徐雯+王楠+丁浩然+徐晶晶+瞿軼慧+蒲丹+修彥鳳

[摘要] 為了探討廣藿香對于濕阻中焦證大鼠胃腸功能的影響及其作用機(jī)制。通過對濕阻中焦證大鼠的胃內(nèi)殘留率、小腸推進(jìn)率、胃液量、胃液酸度和胃蛋白酶的測定以及對胃腸組織形態(tài)的觀察，評價廣藿香對胃腸功能的影響；采用ELISA法檢測濕阻中焦證大鼠血清中胃腸激素MTL，GAS，VIP及血清細(xì)胞因子TNF-α，IL-10的濃度，實時熒光定量PCR技術(shù)檢測大鼠胃和結(jié)腸組織中水通道蛋白AQP3，AQP4，AQP8的表達(dá)，探究廣藿香對于胃腸功能產(chǎn)生影響的作用機(jī)制。結(jié)果表明，中、高劑量廣藿香（3.24，6.48 g·kg-1）可以明顯降低大鼠的胃內(nèi)殘留率，促進(jìn)胃排空，增加小腸推進(jìn)率（P<0.05），加快胃腸推進(jìn)運動，增加胃液的分泌和酸度，提高胃蛋白酶的活性，改善胃腸道損傷；不同劑量的廣藿香可以升高血清中MTL和GAS的濃度，降低 VIP，TNF-α，IL-10 的濃度，下調(diào)胃和結(jié)腸AQP3的表達(dá)，上調(diào)結(jié)腸AQP4和AQP8的表達(dá)，中、高劑量的廣藿香調(diào)節(jié)效果較好。所以廣藿香可能通過調(diào)節(jié)胃腸激素、炎癥細(xì)胞因子和水通道蛋白的水平達(dá)到保證胃腸功能正常的目的，該研究結(jié)果為闡明采用芳香化濕藥治療濕困中焦、運化失職適應(yīng)證的作用機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。

[關(guān)鍵詞] 廣藿香； 濕阻中焦證； 胃腸功能； 作用機(jī)制

[Abstract] To investigate the effects of Pogostemon cablin（patchouli） on gastrointestinal function of rats with the syndrome of damp retention in middle-jiao， and explore its therapeutic mechanism. In this study， gastrointestinal function of rats with the syndrome of damp retention in middle-jiao was evaluated by multiple assays including gastric remnant rate， small intestine propelling rate， gastric juice quantity， pepsin activity and gastrointestinal tissue morphology. ELISA was used to detect gastrointestinal hormones including MTL， GAS， VIP and cytokines including TNF-α and interleukin 10 in rat serum. Real-time fluorescent quantitative PCR technique was used to detect relative mRNA expression of AQP3， AQP4 and AQP8 in gastric and colonic tissues to explore the mechanism of P. cablin in treatment of gastrointestinal functions. The results showed that middle and high dose of P. cablin （3.24， 6.48 g·kg-1） could obviously decrease the gastric remnant rate， promote gastric emptying， increase the small intestine propelling rate（P<0.05）， speed up the propulsive movement of gastrointestinal tract， increase the secretion and acidity of gastric juice， increase the activity of pepsin， and improve the injury of gastrointestinal tissue. All the doses of P. cablin could increase the concentration of MTL and GAS in serum， reduce the concentration of VIP， TNF-α and IL-10 in serum， decrease the mRNA expression of AQP3 in gastric and colonic tissues， and increase the expression levels of AQP4 and AQP8 in colonic tissues. The regulatory effects were better in middle and high dose groups. In conclusion， regulation of the levels of gastrointestinal hormones， inflammatory cytokines and aquaporins may be the paths for P. cablin to maintain normal gastrointestinal function of rats with the syndrome of damp retention in middle-jiao. The results of the study laid a foundation for clarifying the treatment mechanism of aromatic damp-resolving drugs for indications including damp retention in middle-jiao and transformation failure of spleen.endprint

[Key words] Pogostemon cablin； syndrome of damp retention in middle-jiao； gastrointestinal function； action mechanism

