張興會，宋先忱，王家明，全治國，丁世偉，陳 瑤，關(guān)乃鵬

（1.遼寧省畜牧科學研究院，遼陽 111000；2.遼寧省遼寧絨山羊原種場有限公司，蓋州 115214；3.遼寧省動物疫病預防控制中心，沈陽 110164）

羊的副結(jié)核病是由副結(jié)核分支桿菌引發(fā)的一種慢性疾病，從近兩年掌握的情況看，在遼寧省內(nèi)各羊場的存欄羊只中的平均感染率已達到15%以上，感染途徑主要為受病羊污染過的飼草、料及排泄物等，羊只起初為隱性感染，即病原攜帶者，過一段時期，部分羊體內(nèi)產(chǎn)生抗體，其中有半數(shù)以上的羊在兩年內(nèi)因持續(xù)腹瀉而死亡，由于尚無有效的治療方法，給養(yǎng)羊業(yè)帶來了較大的經(jīng)濟損失［1］。本調(diào)查主要采用ELASA檢測方法，通過跟蹤檢測各年齡段感染羊只血清中的副結(jié)核分枝桿菌抗體變化水平，分析結(jié)果相關(guān)性，為今后更有效地檢測及防控副結(jié)核病提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與分組

1.1.1 ELISA抗體檢測材料 負壓采血管，離心管，副結(jié)核分枝桿菌抗體檢測試劑盒（IDEXX），MAP抗原包被板，陽性對照液，陰性對照液；未包被微量板，離心機，單道微量移液器，一次性移液吸頭，微量反應震蕩器，96孔酶標儀。

1.1.2 血清樣本 選自遼寧絨山羊聯(lián)合育種場的羔羊，育成羊與后備羊，成年母羊。

1.1.3 時間及地點 時間：2015年4月至2017年10月；地點：遼陽市遼陽縣吉洞鄉(xiāng)。

1.1.4 分組 副結(jié)核陽性母羊所產(chǎn)羔羊為Ⅰ組（17只）、副結(jié)核陰性母羊所產(chǎn)羔羊為Ⅱ組（125只），育成羊與后備羊121只，成年羊351只。

1.2 檢測方法

按照副結(jié)核分枝桿菌ELISA抗體檢測試劑盒說明書的操作方法進行，判定標準如下：S/P%小于或等于45%，判定為抗體陰性（“-”）。S/P%大于45%且小于55%，判定為抗體可疑（“±”），應重新檢測；S/P%大于或等于 55%，判定為抗體陽性（“+”）［1］。

2 調(diào)查結(jié)果

2.1 羔羊副結(jié)核抗體跟蹤檢測

表1中副結(jié)核陽性母羊所產(chǎn)羔羊，在2～4月齡時有28%（5/17）的羊只可在血清中檢出副結(jié)核抗體，而這樣抗體滴度可持續(xù)到斷乳結(jié)束前。而副結(jié)核抗體呈陰性母羊所產(chǎn)的125只羔羊，在哺乳期只有2只的“一過性”的感染。

表1 不同月齡羔羊ELISA方法檢測副結(jié)核抗體結(jié)果

2.2 育成羊副結(jié)核抗體跟蹤檢測

由表2可知，對121只育成羊與后備羊進行副結(jié)核抗體跟蹤檢測，從10月齡檢測結(jié)果看出，其中2只疑似羊、16只陽性羊，查對產(chǎn)羔記錄，在陽性與疑似羊的母親中有3只為副結(jié)核陽性羊，占16.6%（3/18）,表明副結(jié)核陽性的育成羊不是主要來自副結(jié)核母羊的后代。間隔3個月檢測，16只陽性羊中14只轉(zhuǎn)陰、2只疑似轉(zhuǎn)陽，而后兩次跟測中，陽性羊中有1只未轉(zhuǎn)陰，說明在育成羊階段副結(jié)核的感染也只是一種繼往感染，抗原在血清內(nèi)形成抗體為“一過性”的反應。從16～21月齡檢測結(jié)果看，此階段受副結(jié)核感染的羊只有陸續(xù)出現(xiàn)的趨勢，且體內(nèi)抗體陽性的持續(xù)時間較長。

