注射用溫敏型原位凝膠研究進(jìn)展

張振東，劉希望，馬寧，李劍勇

(中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所/農(nóng)業(yè)部獸用藥物創(chuàng)制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/甘肅省新獸藥工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，甘肅 蘭州 730050)

原位凝膠是將一些高分子材料包裹某些特定藥物以液態(tài)的形式進(jìn)行給藥，在給藥部位受到外界因素的作用進(jìn)而轉(zhuǎn)變成半固態(tài)的新型藥物劑型。注射用溫敏型原位凝膠是一種注射給藥并且以溫度作為溶液相轉(zhuǎn)變調(diào)節(jié)因素的注射凝膠。其凝膠形成的機(jī)理是由于外界環(huán)境與給藥部位的溫度差異，使得凝膠中的高分子聚合物發(fā)生相轉(zhuǎn)變，在藥物緩釋領(lǐng)域顯示出廣闊的應(yīng)用前景。注射用溫敏型原位凝膠有以下優(yōu)點(diǎn)：(1)根據(jù)家畜不同的部位進(jìn)行選擇性注射，凝膠就會在家畜的注射部位形成半固態(tài)的藥物儲存庫，持續(xù)進(jìn)行靶向給藥；(2)有極其敏感的溫度變化感受特性，可隨外界環(huán)境溫度的改變而發(fā)生物理性變化，進(jìn)而調(diào)整制劑的理化性狀來實(shí)現(xiàn)病情的及時有效治療；(3)其網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)有高度親水性質(zhì)，可以將承載的藥物包裹在內(nèi)，進(jìn)而控制藥物的持續(xù)性釋放，有良好的緩釋效果；(4)有很好的組織相容性，能夠?qū)倚蟮慕o藥部位減少創(chuàng)傷，并且在用藥部位滯留較長時間等特點(diǎn)[1]。主要對注射用溫敏型原位凝膠的種類、質(zhì)量控制和應(yīng)用進(jìn)行一個詳細(xì)、系統(tǒng)的歸納和闡述。

1 注射用溫敏型原位凝膠的種類

1.1 殼聚糖 殼聚糖(chitosan, CH) (圖1)具有良好的組織相容性，也是目前在自然界中發(fā)現(xiàn)的唯一堿性多糖[2]。殼聚糖的生產(chǎn)工藝很簡單，甲殼素在160 ℃下與堿液進(jìn)行反應(yīng)，當(dāng)甲殼素分子鏈上的乙?；撾x時，剩余的分子殘鏈即為殼聚糖。殼聚糖經(jīng)過離子交聯(lián)法、乳化-化學(xué)交聯(lián)法等一系列的加工后可形成注射型殼聚糖溫敏相變復(fù)合材料[3]，以其為基質(zhì)所形成的注射用溫敏型緩釋劑具有良好的溫度敏感性和緩釋作用。

圖1 殼聚糖結(jié)構(gòu)式

1.2 泊洛沙姆 泊洛沙姆嵌段共聚物(Poloxamer copolymer)是在1956年出現(xiàn)于藥學(xué)領(lǐng)域，之后被廣泛應(yīng)用于藥物緩釋方面。在美國和歐洲的藥典中，對泊洛沙姆嵌段共聚物均有不同程度的介紹。它是由聚氧乙烯(Ethylene Oxide)和聚丙乙烯(Polypropylene)組成的3段共聚物。泊洛沙姆407(Poloxamer 407, P407)是嵌段共聚物的典型代表。它是由聚丙乙烯與聚氧乙烯以3∶7的比例構(gòu)成，平均相對分子質(zhì)量為11500 Da[4]。目前冷法是制備注射用溫敏型泊洛沙姆407緩釋劑的主流方法。將泊洛沙姆407與藥物在4 ℃下混合得到均勻溶液即可。Bilensoy等[5]把黏附性聚合物加到檸檬酸鹽磷酸緩沖液中，然后要不斷地攪拌，最后將P407加到聚合物溶液中進(jìn)行溶解即可，并對其溫敏性進(jìn)行了綜合性評價。

