三種處理方式對體外雞蛔蟲卵滅活作用比較試驗

黃恩福 ，王冷眉 ，范寅 ，黃小紅 ，廖健慧 ，段凱文 ，吳家斌

（1.江西生物科技職業(yè)學院，江西南昌 330200；2.江西農(nóng)業(yè)大學動物科學技術(shù)學院）

雞蛔蟲是雞體內(nèi)最大的線蟲，屬卵生、土源性線蟲?；紫x卵隨糞便排出后不需任何中間宿主，在外界充足氧氣、適宜的溫度和濕度可直接發(fā)育成感染性蟲卵。蟲卵對外界環(huán)境不利因素及常用消毒藥物抵抗力很強［1］。人們不斷尋求新的消毒藥物及紫外線輻射等方法，試圖殺滅蟲卵活力。目前，蛔蟲卵活力測定方法多采用平皿濾紙培養(yǎng)法［2～3］，尚有直接鏡檢法、活體染色法、熒光顯微鏡法、動物試驗法以及人工孵化法［4～6］。 上述各法需時有長有短、操作有繁有簡 ，但均不能完全滿足準確、快速、簡便 、穩(wěn)定的要求［7］。為此，本試驗將蟲卵經(jīng)藥物、太陽光照及糞便堆漚方法處理后，采用平皿濾紙培養(yǎng)法，觀察雞蛔蟲卵發(fā)育各期活力情況，以示對蟲卵的滅活效果，旨為防止雞蛔蟲病提供理論參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 雞蛔蟲

雌性蛔蟲20條 （農(nóng)貿(mào)市場活雞宰殺點采集）。

1.2 消毒藥

5%甲酚皂（廠家：江西草珊瑚消毒用品有限公司；批準文號：衛(wèi)消字2005第033號），飽和食鹽水（自制）。

1.3 蟲卵的收集

分別將20條蛔蟲近生殖孔端2/3子宮處內(nèi)的蟲卵集于扁形稱量瓶中，加少許水形成蟲卵液，16×10倍顯微鏡下檢查蟲卵液中的蛔蟲卵，備用。

1.4 平皿濾紙培養(yǎng)

皿底和周圍均以濾紙包裹，皿底濾紙上再平鋪7個圓形小濾紙／份樣，滴加蟲卵液，皿底朝上扣于裝有清水的醫(yī)用方盤中，使周圍濾紙始終能接觸清水，皿底保持濕度，置30℃恒溫箱中孵化培養(yǎng)7d（168 h）。

1.5 試驗設(shè)計（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ）4組，其中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ為試驗組，每組3份樣，先對份樣分別進行處理。

藥物處理（Ⅰ）：蟲卵浸于10%的甲酚皂中（5%）0.2 h、0.5 h、1 h，離心洗凈后培養(yǎng)；太陽光照處理（Ⅱ）：蟲卵處于裝有1/3清水的青霉素瓶中，以太陽分別照射1 h、2 h、3 h，離心后培養(yǎng)。糞便堆漚組處理（Ⅲ）：蟲卵處于成形的新鮮雞糞便中拌勻，平鋪于稱量瓶的底部，加濾紙后再添加雞糞覆蓋，置30℃恒溫箱內(nèi) （滴加水防糞便干凅）5 d、10 d、15 d（168 h、240 h、360 h）取出，飽和食鹽水漂浮收集蟲卵，離心洗凈后培養(yǎng)。再用1.4方法培養(yǎng)；第Ⅳ組為對照組1份樣。

1.6 蟲卵各發(fā)育期形態(tài)觀察

對照組每天取出一塊圓形小濾紙，用水洗下表面蟲卵于扁稱量瓶中，在16×10倍顯微鏡下觀察了解蟲卵各發(fā)育期的形態(tài)并照相。

1.7 滅殺卵計數(shù)

取出經(jīng)平皿濾紙培養(yǎng)7 d（168 h）的試驗各組份樣，在顯微鏡下隨機計數(shù)150個或以上，記錄滅殺卵和成活卵。

1.7.1判定標準。卵內(nèi)有感染性幼蟲的為成活卵，否則為滅活卵。

1.7.2計算公式。成活率＝成活卵數(shù)／蟲卵總數(shù)×100%；相對成活率＝試驗組成活率/對照組成活率×100%；蟲卵滅活率＝（100－相對成活數(shù)）×100%。

2 結(jié)果

2.1 雞蛔蟲卵各發(fā)育期的形態(tài)

蟲卵各發(fā)育期的形態(tài)可分為單細胞蟲卵、二個胚泡期蟲卵、四個胚泡期蟲卵、八個胚泡期蟲卵、前桑椹期蟲卵、桑椹期蟲卵、蝌蚪期蟲卵、蟲樣期蟲卵、感染期蟲卵9種（見圖1）。

圖1 雞蛔蟲卵9種發(fā)育期的形態(tài)（16×10倍）

2.2 三種處理方式對雞蛔蟲卵滅活作用

第Ⅰ組3份樣的滅活率分別為9.78%、21.72%和98.88%，蟲卵隨藥物作用時間增長，感染期蟲卵減少，滅活率增高；第Ⅱ組3份樣的滅活率分別為61.12%、96.47%和97.27%，蟲卵隨太陽光照時間增長，感染期蟲卵減少，滅活率增高，光照1 h和2 h的滅活率差異不大；第Ⅲ組3份樣的滅活率均為100%。蟲卵發(fā)育停止于八個胚泡蟲卵期，后期均為“0”。滅活作用以第Ⅲ組最好，第Ⅱ組次之，第Ⅰ組較差（詳見表1）。