廣藿香為芳香化濕藥，是唇形科刺蕊草屬廣藿香Pogostemon cablin （Blanco） Benth.的干燥地上部分，味辛，性微溫，歸脾、胃、肺經(jīng)，具有芳香化濁、和中止嘔、發(fā)表解暑的作用，主治濕濁中阻，脘痞嘔吐，暑濕表證，濕溫初起，發(fā)熱倦怠，胸悶不舒，寒濕閉暑，腹痛吐瀉，鼻淵頭痛等[1]。傳統(tǒng)中藥理論認(rèn)為芳香化濕藥氣味芬芳，能化濕辟濁，振奮脾胃，鼓舞胃氣，濕困中焦、運化失職是本類藥物的主要適應(yīng)證。為了探討廣藿香對于濕阻中焦證大鼠胃腸功能的影響及其藥理學(xué)作用機(jī)制，本研究通過廣藿香對濕阻中焦證大鼠的胃內(nèi)殘留率、小腸推進(jìn)率、胃液量、胃液酸度和胃蛋白酶以及胃腸組織形態(tài)的影響，研究其對胃腸功能的影響；采用酶聯(lián)免疫吸附雙抗體夾心法（ELISA）檢測濕阻中焦證大鼠血清中胃腸激素：胃動素（MTL）、胃泌素（GAS）、血管活性腸肽（VIP）及血清細(xì)胞因子TNF-α（腫瘤壞死因子-α）、IL-10（白細(xì)胞介素-10）的濃度，實時熒光定量PCR技術(shù)檢測大鼠胃和結(jié)腸組織中水通道蛋白AQP3，AQP4，AQP8的表達(dá)，旨在探究廣藿香對于胃腸功能產(chǎn)生影響的作用機(jī)制，為科學(xué)地指導(dǎo)中醫(yī)臨床用藥奠定基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 儀器

RM2235石蠟切片機(jī)（德國Leica公司）；Nikon E800u生物顯微鏡（日本Nikon公司）；MultiSkan FC酶標(biāo)儀（美國Thermo Scientific公司）；Centrifuge 5417R高速冷凍離心機(jī)（德國Eppendorf公司）；ABI7500實時熒光定量PCR儀（美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司）；DU730分光光度計（美國Beckman公司）。

1.2 藥物與試劑

廣藿香（廣東省肇慶市德慶縣德鑫農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司，批號20151128）；豬油、蜂蜜、伊利全脂奶粉（上海聯(lián)華超市）；牛血紅蛋白（大連美侖生物技術(shù)有限公司，批號J0413A）；蘇木素伊紅染色試劑盒、封片液（上海碧云天生物技術(shù)有限公司）；RNA 提取試劑盒、SuperScriptTM Ⅲ First-Strand Synthesis SuperMix for qRT-PCR逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、SYBR GreenERTM qPCR SuperMix Universal（美國Invitrogen公司）；大鼠血清MTL，GAS，VIP，TNF-α，IL-10測定用ELISA試劑盒（上海鈺森生物技術(shù)有限公司）；其他試劑均為分析純，購自上海國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.3 動物

SD大鼠，雌雄各半，體質(zhì)量（200±20） g，購自上海斯萊克實驗動物有限責(zé)任公司，許可證號SYXK（滬）2014-0008。

2 方法

2.1 藥物的制備

2.1.1 廣藿香提取液的制備 稱取廣藿香飲片，置于圓底燒瓶中，加入10倍量水浸泡0.5 h，圓底燒瓶上面連接揮發(fā)油提取器，采用“雙提法”提取，至揮發(fā)油不再增加，收集揮發(fā)油，將水提取液濾過、濃縮，揮發(fā)油用聚氧乙烯脫水山梨醇單油酸酯（吐溫-80）分散，加入水提取液中，充分混合，搖勻，得生藥0.648 g·mL-1提取液，加入等體積蒸餾水依次稀釋，得到廣藿香低、中、高質(zhì)量濃度的提取液0.162，0.324，0.648 g·mL-1，備用。

2.1.2 半固體營養(yǎng)米糊的制備 稱取羧甲基纖維素鈉10 g，溶于250 mL蒸餾水中，加入奶粉16 g、葡萄糖4 g、淀粉8 g、活性炭粉末4 g，攪拌均勻，制成約300 mL黑色半固體糊狀物（約1 g·mL-1），4 ℃冷藏備用。