1.3 聚乙二醇嵌段共聚物 作為一種高分子物質(zhì)，聚乙二醇(Polyethylene glycol, PEG)具有良好生物相容性，也是在溫敏型注射劑中最常使用的載體[6]。同時聚乙二醇還能與聚乳酸(Polylactic acid)、聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)形成嵌段共聚物[7]。目前聚乙二醇嵌段共聚物PLGA-PEG-PLGA比較多見[8]。PLGA-PEG-PLGA在常溫下是略帶淡藍(lán)色的均勻透明液體，當(dāng)外界環(huán)境溫度高于其臨界溫度時，該聚合物會變成白色半透明的半固態(tài)。PLGA-PEG-PLGA嵌段共聚物的合成一般會采用開環(huán)聚合法。首先分別稱取定量的丙交酯、乙交酯和PEG1500，將其分別放入40 ℃和140 ℃烘箱中進(jìn)行干燥處理，3 h后取出三種樣品并混合均勻裝入加有催化劑-異辛酸亞錫的西林瓶中，然后將該瓶放入冷凍干燥機(jī)中進(jìn)行抽真空操作，壓蓋取出后在140 ℃的高溫下反應(yīng)12 h即可。產(chǎn)物用4 ℃的純凈水進(jìn)行溶解，加熱至70 ℃時，使共聚物沉淀并棄去水層就可得到純化的PLGA-PEG-PLGA共聚物。

2 注射用溫敏型原位凝膠的質(zhì)量控制

注射用溫敏型原位凝膠由于其特殊的理化性質(zhì)，其體外評價也與傳統(tǒng)注射劑顯示出較大的差異，其質(zhì)量控制的相關(guān)參數(shù)主要包括以下幾個方面：膠凝溫度、穩(wěn)態(tài)粘度、凝膠強(qiáng)度和生物黏附力等[9]。

2.1 膠凝溫度 膠凝溫度是指溶膠由液態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)槟z時的溫度[10]。由于注射用溫敏型原位凝膠對溫度變化極其敏感，所以在膠凝溫度的測定方面其步驟比較繁瑣。取1 mL凝膠溶液于洗凈干燥的試管中置于水浴中升溫，每升高1℃，持續(xù)5 min，然后將試管順時針傾斜90°，若內(nèi)容物在30 s內(nèi)不流動，記錄此時的溫度，即為凝膠的膠凝溫度[11]。蔣凡[12]研制了氟苯尼考注射用溫敏型原位凝膠，然后對其進(jìn)行初步的質(zhì)量評價，其中測得氟苯尼考注射用溫敏型原位凝膠溫度在35.0-36.0 ℃之間。

2.2 穩(wěn)態(tài)粘度 注射用溫敏型原位凝膠的主要給藥方式是皮下注射，其粘度的穩(wěn)定性對產(chǎn)品藥效的發(fā)揮有很大的影響，所以應(yīng)該對其穩(wěn)態(tài)粘度進(jìn)行測定。首先取適量的高分子水凝膠置于合適的燒杯中，放于水浴中，在膠凝溫度下使其全部膠凝，使用旋轉(zhuǎn)粘度計，選擇合適的阻流棒和轉(zhuǎn)速，測定凝膠的穩(wěn)態(tài)粘度[13]。范霄宇[14]等建立了凝膠穩(wěn)態(tài)粘度測定方法并對雌二醇凝膠流變學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了研究，其中對雌二醇凝膠進(jìn)行了穩(wěn)態(tài)粘度測定，測得雌二醇凝膠的穩(wěn)態(tài)粘度值為2.78帕·秒(Pa·s)。

2.3 凝膠強(qiáng)度 凝膠強(qiáng)度是當(dāng)凝膠受到外力作用并產(chǎn)生破裂時所需的最小壓強(qiáng)[15]。凝膠強(qiáng)度作為凝膠的一個特有的性質(zhì)，很久以前就有人試圖通過用數(shù)字標(biāo)成“凝膠強(qiáng)度”代表“凝膠”性質(zhì)。但是這種難以量化的方法已不能適應(yīng)當(dāng)前實(shí)驗(yàn)的要求。隨著技術(shù)的發(fā)展，凝膠強(qiáng)度的測定方法也在不斷優(yōu)化。當(dāng)前普遍采用的測定方法為：取適量的高分子凝膠液倒入適宜大小的圓柱形模具中，放于恒溫水浴鍋中，在其膠凝溫度下恒溫30 min左右，直至全部膠凝。緊接著把凝膠取出放到已稱好重量的玻璃瓶中，向上添加砝碼，直到由凝膠形成的柱子崩塌，記錄此時的承載量，此時的壓強(qiáng)就是凝膠強(qiáng)度。申獻(xiàn)玲等[16]以P407和P188作為塞克硝唑的載體，制備成塞克硝唑溫敏型水凝膠，并對其凝膠強(qiáng)度進(jìn)行測定，結(jié)果表明塞克硝唑溫敏型水凝膠黏度適中且強(qiáng)度較好。

