楊文平+王愛民+於葉兵+劉飛+呂林蘭+呂富

摘要：分離、克隆梭魚脂肪酸合成酶（fatty acid synthase，簡稱FAS）基因的部分cDNA片段（GenBank登錄號(hào)為KJ848474），共920 bp，編碼303個(gè)氨基酸，序列分析表明梭魚FAS基因與其他物種的同源性為74%～95%，其中與軍曹魚、斑馬擬麗魚相似性達(dá)95%。FAS基因mRNA在梭魚魚皮、肌肉、肝臟、心臟、脾臟、腎臟、胃、腸、腹腔脂肪、腦和鰓組織中表達(dá)豐度差異顯著（P<0.05），腦中含量最高，其次是肝臟和腹腔脂肪組織，肌肉中表達(dá)量最低，其余7種組織中的表達(dá)量均顯著低于腦和肝臟（P<0.05）。此外，還研究了飼料脂肪水平對梭魚FAS活性和mRNA表達(dá)的影響，平均質(zhì)量為（9.5±0.3）g的梭魚幼魚投喂6種不同脂肪含量的等氮等能飼料（脂肪水平分別為2.04%、4.83%、747%、979%、12.01%、14.59%），飼養(yǎng)60 d，試驗(yàn)結(jié)束后測定各組梭魚肝臟中FAS的生物活性及肝臟、腹腔脂肪、肌肉中FAS mRNA的表達(dá)豐度。結(jié)果表明，隨著飼料脂肪水平的升高，肝臟中FAS活性呈降低趨勢，14.59%組的活性顯著低于2.04%、4.85%組（P<0.05）；肝臟中FAS的mRNA表達(dá)量顯著下降（P<0.05）；肌肉和腹腔脂肪中FAS的mRNA表達(dá)量呈下降趨勢，但各組之間差異不顯著（P>0.05）。

關(guān)鍵詞：梭魚；脂肪水平；脂肪酸合成酶；克隆；基因表達(dá)分析活性；同源性；系統(tǒng)進(jìn)化樹

中圖分類號(hào)： Q78；Q959.478文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號(hào)：1002-1302（2017）23-0049-06

屬鯔形目鯔科梭屬魚類，是溫帶淺海區(qū)重要的經(jīng)濟(jì)魚類之一，具有廣鹽性、廣溫性、適應(yīng)性廣、病害少、味道鮮美等諸多優(yōu)點(diǎn)，目前是江蘇沿海正在開發(fā)的海淡水養(yǎng)殖新興品種之一。在目前的養(yǎng)殖中，較易出現(xiàn)腹部肥大的癥狀：解剖后，可見腸道表面脂肪覆蓋明顯，肝臟肥大；此種體形與梭魚本該具有的長流線形身體不符，不受消費(fèi)者歡迎；有關(guān)梭魚產(chǎn)生上述癥狀的原因，目前并無研究。魚類內(nèi)臟尤其是肝臟脂肪過度聚積，產(chǎn)生脂肪肝或腹部肥大，這些是由于脂代謝紊亂造成脂肪在內(nèi)臟內(nèi)的沉積而出現(xiàn)的病理、生理學(xué)改變，它的發(fā)生、發(fā)展跟脂代謝關(guān)鍵因子有重要聯(lián)系，脂代謝關(guān)鍵因子在這一過程中到底如何作用？是否可以通過營養(yǎng)調(diào)控的角度減少或避免此類癥狀的產(chǎn)生？脂代謝相關(guān)的基因眾多，脂肪酸合成酶（fatty acid synthase，簡稱FAS）是脂代謝過程中的關(guān)鍵酶之一。動(dòng)物體內(nèi)脂肪的沉積量是脂肪的合成和降解過程動(dòng)態(tài)平衡的結(jié)果，其合成和分解過程都是通過一系列酶催化完成的。動(dòng)物體脂沉積所需要的脂肪酸大多來自脂肪酸的全程合成，即由FAS催化乙酰輔酶A和丙二酸單酰輔酶A合成脂肪酸，F(xiàn)AS活性的高低對控制動(dòng)物體脂沉積具有重要意義[1]。因此，本研究克隆了梭魚FAS基因的cDNA部分序列，并與其他物種進(jìn)行同源性比較、系統(tǒng)發(fā)生進(jìn)化樹分析組織特異性表達(dá)，為進(jìn)一步研究梭魚的脂肪代謝機(jī)制奠定分子生物學(xué)基礎(chǔ)。此外，梭魚的營養(yǎng)需求研究基礎(chǔ)薄弱，配合飼料的生產(chǎn)主要借鑒其他雜食性魚類的營養(yǎng)需要，不合理的營養(yǎng)水平也可能是產(chǎn)生腹部肥大的原因。作為水產(chǎn)動(dòng)物重要的營養(yǎng)素之一，脂肪是魚類重要的能源物質(zhì)，不同的魚對脂肪的需求不同，飼料中不合理的脂肪水平會(huì)導(dǎo)致魚體腹部累積大量的脂肪[2-3]。因此，本研究針對飼料脂肪水平對FAS基因表達(dá)的影響進(jìn)行初探，從營養(yǎng)和基因表達(dá)調(diào)控的角度了解梭魚的脂質(zhì)代謝，為梭魚的健康養(yǎng)殖提供理論基礎(chǔ)。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)設(shè)計(jì)