2.2 大鼠濕阻中焦證造模方法[2-3]

取SD健康大鼠，雄雌各半，隨機(jī)分為正常組、模型組、廣藿香低、中、高劑量組。除正常組外，其余組的大鼠每日定時放入水深25 cm、水溫27～30 ℃的水桶中游泳15 min，游泳完畢，立即按照25 mL·kg-1體質(zhì)量，第1，3，5，7天灌胃豬油，第2，4，6天灌胃30%蜂蜜，造模大鼠置于每個裝有150 g墊料用600 mL水灑濕并用塑料薄膜覆蓋鼠盒中喂養(yǎng)，正常組在正常環(huán)境中喂養(yǎng)。從第8天開始，造模大鼠移至正常環(huán)境中喂養(yǎng)，給藥組每天給予低、中、高劑量廣藿香提取液（1.62，3.24，6.48 g·kg-1，相當(dāng)于人臨床等效劑量的2，4，8倍），正常組和模型組灌胃等容積蒸餾水，至12 d結(jié)束實驗。在整個實驗過程中，觀察記錄動物的精神狀態(tài)、活動、大便、進(jìn)食與飲水量及體質(zhì)量變化。

2.3 對濕阻中焦證大鼠胃腸運動的影響

取SD健康大鼠，隨機(jī)分組，每組8只，按照2.2項下方法造模，第12天給藥后禁食不禁水18 h，正常組和模型組灌胃等容積蒸餾水，給藥組給予低、中、高不同劑量的廣藿香提取液，給藥1 h后，灌胃2.1.2項下的半固體營養(yǎng)米糊，30 min后脫頸處死大鼠，剖開腹腔，結(jié)扎幽門及賁門，剪取胃，用濾紙拭干稱重，然后沿胃大彎剪開，洗凈胃內(nèi)容物，濾紙拭干后再次稱重，胃全重與胃凈重之差即為胃內(nèi)殘留物重，胃內(nèi)殘留物重與灌胃半固體米糊重的百分比為胃內(nèi)殘留率（%）。將大鼠的小腸不加牽引地放于平面上，測定幽門至回盲部的全長及幽門至炭末前端的距離，半固體米糊推進(jìn)的長度與小腸全長的百分比為小腸推進(jìn)率（%）。

2.4 廣藿香對濕阻中焦證大鼠胃液量、胃液酸度和胃蛋白酶的影響

2.4.1 樣本采集 取SD健康大鼠，隨機(jī)分組，每組8只，按照2.2項下方法造模，第12天給藥后禁食不禁水18 h，各組大鼠用25%烏來糖生理鹽水溶液按1.5 g·kg-1體質(zhì)量麻醉，固定在鼠板上，腹腔切開后，在胃幽門下穿線將幽門結(jié)扎，以收集胃液；同時經(jīng)十二指腸注射給藥1次，給藥組給予低、中、高不同劑量的廣藿香提取液，正常組和模型組給予等容積蒸餾水，然后縫合腹壁切口。幽門結(jié)扎后禁食禁水，5 h后打開腹腔，結(jié)扎賁門，摘取全胃，在胃大彎剪一個小口，傾出胃內(nèi)容物于刻度離心管中，記錄胃液量。endprint

2.4.2 胃液酸度測定 將收集的胃液于低速離心機(jī)4 000 r·min-1離心10 min。取胃液50 μL，加酚酞1滴，用0.01 mol·L-1的NaOH滴定，胃液變紅色，2 s內(nèi)不褪色為滴定終點，記錄NaOH的體積V，計算胃液的酸度，胃液酸度（mol·L-1）=V×0.01/0.05。

2.4.3 胃蛋白酶的測定[4] 移取胃液200 μL置于離心管中，精密稱定，將胃液用1.0 mol·L-1鹽酸溶液稀釋，按照《中國藥典》2015年版二部胃蛋白酶效價測定的方法，進(jìn)行測定，在275 nm的波長處測定吸光度，計算胃液每分鐘能催化水解血紅蛋白生成1 μmol酪氨酸的酶量，即蛋白酶活力的單位數(shù)。