表1 三種處理方式對雞蛔蟲卵的滅活作用比較

3 討論

3.1 溫度、紫外線直射、消毒藥物對蟲卵發(fā)育的影響

結(jié)果表明：第Ⅲ、Ⅱ、Ⅰ組平均滅活率分別為100%、84.95%和43.46%，滅活作用以第Ⅲ組最好，第Ⅱ組次之，第Ⅰ組較差。原因是溫度、紫外線直射、消毒藥物對蟲卵發(fā)育的影響。

第Ⅲ組蟲卵處于30℃恒溫箱中，氧份減少，消化不完全的雞糞便分解產(chǎn)熱，溫度升高至40℃或以上，細菌繁殖，氧份減少致蟲卵發(fā)育停止于2～8胚泡期，洗凈培養(yǎng)蟲卵發(fā)育停止并死亡，符合于文獻［1，8］蟲卵處于高于39℃時蟲卵發(fā)育停止或死亡；45℃時蟲卵在5 min內(nèi)死亡。第Ⅱ組3份樣雖經(jīng)太陽中的紫外線直射，除照射時間長于文獻［12］外，也于隨紫外線直射時間延長蟲卵萎縮、變性、未見幼蟲或部分蟲卵明顯變黑，結(jié)果基本相同；第Ⅰ組3份樣蟲卵滯留10%的甲酚皂中的時間越長，滅活作用越強，1 h滅活率可達98.88%，略高于太陽光照3 h，但第Ⅱ組平均滅活率遠大于第Ⅰ組，符合蟲卵對常用的消毒藥物抵抗力很強［9～11］。

3.2 對養(yǎng)雞場糞便處理方法的建議

第Ⅲ組3份樣蟲卵處于新鮮雞糞中恒溫30℃培養(yǎng)7 d、10 d、15 d，蟲卵發(fā)育停止于八個胚泡蟲卵期，約需1周時間，蟲卵滅活率均達100%；糞便堆漚實際操作簡便易行，環(huán)保，建議推廣應用。第Ⅱ組蟲卵分別光照1 h、2 h、3 h后培養(yǎng)7 d，蟲卵發(fā)育大多停止于單細胞蟲卵期，卵細胞被滅活，滅活率分別達61.12%、96.47%和97.27%，光照1 h和2 h的滅活率差異不大，說明蟲卵通過1 h的太陽光照幾乎能滅活蟲卵；建議應用時將雞糞便集中平鋪于陽光下暴曬，對蟲卵滅活為好的方法。第Ⅰ組雞蛔蟲卵對藥物的抵抗力很強，蟲卵滯留藥物處理時間較長才有一定的滅活力，無應用意義。

4 結(jié)論

本試驗表明：雞蛔蟲卵在外界環(huán)境中怕高溫，怕紫外線，耐消毒藥物。以糞便堆漚組處理（Ⅲ）方式最好。

［1］孔繁瑤.家畜寄生蟲學［M］.北京：農(nóng)業(yè)出版社，1981：185～186.

［2］ 趙錫惠，韓家使，曾華梁，等．培養(yǎng)蛔蟲卵方法的比較［J］.中華預防醫(yī)學雜志，1982，16(4)：247.

［3］張聯(lián)珠.兩種培養(yǎng)液、三種培養(yǎng)方法體外蛔蟲卵培養(yǎng)的觀察［J］.長冶醫(yī)學院學報，1993，7(4)：374.

［4］中國醫(yī)科院衛(wèi)生研究所環(huán)衛(wèi)研究室.堆肥和糞稀的衛(wèi)生檢驗方法［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1976：21.

［5］中央愛國衛(wèi)生運動委員會辦公室．農(nóng)村糞便衛(wèi)生管理經(jīng)驗資料匯編［C］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1974：48．

［6］張秀華.活與失活的蛔蟲卵的鑒別 ［J］.生物學通報.1996，31(4)：41.

［7］曾華粱.用蛔蟲卵細胞分裂期鑒別生活力的觀察［J］.實用寄生蟲病雜志，2001， 9(2)：55.

［8］ 李國清.獸醫(yī)寄生蟲學［M］.廣東：高等教育出版社，1990：209～210.

［9］唐得淋，王先坤，韋冬妹，等.四種消毒藥對犬蛔蟲卵的殺滅作用試驗［J］.湖南畜牧獸醫(yī)，2016（1）：40～43.

［10］胡濤，李芬，謝汝婷，等.3種消毒藥對豬蛔蟲卵的殺滅作用試驗［J］.中國獸醫(yī)雜志，2013，49（11）：32～33.

［11］周忠勇，施新泉.對蛔蟲卵的體外殺滅試驗［J］.中國獸醫(yī)寄生蟲病.1993，1（3）：46～47.

［12］彭飛，劉年猛，馮芳.紫外線輻射對受精蛔蟲卵發(fā)育的影響［J］.中國熱帶醫(yī)學，2004，4（1）：45～46.