基因克隆和組織特異性表達(dá)用魚由江蘇省響水縣一個(gè)養(yǎng)殖場提供，魚體質(zhì)量約300 g，運(yùn)回后飼養(yǎng)于體積約 3 000 L 的水泥池（3 m×1 m×1 m）中，用普通商品飼料喂養(yǎng)，適應(yīng)2周后即挑選10尾健康的梭魚，用MS-222麻醉，于無菌操作下解剖，取魚皮、肌肉、肝臟、心臟、脾臟、腎臟、胃、腸、腹腔脂肪、腦和鰓11種組織，用液氮速凍后于-80 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

脂肪水平試驗(yàn)用魚由江蘇省射陽縣朱平水產(chǎn)苗種有限公司提供，運(yùn)回后用5%食鹽水消毒，然后放入水泥池（3 m×1 m×1 m）中馴養(yǎng)10 d，挑選540尾健康無傷、規(guī)格均一的魚種[均質(zhì)量（9.5±0.3）g]，隨機(jī)分為6組，飼養(yǎng)于循環(huán)流水養(yǎng)殖桶中（規(guī)格：直徑80 cm、高度70 cm、體積約300 L），每組設(shè)置3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)30尾魚，分別投喂6種不同的飼料。6種飼料配制如下：以魚油為脂肪源，添加水平分別為0、25%、5.0%、7.5%、10.0%、12.5%，進(jìn)口魚粉、豆粕等為主要蛋白源，制成脂肪含量分別為2.04%、4.83%、7.47%、979%、12.01%、14.59%，蛋白質(zhì)含量為30.32%的6組等氮等能飼料，配方見已發(fā)表文獻(xiàn)[4]。正式飼養(yǎng)期間，投飼率為魚體總質(zhì)量的3%～5%，每天分3次投喂，投喂時(shí)間為 06：30、12：30、18：30，試驗(yàn)期間除投喂外全天充氧，水溫控制在（24±2） ℃，養(yǎng)殖60 d。試驗(yàn)結(jié)束后饑餓24 h，用MS-222對魚進(jìn)行麻醉，每個(gè)重復(fù)取3尾魚，無菌操作下取肝臟、肌肉、腹腔脂肪用液氮速凍，然后放入-80 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2試劑及儀器

Trizol Reagent（Promega）、反轉(zhuǎn)錄酶M-MLV、RnaseH、TdT酶、Taq酶、連接酶、SYBR ExScriptTMRT-PCR Kit試劑盒均購自TaKaRa（大連）；Taq酶、膠回收試劑盒、pUCm-T載體購自上海申能博彩生物科技有限公司；大腸桿菌（Escherichia coli）DH5α由無錫淡水漁業(yè)中心農(nóng)業(yè)部淡水魚類遺傳育種和養(yǎng)殖生物學(xué)重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室保存；定量PCR采用進(jìn)口Axygen PCR管。魚FAS酶聯(lián)免疫分析試劑盒購于上海江萊生物科技有限公司，其他常規(guī)化學(xué)藥品均為分析純。