2.5 廣藿香對濕阻中焦證大鼠胃腸組織形態(tài)、胃腸激素、細(xì)胞因子和水液代謝的影響

2.5.1 樣本采集 取SD健康大鼠，隨機(jī)分組，每組8只，按照2.2項下方法造模，第12天給藥后禁食不禁水18 h，各組大鼠用25%烏來糖生理鹽水溶液按1.5 g·kg-1體質(zhì)量麻醉，腹主動脈取血，血樣于室溫靜置1 h，以4 ℃，3 000 r·min-1離心10 min，取血清，置于-20 ℃冰箱保存，用于MTL，GAS，VIP，TNF-α和IL-10的檢測。采集大鼠胃腸組織（胃、十二指腸、空腸、回腸、結(jié)腸），用生理鹽水清洗后，浸泡在4%多聚甲醛溶液中固定，部分胃和結(jié)腸置于液氮中，用于病理組織觀察和測定AQP3，AQP4和AQP8 的表達(dá)。

2.5.2 對大鼠胃腸組織病理形態(tài)的影響 將胃和腸組織制片、染色后，在顯微鏡下觀察胃、十二指腸、空腸、回腸、結(jié)腸組織，觀察是否有壞死、糜爛和炎細(xì)胞浸潤等病變情況。

2.5.3 對濕阻中焦證大鼠胃腸激素和細(xì)胞因子的影響 按照試劑盒的操作要求，進(jìn)行MTL，GAS，VIP，TNF-α和IL-10的吸光度測定，計算各個指標(biāo)的濃度。

2.5.4 實時熒光定量PCR法檢測胃和結(jié)腸AQP3，AQP4 和AQP8 mRNA 的表達(dá)[5] 將胃和結(jié)腸組織勻漿，按照試劑盒說明提取RNA，確認(rèn)提取出的RNA 質(zhì)量良好后，根據(jù)逆轉(zhuǎn)錄試劑盒的說明，配置反應(yīng)體系，將RNA 逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。以ACTIN作為內(nèi)參基因，應(yīng)用Primer Premier 3.0 軟件分別設(shè)計AQP3，AQP4和AQP8的PCR引物，引物由英濰捷基（上海）貿(mào)易有限公司合成，引物序列見表1。PCR 反應(yīng)條件為95 ℃預(yù)變性30 s，95 ℃變性5 s，60 ℃退火延伸34 s，40個循環(huán)。讀取Ct值，計算實驗組基因表達(dá)與空白對照組相比變化的倍數(shù)，即相對表達(dá)2-ΔΔCt。

2.6 數(shù)據(jù)處理

實驗數(shù)據(jù)以±s表示，采用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件，多組間比較采用單因素方差分析，2組間比較采用t檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 大鼠的行為觀察

濕阻中焦證造模實驗4 d后，大鼠活動明顯減少，精神萎靡，嗜臥懶動，喜歡扎堆；大便均出現(xiàn)不同程度的變軟，糞便中伴有淡黃色黏稠物，顏色偏白，腹瀉，肛門周圍污穢，隨著造模時間加長，部分有脫肛；第8天后造模大鼠全部出現(xiàn)稀便，活動進(jìn)一步減少，倦縮少動，進(jìn)食及進(jìn)水量減少，少數(shù)大鼠幾乎不能堅持游泳15 min，體質(zhì)量較正常組減輕。第12天后模型組大鼠癥狀變化不大，給藥組大鼠情況明顯好轉(zhuǎn)，恢復(fù)正常大便，進(jìn)食及進(jìn)水量增加，體質(zhì)量與正常組沒有明顯差異。

3.2 廣藿香對濕阻中焦證大鼠胃腸運動的影響

與正常組比較，濕阻中焦證大鼠的胃內(nèi)殘留率顯著增加，小腸推進(jìn)率顯著降低（P<0.01），表明造模成功；與模型組比較，廣藿香中、高劑量組可以明顯降低胃內(nèi)殘留率，促進(jìn)胃排空，增加小腸推進(jìn)率（P<0.05），加快胃腸推進(jìn)運動，見表2。說明廣藿香可以改善由于內(nèi)外界環(huán)境的改變引起的大鼠胃腸運動緩慢的癥狀。

