還有給藥方式、劑量和時(shí)序，以及預(yù)后和療效預(yù)測生物標(biāo)志物的鑒定，并且檢查點(diǎn)抑制劑免疫反應(yīng)的預(yù)測性生物標(biāo)志物較少被使用。由于免疫檢查點(diǎn)藥物的臨床應(yīng)用所存在的局限性，使得腫瘤免疫檢查點(diǎn)治療需要更加精確以及個(gè)體化。將來提升對腫瘤免疫應(yīng)答調(diào)節(jié)、患者選擇性以及生物靶標(biāo)的理解，將有助于提高腫瘤患者的免疫治療效果。