熒光定量PCR儀（CFX96TM Real-Time PCR Detection Systerm，美國伯樂Bio-Rad公司）；普通PCR儀（T100TM Thermal Cycler，美國伯樂Bio-Rad公司）；冷凍型臺(tái)式大容量高速離心機(jī)（Centrifuge 5804R，德國艾本德Eppendorf公司）；核酸蛋白測定儀（Biophotometer plus，德國艾本德Eppendorf公司）；超低溫冰箱（Forma 900 series，美國熱電Thermo公司）；多功能酶標(biāo)儀（Infinite M200，瑞士帝肯Tecan集團(tuán)公司）。endprint

1.3方法

1.3.1肝臟組織FAS活性測定稱取適量的組織樣品，按 1 ∶9 的質(zhì)量體積比加入0.65%生理鹽水制成10%勻漿液，3 000 r/min 離心15 min，取上清液進(jìn)行測定，具體方法按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3.2引物設(shè)計(jì)與合成通過同源比對設(shè)計(jì)兼并引物，F(xiàn)AS-F和FAS-R擴(kuò)增FAS中間片段。根據(jù)已經(jīng)分離出的梭魚FAS cDNA部分片段（GenBank登錄號(hào)為KJ848474），使用Codehop原理設(shè)計(jì)FAS熒光定量引物F1和R1，根據(jù)梭魚 β-actin的部分序列（GenBank登錄號(hào)為EF638008.1）設(shè)計(jì)梭魚β-actin熒光定量引物F2和R2，引物序列見表1，所有引物由上海捷瑞生物工程有限公司合成，擴(kuò)增的片段為80～120 bp。

（2）cDNA第1條鏈的合成。按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，反應(yīng)條件為：42 ℃ 40 min，90 ℃ 2 min；4 ℃下保溫至關(guān)機(jī)，所得的模板（cDNA溶液）于-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

（3）FAS基因中間片段的獲得。使用兼并引物FAS-F/FAS-R擴(kuò)增FAS中間片段，PCR反應(yīng)體系見表2，反應(yīng)條件為：94 ℃ 預(yù)變性3 min；94 ℃ 1 min，58 ℃ 1 min，72 ℃ 1 min，30個(gè)循環(huán)；最后72 ℃ 10 min，-20 ℃保存產(chǎn)物。

2結(jié)果與分析

2.1梭魚FAS基因的克隆與序列分析

使用梭魚肝臟cDNA為模板，擴(kuò)增梭魚FAS cDNA部分片段，部分序列和氨基酸翻譯結(jié)果見圖1，序列長度為 920 bp，編碼303個(gè)氨基酸，該序列已經(jīng)登錄GenBank，登錄號(hào)為KJ848474。

為確定FAS的進(jìn)化關(guān)系，從基因庫中收集了軍曹魚（Rachycentron canadum，ACZ55138.1）、斑馬擬麗魚（Maylandia zebra，XP 004571519.1）、尼羅非魚（Oreochromis niloticus，XP 003454104.1）、鳉魚（Oryzias latipes，XP 004080750.1）、銀鯽（Carassius gibelio，AHA42647.1）、團(tuán)頭魴（Megalobrama amblycephala，AHK05976.1）、雞（Gallus gallus，NP99048.6）、老鼠（Rattus norvegicus，AAA41145.1）、人（Homo sapiens，AAH63242.1）、恒河猴（Macaca mulatta，XP 001113076.1）等FAS氨基酸序列。用ClustalW 1.8把梭魚FAS氨基酸序列同它們進(jìn)行同源性比較，同時(shí)使用上述比對結(jié)果，采用Neighbor-Joining方法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹（圖2），上標(biāo)數(shù)據(jù)為1 000次自展值Bootstrap檢測的支持率。序列分析顯示，梭魚FAS基因與其他物種的同源性為74%～95%，與硬骨魚類的FAS序列相似性最高，其中與軍曹魚、斑馬擬麗魚相似性達(dá)到95%。此外，梭魚FAS基因與其他物種的FAS基因同源性也較高，與雞、老鼠的同源性為80%、77%，與人、恒河猴的同源性為74%。以上結(jié)果顯示，在氨基酸水平上，本試驗(yàn)所克隆到的 FAS 基因與其他物種具有高度的相似性，