3.3 廣藿香對濕阻中焦證大鼠胃液量、胃液酸度和胃蛋白酶的影響

與正常組大鼠比較，濕阻中焦證造模大鼠分泌的胃液量減少（P<0.05），胃液酸度降低，胃蛋白酶活性明顯降低（P<0.05）。給藥后，不同劑量組的廣藿香可以增加胃液的分泌，提高胃酸的酸度和胃蛋白酶的活性，以中、高劑量組效果較好，見表3。

3.4 廣藿香對濕阻中焦證大鼠胃腸形態(tài)的影響

對胃和各個腸段組織病理觀察結(jié)果見圖1，正常組大鼠胃和各個腸段黏膜上皮結(jié)構(gòu)完整，黏膜內(nèi)的腺體排列緊密，厚度正常，固有腺體及黏膜層毛細(xì)血管無擴(kuò)張淤血；模型組大鼠的胃黏膜表面有輕微水腫，十二指腸黏膜表面有一定的變性壞死，空腸、回腸、結(jié)腸壁組織未見明顯充血、水腫、潰瘍及糜爛等組織病理性改變；各個給藥組大鼠的胃和各個腸段組織未見明顯病理性改變。結(jié)果表明造?？稍斐晌负褪改c組織一定程度的損傷，給藥后可以達(dá)到修復(fù)的作用。

3.5 廣藿香對濕阻中焦證大鼠胃腸激素和細(xì)胞因子的影響

與正常組比較，模型組大鼠的血清MTL和GAS含量明顯下降，VIP，TNF-α明顯升高（P<0.05），IL-10有升高的趨勢，但無統(tǒng)計學(xué)差異。與模型組比較，給藥不同劑量廣藿香后均可以提高或降低由于造模引起的大鼠血清各項指標(biāo)異常，使之趨于正常。其中，以中劑量廣藿香提高血清MTL效果較好，與正常組相比無顯著性差異；以高劑量廣藿香提高血清GAS效果較好，與模型組相比有顯著性差異（P<0.05）；高劑量組廣藿香可以顯著降低濕阻中焦證大鼠胃腸組織中的VIP，TNF-α含量（P<0.05）；不同劑量組廣藿香可以降低濕阻中焦證大鼠胃腸組織中的IL-10含量。所以廣藿香對胃腸功能的調(diào)節(jié)作用，包括了胃腸激素和細(xì)胞因子的參與，廣藿香可以調(diào)節(jié)濕阻中焦證大鼠胃腸激素及細(xì)胞因子水平，使之趨于正常，高劑量組的調(diào)節(jié)作用更強(qiáng)，見表4。

3.6 廣藿香對濕阻中焦證大鼠胃和結(jié)腸水通道蛋白的影響endprint

模型組大鼠胃和結(jié)腸組織的AQP3表達(dá)顯著升 高（P<0.01），給予不同劑量的廣藿香可以下調(diào)AQP3的表達(dá)，高劑量組下調(diào)作用明顯，與正常組無明顯差異；模型組大鼠胃組織的AQP4表達(dá)升高，但與正常組比較無顯著性差異，給藥后可以下調(diào)AQP4的表達(dá)，但各給藥組與模型組比較無顯著性差異；模型組大鼠結(jié)腸組織的AQP4表達(dá)顯著降低，與正常組比較有顯著性差異（P<0.01），給藥后可以上調(diào)AQP4的表達(dá)，中、高劑量組與正常組比較無顯著性差異，高劑量組與模型組比較有顯著性差異（P<0.01）；模型組大鼠胃和結(jié)腸組織的AQP8表達(dá)降低，模型組大鼠胃組織中AQP8表達(dá)與正常組比較無顯著性差異，模型組結(jié)腸組織中AQP8表達(dá)與正常組比較有顯著性差異（P<0.01），不同劑量的廣藿香可以上調(diào)AQP8的表達(dá)，與模型組比較，高劑量組上調(diào)作用顯著（P<0.05）。給藥組對AQP3，AQP4，AQP8表達(dá)的調(diào)節(jié)與劑量呈相關(guān)性，見圖2。研究結(jié)果提示廣藿香提取液可下調(diào)胃和結(jié)腸AQP3的表達(dá)，上調(diào)結(jié)腸AQP4和AQP8的表達(dá)，從而達(dá)到調(diào)節(jié)水液轉(zhuǎn)運，改善水液代謝紊亂引起的稀便癥狀。