2.4 生物黏附力 在藥劑學(xué)中，生物黏附力是指當(dāng)某些高分子聚合物從黏附的物質(zhì)上完全脫落下來所需的最小拉力。對生物黏附力的測定一般有兩種方法，即體內(nèi)測定和體外測定。由于體外測定比較方便、便捷，所以采用體外方法測定生物黏附力的文獻(xiàn)比較多見。當(dāng)然體外方法測定生物黏附力也有其局限性，比如測定結(jié)果與體內(nèi)測定不一致、準(zhǔn)確性低等。體外法測定凝膠生物黏附力采用最多的方法是剝離實(shí)驗(yàn)(Detachment test)，此方法可以間接以剝離力的大小來評價黏附力，首先將凝膠模型分別粘貼在上下兩塊光滑的玻璃上，固定好上面的玻璃，再將制備好的凝膠放置兩塊玻璃之間，用手掌壓緊，不要把玻璃壓碎，最后用彈簧秤拉另一塊玻璃，直至凝膠與玻璃完全分離，此時的剝離力即為黏附力[17-18]。

3 注射用溫敏型原位凝膠的應(yīng)用

近年來，注射用溫敏型原位凝膠已成為緩釋注射制劑領(lǐng)域研究的一大新熱點(diǎn)，其中以殼聚糖、泊洛沙姆407和聚乙二醇嵌段共聚物為代表的注射用溫敏型原位凝膠應(yīng)用尤為廣泛。

3.1 殼聚糖作為注射用溫敏型原位凝膠載體的應(yīng)用 殼聚糖注射用溫敏型水凝膠是殼聚糖溶液和多元醇甘油磷酸鈉混合后得到的溫敏型原位凝膠，它具有提高藥物生物利用度、良好的生物相容性等優(yōu)點(diǎn)。Cong Z[19]以殼聚糖和甘油-2-磷酸二鈉為主要載體包裹吡喹酮制成的水凝膠在治療血吸蟲病方面有極好的治療效果，并進(jìn)一步在家兔體內(nèi)進(jìn)行藥動學(xué)試驗(yàn)，藥代動力學(xué)參數(shù)表明，該水凝膠可以提高藥物在體內(nèi)的停留時間。殼聚糖可以和β-甘油磷酸鈉發(fā)生中和反應(yīng)，進(jìn)而得到液態(tài)殼聚糖-甘油磷酸鈉復(fù)合物(Chitosan/GP, CS/β-GP)。Jun Cui等[20]將殼聚糖/甘油磷酸鈉(CS/β-GP)注射到小鼠皮下，發(fā)現(xiàn)該凝膠可以在相對溫和的環(huán)境溫度下引導(dǎo)骨再生，由此可見其生物相容性良好。鄭艷利[21]在使用殼聚糖溫敏性水凝膠治療豬萎縮性鼻炎時得到了很好的效果。環(huán)丙沙星殼聚糖溫敏型凝膠在低溫下為液態(tài)，當(dāng)凝膠溫度上升至機(jī)體溫度時，殼聚糖變?yōu)槟虘B(tài)，同時開始釋放環(huán)丙沙星對患有豬萎縮性鼻炎的豬進(jìn)行治療。

殼聚糖與細(xì)胞有高度兼容性，并且能夠增強(qiáng)凝膠機(jī)械強(qiáng)度，在很多工作中將其作為一種良好的載體來使用。Yan J等[22]以殼聚糖、甘油磷酸鹽和乙基纖維素為載體制備凝膠，在體溫下即可形成凝膠，且與骨髓干細(xì)胞(BMSC)高度兼容。Wu J[23]以殼聚糖、絲素蛋白、羥基磷灰石等載體為基質(zhì)制備水凝膠，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該水凝膠有良好的機(jī)械強(qiáng)度和顯著的降解性。