判定是梭魚的FAS基因，且FAS基因在進(jìn)化過程中較為保守。

系統(tǒng)發(fā)育樹表明，親緣關(guān)系近的物種先聚在一起，如梭魚、軍曹魚以及斑馬魚等硬骨魚類形成聚類，然后才和親緣性較遠(yuǎn)的人、雞、老鼠、恒河猴形成聚類。說明親緣性近的物種的FAS基因的同源性也高。

2.2梭魚FAS基因mRNA組織特異性表達(dá)

梭魚11種組織中FAS mRNA的表達(dá)豐度見圖3。FAS mRNA在11種組織中均有表達(dá)，不同組織中的表達(dá)量部分之間差異顯著（P<0.05），從高到低依次為腦、肝臟、腹腔腸系膜脂肪、腎、鰓、皮膚、胃、脾、心、腸、肌肉。在肌肉中表達(dá)量最低，高表達(dá)在腦、肝臟和腹腔腸系膜脂肪組織中，分別為肌肉中表達(dá)量的270.08、145.51、101.30倍，其余各組織中表達(dá)量均顯著低于這3種組織（P<0.05）。FAS mRNA在腎、鰓、皮膚、胃和脾臟5種組織中有中等程度的表達(dá)，前4種組織中的表達(dá)量均顯著高于脾臟（P<0.05）；在心臟和腸中表達(dá)量較低，但顯著高于肌肉（P<0.05）。

2.3飼料脂肪水平對梭魚肝臟中FAS活性的影響

飼料脂肪水平對梭魚肝臟中FAS活性的影響見圖4。隨脂肪水平的升高，肝臟中FAS活性呈下降趨勢，脂肪水平為204%、4.83%、7.47%、9.79%、12.01%組之間差異不顯著（P>0.05），14.59%組顯著低于2.04%、4.83%組（P<0.05）。

2.4飼料脂肪水平對梭魚FAS mRNA表達(dá)水平的影響

梭魚肝臟、腹腔脂肪、肌肉組織中FAS mRNA的相對表達(dá)量見圖5至圖7。隨著飼料脂肪水平的升高，肝臟中FAS mRNA的表達(dá)豐度逐漸下降， 4.83%、 7.47%、9.79%這3組

之間差異不顯著，12.01%、14.59%這2組之間差異不顯著，但均顯著低于2.04%、4.83%組。腹腔脂肪和肌肉中FAS mRNA的表達(dá)豐度隨脂肪水平的升高呈下降趨勢，但各組之間差異均不顯著（P>0.05）。

3結(jié)論與討論

FAS是脂肪合成過程中的一個(gè)關(guān)鍵酶，催化乙酰輔酶A和丙二酸單酰輔酶A合成脂肪酸，對于控制動(dòng)物體脂的沉積具有重要意義，開展FAS基因的克隆及表達(dá)分析，有助于從分子學(xué)的角度探索脂肪代謝和合成的規(guī)律。魚類中有關(guān)FAS基因的研究相對較少，主要有軍曹魚、斑馬擬麗魚、羅非魚、團(tuán)頭魴等，因此魚類FAS基因的結(jié)構(gòu)、功能和表達(dá)信息還有待于進(jìn)行大量的研究。本研究從梭魚中克隆了FAS cDNA的部分序列（GenBank登錄號(hào)為KJ848474），長度為920 bp，編碼303個(gè)氨基酸。通過系統(tǒng)進(jìn)化樹分析可知，F(xiàn)AS基因具有較高的保守性，梭魚和其他物種相似性較高，其中和魚類的相似性最高。endprint