4 討論

濕阻中焦證指濕邪阻滯脾胃，以全身困重倦怠、胸悶脘痞、腹脹納呆、口黏苔膩為主要表現(xiàn)的病癥，是臨床常見脾胃病[6]。病因可分為2個方面：外因為環(huán)境濕氣過盛，超過人體抵御能力，或正氣不足，衛(wèi)外不固，可導(dǎo)致濕從外入；或飲食不節(jié)、恣食肥甘與生冷寒涼等損傷脾胃，使運化失司，濕濁內(nèi)生；內(nèi) 因是先天不足，稟賦虛弱，或因機(jī)體正氣相對虛弱、受損，情志不遂等導(dǎo)致脾胃虛弱，而使水濕運化失司，滯留中焦所致[2，7-9]。目前制備大鼠濕阻中焦證模型的造模方法沒有得到一致公認(rèn)，但多篇文獻(xiàn)均一方面模擬外濕致病的特點[2-3，10-12]，在相當(dāng)于盛夏的高溫使動物涉水和置于潮濕的環(huán)境中飼養(yǎng)，以造成外濕致病的環(huán)境，再加上灌胃蜂蜜與豬油使之過食肥甘，并且迫使動物游泳加大運動量，消耗大量體力，損其正氣，損傷脾胃，阻礙運化，制造內(nèi)濕的方法，建造大鼠“外濕侵體+正氣耗損+過食肥甘”[2]型濕阻中焦證模型，研究結(jié)果均表明造模成功。本文亦均結(jié)合發(fā)病的原因，采用相似的造模方法，研究廣藿香對濕阻中焦證大鼠模型的影響。結(jié)果表明，大鼠出現(xiàn)與濕阻中焦證臨床表現(xiàn)相似的癥狀，用廣藿香治療，可使?jié)褡柚薪棺C大鼠的有關(guān)癥狀與體征得到緩解。

現(xiàn)代研究表明，濕阻中焦證與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的胃腸功能、機(jī)體水液代謝、病原微生物、免疫功能、血液系統(tǒng)、能量代謝等方面有關(guān)，尤其與胃腸功能的關(guān)系更為密切[6]。本研究對與胃腸道功能（消化、吸收、排泄）相關(guān)的各項指標(biāo)進(jìn)行測定，結(jié)果表明，對于濕阻中焦證大鼠的胃腸運動緩慢、胃液分泌減少和胃蛋白酶活性降低的癥狀，廣藿香中、高劑量可以明顯降低胃內(nèi)殘留率，促進(jìn)胃排空，增加小腸推進(jìn)率（P<0.05），加快胃腸推進(jìn)運動，增加胃液的分泌和酸度，提高胃蛋白酶的活性；病理組織學(xué)結(jié)果表明，濕阻中焦證造?？蓪Υ笫蟮奈负褪改c黏膜產(chǎn)生一定的損傷，給藥后可以得到改善；廣藿香對濕阻中焦證造模大鼠胃腸道功能的影響可能與升高血清MTL和GAS含量，降低 VIP，TNF-α，IL-10 含量有關(guān)，中、高劑量廣藿香的調(diào)節(jié)效果較好；廣藿香可下調(diào)胃和結(jié)腸AQP3的表達(dá)，上調(diào)結(jié)腸AQP4和AQP8的表達(dá)，調(diào)節(jié)胃腸道的水液代謝。該研究結(jié)果對于闡明臨床采用芳香化濕法疏通氣機(jī)，化濕除滿，健脾寬中，調(diào)整恢復(fù)脾胃、腸功能，使?jié)裥暗没饔玫臋C(jī)制奠定了基礎(chǔ)。