表2 育成羊與后備羊ELISA方法檢測副結(jié)核抗體結(jié)果

2.3 成年羊副結(jié)核抗體跟蹤檢測

從表3可看出，對351只成年母羊持續(xù)半年監(jiān)測副結(jié)核抗體，首檢陽性羊48只，感染率13.7%（48/351），在2個月后的二檢中，有5只轉(zhuǎn)為陰性，在5～6個月后檢測結(jié)果3只為陰性，2只為陽性，說明個別感染者其血清中抗體會呈現(xiàn)一種波動狀態(tài)；二檢為陽性的43只，在后續(xù)的檢測中始終為陽性，為真正感染者，并開始陸續(xù)發(fā)病，有2只死亡。首檢中10只羊為抗體疑似，最終有6只發(fā)展為陽性、4只轉(zhuǎn)陰。首檢的293只陰性羊，在2個月后出現(xiàn)陽性23只，5個月后累計陽性達33只、疑似4只、陽轉(zhuǎn)陰性4只；之后的檢測中，陰性羊中首次查出的陽性羊有少量在下次檢測中轉(zhuǎn)陰，疑似羊則大部分在后一次檢測中轉(zhuǎn)陽，而陰性羊以后的檢測中會陸續(xù)出現(xiàn)少量陽性羊。

表3 351只成年母羊ELISA方法檢測副結(jié)核抗體結(jié)果

3 討論與分析

（1）本調(diào)查結(jié)果表明，羊副結(jié)核的感染不是在羔羊期，副結(jié)核母羊所產(chǎn)羔羊，即使在哺乳期可查出陽性者，但斷乳后都會恢復陰性。哺乳期只有極少部分羔羊出現(xiàn)“一過性”的感染，這應與其母源抗體的水平及所處環(huán)境有關(guān)。副結(jié)核抗體可在血清中測出，母乳中也會有抗體存在，即使羔羊期受到抗原感染，因免疫應答不完善，大部分羔羊血清檢測不出副結(jié)核抗體。只有血清中出現(xiàn)抗體之后，感染羊只才能有發(fā)病的臨床表現(xiàn)。從斷奶后至13月齡（育成羊）檢測結(jié)果看，也會呈現(xiàn)出與哺乳期類似的結(jié)果，因此，某個羊場若需對副結(jié)核羊進行凈化，盲目地篩查12月齡前的羊只是沒有意義的。

（2）育成羊之后階段，羊只的免疫應答系統(tǒng)逐漸完善，即從1周歲開始，攜帶副結(jié)核抗原的個體會開始陸續(xù)產(chǎn)生抗體，如縮短檢測間隔期，會出現(xiàn)抗體從陰性到疑似及至陽性的結(jié)果?，F(xiàn)今的絨山羊種羊場，有必要對成年羊進行副結(jié)核抗體檢測，對首檢的呈陽性羊和疑似羊應隔離或淘汰處理。因抗體為陰性的羊只，有可能也已攜帶抗原，未進行到形成抗體階段，結(jié)合本次調(diào)查的經(jīng)驗，可采取首檢后3個月進行二檢，二檢后1個月進行三檢，以達到逐步凈化副結(jié)核羊的目的。

（3）目前，采用ELISA法檢測副結(jié)核抗體的準確率在95%左右［2］，對有較高種用價值的個體，有必要進行跟蹤檢測，二檢若為陰性，在其后的檢測中再次檢出陽性亦可按陽性羊處理。

（4）副結(jié)核抗體為陽性的羊只中，有30%～40%可終身不發(fā)病。但在營養(yǎng)狀況不佳的環(huán)境下，感染羊1年內(nèi)死亡率即可超過50%，給羊場帶來巨大的經(jīng)濟損失。對于有種用價值的副結(jié)核羊，在不影響健康羊群的情況下，可采取隔離處理后，提供充足的營養(yǎng)及配套管理，還可繼續(xù)利用及繁衍后代。

就母羊而言，其發(fā)病的集中階段是在妊娠后期及哺乳期，此時期其營養(yǎng)代謝繁重，極易誘發(fā)陽性羊出現(xiàn)消瘦、持續(xù)腹瀉等癥狀，發(fā)病羊會在幾天內(nèi)死亡。因此，加強妊娠期及哺乳期副結(jié)核羊的飼養(yǎng)管理也尤為重要。

［1］申貫男，曹東，趙曉彤，等.遼寧地區(qū)羊副結(jié)核病血清學調(diào)查［J］.黑龍江畜牧獸醫(yī)，2017（4下）：135-137.

［2］張興會，宋先忱，王世泉，等.兩種方法檢測絨山羊副結(jié)核的效果分析［J］.中國草食動物科學，2017，37（1）：38-40.