有關(guān)FAS mRNA的組織特異性表達(dá)，已有研究者在不同的生物體內(nèi)作了研究，但研究結(jié)果各不相同。在番鴨的研究中發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)AS mRNA在肝臟和腹脂中表達(dá)量最高，在脾臟、肺臟和下丘腦中表達(dá)量次之，在心臟、腎臟、肌胃、腺胃、胸肌、腿肌、十二指腸中表達(dá)量很少或幾乎不表達(dá)[6]。但在豬體內(nèi)，F(xiàn)AS mRNA高表達(dá)在脂肪組織、肝臟、小腦和胃中[7]。匙吻鱘肝臟中FAS mRNA的表達(dá)量最高，其次是腹腔脂肪，肌肉、腸道、心臟、鰓、鰭條、眼睛、胃和吻這8種組織中只有少量的表達(dá)[8]。而鳙魚咽上組織中FAS mRNA表達(dá)量最高，其次是腸道組織，在肝臟、肌肉、心臟、鰓、鰭和眼中的表達(dá)水平顯著低于咽上器官[8]。覃川杰在瓦氏黃顙魚的研究中指出，F(xiàn)AS mRNA主要在腸道、肝臟、腹腔脂肪、肌肉和腦組織中表達(dá)，腸道中最高，肝臟中次之，顯著高于后幾種組織[9]。本研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)AS mRNA在梭魚腦、肝臟和腹腔腸系膜脂肪組織中有高表達(dá)，在腎臟、鰓、皮膚、胃、脾臟中有中等程度的表達(dá)，心臟、腸和肌肉組織中表達(dá)量較低。以上結(jié)果表明，F(xiàn)AS mRNA的組織特異性表達(dá)在不同物種中既有一定的相似性（高表達(dá)一般在肝臟、腹腔脂肪組織），又有一定的差異性。不同物種不同組織合成脂肪的能力有所不同，豬主要在脂肪組織中合成脂肪，禽類和魚類主要通過肝臟合成脂肪[10-12]?；诓煌瑫r(shí)空條件和不同的發(fā)育階段，同一組織細(xì)胞所處的狀態(tài)各不相同。Kusakabe等指出，F(xiàn)AS較高表達(dá)出現(xiàn)在脂質(zhì)代謝旺盛的細(xì)胞（如脂肪細(xì)胞、肝細(xì)胞、皮脂腺等）、處于增殖狀態(tài)的細(xì)胞（如胎兒消化呼吸系統(tǒng)增殖上皮、胃、十二指腸上皮細(xì)胞）以及對激素敏感的細(xì)胞（如垂體前葉、乳腺、前列腺、子宮內(nèi)膜等）中[13]。這些可能是以上不同物種FAS mRNA組織表達(dá)差異性的原因。Semenkovich指出，機(jī)體組織中FAS mRNA表達(dá)水平的升高會(huì)增加甘油三酯在組織內(nèi)的沉積而導(dǎo)致肥胖[14]。夏曉杰等的研究也表明，齊口裂腹魚肌間脂肪含量與FAS mRNA表達(dá)水平呈一定的正相關(guān)關(guān)系[15]。而FAS mRNA在不同組織中的差異性表達(dá)是否會(huì)導(dǎo)致不同組織中脂肪的蓄積程度不同？目前該方面的研究已在肝臟和肌肉中有少量結(jié)果，即肝臟是魚類合成脂肪的主要場所及脂肪蓄積的調(diào)節(jié)性儲(chǔ)脂器官[16-17]。在瓦氏黃顙魚[9]、吉富羅非魚[18]、齊口裂腹魚[15]中的研究均表明，肝臟中FAS基因的表達(dá)水平顯著高于肌肉中，這可能是導(dǎo)致魚類肝臟和肌肉脂肪蓄積差異的主要原因。研究魚類脂代謝相關(guān)基因的組織差異性表達(dá)，可以從分子生物學(xué)的角度調(diào)控魚體脂肪的沉積，為提高魚體健康和魚肉品質(zhì)提供理論依據(jù)。