胃腸激素的含量反映胃腸功能的狀態(tài)，它們的正常分泌是保證胃腸道消化、吸收和排泄所不可缺少的[13]。GAS和MTL可以使胃排空和腸蠕動加速，興奮胃腸運動機(jī)能[14]。實驗結(jié)果表明，模型組MTL和GAS的含量均顯著下降（P<0.01），說明胃腸道處于功能障礙狀態(tài)，廣藿香不同劑量組均能使?jié)褡柚薪棺C大鼠GAS和MTL含量升高；VIP對胃酸分泌有抑制性作用[15]，炎癥反應(yīng)可刺激VIP釋放，以阻止炎癥反應(yīng)的過度放大，結(jié)果顯示，模型組VIP含量顯著升高（P<0.01），說明大鼠體內(nèi)可能有一定的炎癥反應(yīng)，病理組織觀察結(jié)果也印證此觀點，廣藿香不同劑量組大鼠的VIP含量均降低。GAS，MTL和VIP分泌量的變化與廣藿香加快胃腸推進(jìn)運動，增加胃液的分泌和酸度，提高胃蛋白酶的活性密切相關(guān)，表明廣藿香可通過調(diào)節(jié)胃腸激素使胃腸動力和胃液分泌等功能趨于正常。

濕阻中焦可引起胃腸道出現(xiàn)一定程度的炎癥反應(yīng)。促炎性因子TNF-α（由Th1細(xì)胞產(chǎn)生）有介導(dǎo)腸黏膜損傷的作用，含量升高表明炎癥程度增強(qiáng)，其含量與祛病過程有關(guān)[16]。IL-10是由Th2細(xì)胞分泌的抗炎性細(xì)胞因子，能夠抑制促炎性細(xì)胞因子的活性，2類細(xì)胞因子的平衡維持著胃腸道環(huán)境的平衡[17]。實驗結(jié)果表明，模型組大鼠的血清炎性細(xì)胞因子TNF-α含量比正常組升高（P<0.05），Th2抗炎性因子IL-10含量也升高，但無統(tǒng)計學(xué)差異，Th1/Th2比例發(fā)生變化，說明模型大鼠腸道環(huán)境已改變；給予不同劑量廣藿香后，大鼠的TNF-α和IL-10水平均有不同程度降低，說明廣藿香可通過調(diào)節(jié)Th1/Th2比例，緩解濕阻中焦大鼠胃腸道出現(xiàn)的炎癥反應(yīng)，減少炎性因子對胃腸道黏膜的損害。

水液代謝影響著胃腸道的功能，近代研究表明，水通道蛋白AQPs與水代謝紊亂所致的臨床癥狀密切相關(guān)[18]。AQPs在消化系統(tǒng)有廣泛的表達(dá)，AQP3主要分布于從口腔到胃以及從結(jié)腸到肛門段的消化道黏膜上皮，AQP4在胃、小腸和結(jié)腸都有表達(dá)[5，19]，AQP8在胃、肝臟、十二指腸和結(jié)腸段都有表達(dá)[20]。AQPs參與胃腸道對水分的吸收過程，高表達(dá)可引起胃腸黏膜對水的吸收增加而導(dǎo)致便秘，低表達(dá)可引起胃腸黏膜對水吸收減少而導(dǎo)致腹瀉或便溏[21-23]。本研究結(jié)果表明，AQP3在濕阻中焦證模型組大鼠胃和結(jié)腸組織中表達(dá)增加，廣藿香可下調(diào)AQP3的表達(dá)水平，使之趨于正常；模型組大鼠的胃黏膜組織AQP4和AQP8的表達(dá)與正常組比較無顯著性差異，但二者在結(jié)腸組織中的表達(dá)顯著下降，給藥后可上調(diào)結(jié)腸AQP4和AQP8的表達(dá)。可見，廣藿香對于不同水通道蛋白的調(diào)節(jié)作用不同，上調(diào)AQP4和AQP8的表達(dá)水平達(dá)到調(diào)節(jié)胃腸道水液代謝的作用，可緩解腹瀉、黏液便等癥狀；但廣藿香下調(diào)濕阻中焦大鼠胃腸道AQP3的表達(dá)水平是否與增加胃腸液分泌、助消化有關(guān)，需要進(jìn)一步驗證。endprint

[參考文獻(xiàn)]

[1] 中國藥典. 一部[S]. 2015：45.

[2] 孔祥華.黃芩正氣膠囊對濕阻中焦證大鼠模型胃腸功能的影響[D]. 廣州：廣州中醫(yī)藥大學(xué)， 2005.

[3] 楊璋斌，孫保國，項婷，等. 脾虛濕困大鼠有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運肽2a1、2b1和4a1動態(tài)表達(dá)的探討：中醫(yī)濕濁轉(zhuǎn)運機(jī)理研究[J]. 時珍國醫(yī)國藥， 2014， 25（8）：2033.

[4] 中國藥典. 二部[S]. 2015：739.

[5] 趙琴， 房蕓， 潘凌云， 等. 基于致炎毒性，胃和十二指腸AQP3，AQP4 表達(dá)的藤黃炮制減毒機(jī)制研究[J]. 中國中藥雜志， 2016， 41（9）：1627.

[6] 孔祥華，汪霞，黃海. 黃芩正氣膠囊對濕阻中焦證大鼠模型胃腸功能的影響[J]. 中藥新藥與臨床藥理，2006， 17（5）：338.

[7] 李連成，路志正. 濕阻的流行病學(xué)調(diào)查[J]. 中醫(yī)雜志，1992， 33（6）：44.

[8] 李錫濤，路喜素. 路志正重視濕阻學(xué)術(shù)思想初探[J]. 遼寧中醫(yī)雜志，1993， 20（10）：1.

[9] 李克華，鄒寶生，胡玲. 濕阻中焦的辨證施治[J]. 陜西中醫(yī)，2001， 22（10）：640.

[10] 趙燕. 濕阻中焦證本質(zhì)探討——濕阻中焦證大鼠紅細(xì)胞膜Na+-K+ATPase 活性的實驗研究[D]. 成都：成都中醫(yī)藥大學(xué)， 2001.

[11] 郭金龍，顏正華. 濕阻證病理造型的實驗研究[J].中醫(yī)雜志，1988（8）：59.

[12] 邱賽紅，陳立峰，柳克鈴，等.芳香化濕藥開胃作用機(jī)理的實驗研究Ⅱ.對濕困動物模型的影響[J].中藥藥理與臨床，1997， 13（2）：1.

[13] 田德峰，王彥輝，任慧霞. 胃腸激素的研究概況[J].中國生化藥物雜志， 2000， 21（6）：316.

[14] 張丹，祝倫倫，徐敏，等.葛根煨制前后的止瀉作用及機(jī)理[J].中成藥， 2014， 36（10）：2140.

[15] 陸忠凱，陳衛(wèi)昌.血管活性腸肽在調(diào)節(jié)腸黏膜屏障功能中的作用[J].國際消化病雜志， 2008， 28（3）：226.

[16] Braegger C P， Nicholls S， Murch S H， et al. Tumor necrosis factor alpha in stool as a marker of intestinal inflammation[J]. Lancet， 1992， 339（8785）：89.

[17] 張道杰，段朝霞.IL-10的研究進(jìn)展[J].國外醫(yī)學(xué)·免疫學(xué)分冊，2003， 26（1）：39.

[18] Loreto C， Reggio E. Aquaporin and vascular diseases[J]. Curr Neuropharmacol，2010， 8（2）：105.

[19] Matsuzaki T， Tajika Y， Ablimit A， et al. Aquaporins in the digestive system[J]. Med Electron Microsc， 2004， 37（2）：71.

[20] Calamita G，Mazzone A，Bizzoca A，et al. Expression and immunolocalization of the aquaporin-8 water channel in rat gastro intestinal tract[J]. Eur J Cell Biol，2001，80（11）：711.

[21] 汪泳，張方信，令曉玲，等.大鼠結(jié)腸中水通道蛋白4的表達(dá)與分布[J].第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2004，25（2）：142.

[22] Wang K S， Ma T， Filiz F， et al. Colon water transport in transgenic mice lacking aquaporin-4 water channels[J]. Am J Physiolgastr L， 2000， 279（2）： G463.

[23] Ramirez-Lorca R， Vizuete M L， Venero J L， et al. Localization of Aquaporin-3 mRNA and protein along the gastrointestinal tract of Wistar rats[J]. Pflug Arch Eur J Phy， 1999， 438（1）： 94.

[責(zé)任編輯 張寧寧]endprint