動(dòng)物體內(nèi)FAS活性的高低，受日糧營養(yǎng)素的影響，其中日糧中脂肪含量的高低及脂肪酸種類對FAS的活性起著重要的決定作用。有研究表明，飼料中脂肪水平的升高，會(huì)抑制魚類FAS的活性[19-20]。本研究發(fā)現(xiàn)，隨著脂肪水平的升高，肝臟中FAS活性逐漸降低，進(jìn)一步證實(shí)了高脂對FAS活性的抑制作用，中華絨螯蟹和白甲魚的研究也得到了相同的結(jié)論[21-22]。Weiss等指出，當(dāng)飼料提供的外源性脂肪酸充足時(shí)，不需要合成內(nèi)源性脂肪酸，因此FAS活性下降[23]。而Clarke等研究發(fā)現(xiàn)，日糧中脂肪對FAS活性起抑制作用，主要是脂肪酸抑制FAS基因的表達(dá)，這種抑制發(fā)生在轉(zhuǎn)錄水平，導(dǎo)致脂肪的合成減少，這種抑制能力和脂肪酸的數(shù)量、種類有關(guān)[24-25]。本研究中所采用的魚油含有大量n-6和n-3系列不飽和脂肪酸，是FAS表達(dá)的強(qiáng)抑制劑，因此高脂水平時(shí)FAS活性顯著下降。

FAS基因的表達(dá)受激素、攝食營養(yǎng)成分等的影響[14]。大鼠在飼喂高碳水化合物飼糧時(shí)，肝臟中FAS mRNA的表達(dá)量約為絕食時(shí)的100倍；喂高脂（玉米油和牛脂1 ∶1混合）日糧時(shí)FAS mRNA的表達(dá)量比絕食時(shí)有所增加，但只有喂高碳水化合物時(shí)表達(dá)水平的4%[26]。大量研究表明，日糧中的脂肪酸對FAS基因的表達(dá)有抑制作用。抑制作用的強(qiáng)弱和脂肪酸的數(shù)量、碳鏈長度、雙鍵位置、雙鍵數(shù)量有關(guān)。第1個(gè)雙鍵的位置為n-9時(shí)（位于碳鏈甲基端第9、第10個(gè)碳原子之間），對FAS表達(dá)的抑制作用和飽和脂肪酸類似，基本無影響；第1個(gè)雙鍵位于n-3時(shí)（在碳鏈甲基端第3、第4個(gè)碳原子之間），抑制作用比位于n-6強(qiáng)（在碳鏈甲基端第6、第7個(gè)碳原子之間）[24，27-28]。Ikeda等指出，二十二碳六烯酸（docosahexa enoic acid，簡稱DHA）、二十五碳五烯酸（eicosapenta enoic acid，簡稱EPA）和亞麻酸相比，顯著降低了肝臟中FAS活性及肝臟和血漿中甘油三酯的濃度，DHA和EPA相比，DHA更有效，這說明同一系列的脂肪酸，雙鍵數(shù)量多的對FAS表達(dá)的抑制作用更強(qiáng)[29]。本研究發(fā)現(xiàn)，脂肪水平的升高，顯著降低了梭魚FAS mRNA的表達(dá)量，脂肪水平483%、7.47%、9.79%組表達(dá)量顯著低于2.04%、4.83%組，12.01% 、14.59%組表達(dá)量顯著低于其余各組，這可能是由于高脂肪水平的攝入，準(zhǔn)確來講是大量的n-3和n-6系列多個(gè)飽和脂肪酸（polyunsa thrated fatty acid，簡稱PUFA）的攝入，使FAS基因的表達(dá)受到了抑制。這和馬晶晶報(bào)道的飼料中含有較高含量的n-3高度不飽和脂肪酸（highly unsaturated fatty acid，簡稱HUFA，大于0.88%）時(shí)，黑鯛幼魚FAS基因表達(dá)量顯著下降的結(jié)論[30]是一致的。Clarke等在大鼠的研究中也指出，含有豐富PUFA的魚油和紅花油可以使肝臟中FAS mRNA的表達(dá)量降低75%～90%[26]。本研究中隨著脂肪水平的升高，腹腔脂肪和肌肉組織中FAS mRNA的表達(dá)量僅表現(xiàn)出下降趨勢，各組之間差異并不顯著；這可能和不同組織基因表達(dá)的特異性有關(guān)，Clarke指出，脂肪酸對FAS基因表達(dá)的抑制具有組織專一性，肝臟中FAS基因的轉(zhuǎn)錄量決定了FAS mRNA的水平，但脂肪組織中FAS mRNA 的水平除了取決于基因的轉(zhuǎn)錄量外，還和影響FAS mRNA穩(wěn)定性的因素有關(guān)[23]。目前，這方面的研究較少，尚需更深入的研究。endprint

本研究克隆了梭魚的FAS基因部分cDNA序列，通過系統(tǒng)進(jìn)化樹可知，F(xiàn)AS基因具有較高的保守性，梭魚和其他物種相似性較高；FAS基因在梭魚不同組織中的表達(dá)豐度差異顯著，在腦、肝臟和腹腔脂肪組織中高表達(dá)，在肌肉中表達(dá)量最低；飼料脂肪水平能夠抑制梭魚肝臟中的FAS活性和 mRNA的表達(dá)豐度，水平高時(shí)抑制作用更顯著。

參考文獻(xiàn)：

[1]Chirala S S，Wakil S J. Structure and function of animal fatty acid synthase[J]. Lipids，2004，39（11）：1045-1053.

[2]Tocher D R. Metabolism and functions of lipids and fatty acids in teleost fish[J]. Reviews in Fisheries Science，2003，11（2）：107-184.

[3]程漢良，夏德全，吳婷婷. 魚類脂類代謝調(diào)控與脂肪肝[J]. 動(dòng)物營養(yǎng)學(xué)報(bào)，2006，18（4）：294-298.

[4]Yang W P，Wang A，Gao F，et al. Dietary lipid concentrations influence growth and chemical and fatty acid compositions of juvenile redlip mullet，Liza haematocheila[J]. Aquaculture International，2015，23（4）：981-996.

[5]Kenneth J L，Thomas D S. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2-ΔΔCT method[J]. Methods，2001，25（4）：402-408.

[6]張宜輝，張蕊，王健，等. 番鴨脂肪酸合成酶基因的克隆及填飼對其mRNA水平的影響[J]. 中國畜牧獸醫(yī)，2014，41（1）：84-87.

[7]Braglia S，Zappaterra M，Zambonelli P，et al. Analysis of g.265T>C SNP of fatty acid synthase gene and expression study in skeletal muscle and backfat tissues of Italian Large White and Italian Duroc pigs[J]. Livestock Science，2014，162：15-22.

[8]施培松. 匙吻鱘和鳙的生長、肌肉品質(zhì)比較及FAS基因克隆與表達(dá)[D]. 武漢：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，2013：129-132.

[9]覃川杰. 瓦氏黃顙魚脂肪代謝相關(guān)基因cDNA的克隆及表達(dá)分析[D]. 上海：華東師范大學(xué)，2010：37-44.

[10]Leveille G A. Glycogen metabolism in meal-fed rats and chicks and the time sequence of lipogenic and enzymatic adaptive changes[J]. Journal of Nutrition，1966，90：449-460.

[11]Leveille G A，Romsos D R，Yeh Y Y，et al. Lipid biosynthesis in the chick. A consideration of site of synthesis，influence of diet and possible regulatory mechanisms[J]. Poultry Science，1975，54（4）：1075-1093.

[12]Greene D H，Selivonchick D P. Lipid metabolism in fish[J]. Progress in Lipid Research，1987，26（1）：53-85.

[13]Kusakabe T，Maeda M，Hoshi N，et al. Fatty acid synthase is expressed mainly in adult hormone-sensitive cells or cells with high lipid metabolism and in proliferating fetal cells[J]. Journal of Histochemistry & Cytochemistry，2000，48（5）：613-622.

[14]Semenkovich C F. Regulation of fatty acid synthase（FAS）[J]. Progress in Lipid Research，1997，36（1）：43-53.

[15]夏曉杰，鄔應(yīng)龍，馮姣，等. 生長、肌肉品質(zhì)和脂蛋白脂酶及脂肪酸合成酶基因表達(dá)的研究[J]. 食品科學(xué)，2015，36（1）：164-169.

[16]Likimani T A，Wilson R P. Effects of diet on lipogenic enzyme activities in channel catfish hepatic and adipose tissue[J]. Journal of Nutrition，1982，112（1）：112-117.endprint

[17]Liang X F，Ogata H Y，Oku H. Effect of dietary fatty acids on lipoprotein lipase gene expression in the liver and visceral adipose tissue of fed and starved red sea bream Pagrus major[J]. Comparative Biochemistry and Physiology Part A：Molecular & Integrative Physiology，2002，132（4）：913-919.

[18]王愛民. 飼料脂肪水平對吉富羅非魚生長及脂肪代謝調(diào)節(jié)的研究[D]. 南京：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)，2011：89-97.

[19]Shimeno S，Kheyyali D，Shikata T. Metabolic response to dietary lipid to protein ratios in common carp[J]. Fisheries Science，1995，61（6）：977-980.

[20]王愛民，韓光明，韋信鍵. 吉富羅非魚 FAS基因的克隆及再投喂和飼料脂肪水平對其表達(dá)的影響[J]. 水產(chǎn)學(xué)報(bào)，2010，34（7）：1113-1120.

[21]李偉國，溫小波，朱大世. 不同脂肪源對中華絨螯蟹幼蟹生長和脂肪酸合成酶活性的影響[J]. 長江大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2010，7（4）：34-38.

[22]向梟，周興華，陳建，等. 飼料脂肪水平對白甲魚幼魚形體指數(shù)、脂肪沉積和脂肪代謝酶活性的影響[J]. 水產(chǎn)學(xué)報(bào)，2013，37（9）：1349-1357.

[23]Weiss L，Hoffmann G E，Schreiber R，et al. Fatty-acid biosynthesis in man，a pathway of minor importance. Purification，optimal assay conditions，and organ distribution of fatty-acid synthase[J]. Biological Chemistry Hoppe-Seyler，1986，367（2）：905-912.

[24]Clarke S D. Regulation of fatty acid synthase gene expression：an approach for reducing fat accumulation[J]. Journal of Animal Science，1993，71（7）：1957-1965.

[25]Jump D B，Clarke S D，Thelen A，et al. Dietary polyunsaturated fatty acid regulation of gene transcription[J]. Progress in Lipid Research，1996，35（3）：227-241.

[26]Clarke S D，Armstrong M K，Jump D B. Nutritional control of rat liver fatty acid synthase and S14 mRNA abundance[J]. The Journal of Nutrition，1990，120（2）：218-224.

[27]Clarke S D，Armstrong M K，Jump D B. Dietary polyunsaturated fat uniquely suppress rat liver fatty acid synthase and S14 mRNA content[J]. The Journal of Nutrition，1990，120（2）：225-231.

[28]Smith D R，Knabe D A，Smith S B. Depression of lipogenesis in swine adipose tissue by specific dietary fatty acids[J]. Journal of Animal Science，1996，74（5）：975-983.

[29]Ikeda I，Wakamatsu K，Inayoshi A，et al. α-linolenic，eicosapentaenoic and docosahexaenoic acids affect lipid metabolism differently in rats[J]. The Journal of Nutrition，1994，124（10）：1898-1906.

[30]馬晶晶. n-3高不飽和脂肪酸對黑鯛幼魚生長及脂肪代謝的影響[D]. 杭州：浙江大學(xué)，2008：80-95.江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)2017年第45卷第23期李珣，呂小紅. 施氮處理對不同株型水稻品種土壤全氮含量及相關(guān)酶活性的影響[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2017，45（23）：55-58.endprint