3.2 泊洛沙姆407作為注射用溫敏型原位凝膠載體的應(yīng)用 泊洛沙姆407以優(yōu)良的性質(zhì)在制備注射用溫敏型原位凝膠中備受關(guān)注。目前，以泊洛沙姆407為載體的注射用溫敏型原位凝膠緩釋劑克服了許多藥物因半衰期短需頻繁給藥、刺激性強(qiáng)等缺點(diǎn)，顯著改善了藥物局部注射的生物相容性，有效地延長了藥物的釋放時間，并進(jìn)一步提高了生物利用度和治療效果。高穎[24]選擇泊洛沙姆作為處方基質(zhì)，制備不同濃度配比的空白凝膠，以膠凝時間、膠凝溫度和黏度作為評價指標(biāo)，綜合考察篩選出最優(yōu)處方，并對其外觀、顯微結(jié)構(gòu)和初步穩(wěn)定性進(jìn)行了評價。盧朝成[25]以P407和P188為載體，采用冷溶法將促孕灌注液制成注射用溫敏型原位凝膠用來防治母畜卵巢靜止和持久黃體不孕癥。曹禮華[26]以P407為溫敏載體，以乳酸環(huán)丙沙星(CPFL)為模型藥物，制備的乳酸環(huán)丙沙星溫敏型原位凝膠，解決了常規(guī)CPFL制劑生物利用度不高、半衰期短等問題，為獸醫(yī)臨床抗菌藥等藥物傳遞提供新的思路。目前，國內(nèi)的溫敏型原位凝膠注射液的研制進(jìn)入了快速發(fā)展時期，并顯示出較高的市場接受度。例如以P407為載體的5%頭孢噻呋原位凝膠注射液在治療豬、牛等呼吸道疾病、乳腺炎及敗血癥方面顯示出較好的療效。

3.3 聚乙二醇嵌段共聚物作為注射用溫敏型原位凝膠載體的應(yīng)用 聚乙二醇嵌段共聚物(PLGA-PEG-PLGA)是目前較為常見的注射用溫敏型原位凝膠載體。以聚乙二醇嵌段共聚物為載體所制備的注射用溫敏型原位凝膠具有良好的生物相容性和生物降解性[27]。在對含高羥基磷灰石的PLGA-PEG-PLGA原位凝膠[28]和以辛伐他汀為主藥的熱敏凝膠[29]進(jìn)行體外和體內(nèi)評價時，均驗(yàn)證了其良好的生物相容性和生物降解性。官員[30]以PLGA-PEG-PLGA為載體，以生長激素釋放-6(Growth hormone releasing peptide6，GHRP-6)為藥物制備成了長效促生長的注射劑，進(jìn)行體外緩釋實(shí)驗(yàn)，并將獺兔作為實(shí)驗(yàn)動物，客觀評價了GHRP-6凝膠緩釋劑。

MacroMed公司開發(fā)的商品名為ReGel?的溫敏型原位凝膠注射劑是以紫杉醇為主藥，其緩釋效果在體內(nèi)可持續(xù)6周。贏創(chuàng)旗下也生產(chǎn)了一系列生物可降解聚合物，其商品名RESOMER?。該產(chǎn)品最主要的特點(diǎn)在于其能注射后在體內(nèi)組織內(nèi)進(jìn)行降解，在體內(nèi)聚合物能水解為羥基酸單體，該產(chǎn)品在多種應(yīng)用中都有良好的生物相容性。

4 展 望

注射用溫敏型原位凝膠不但具有注射劑高效迅速、作用可靠的優(yōu)點(diǎn)，而且具有外界環(huán)境溫度變化敏感和緩釋的特點(diǎn)。所以因其獨(dú)特的多種優(yōu)點(diǎn)而在藥劑學(xué)領(lǐng)域被廣泛地應(yīng)用，也受到越來越多研究者的關(guān)注和研究。目前雖然已經(jīng)有了比較成熟的注射用溫敏型原位凝膠產(chǎn)品的上市，但是該劑型也存在著一些缺點(diǎn)，比如載體可能對牲畜的皮膚或者機(jī)體有嚴(yán)重的刺激作用，也不符合動物福利原則；另外凝膠中承載的藥物在牲畜的注射部位可能會產(chǎn)生突釋效效應(yīng)，從而也就達(dá)不到緩釋的效果了；還有就是注射凝膠的評價體系還不太完善，目前只有美國藥典和歐盟藥典對其進(jìn)行了簡單地說明，在中國藥典上對其的介紹卻很少。隨著注射用溫敏型原位凝膠研究的不斷深入，注射用溫敏型原位凝膠作為藥物載體的優(yōu)越性會更加突出，應(yīng)用于臨床將具有更好的前景。

[1] 高秀蓉, 凌保東, 許小紅, 等. 注射用粉防己堿溫敏型緩釋原位凝膠的制備[J]. 華西藥學(xué)雜志, 2017, (03): 230-233.

Gao X R, Ling B D, Xu X H,etal. Preparation of the temperature-sensitive sustained release in situ tetrandrine gel for injection[J]. West China Journal of Pharmaceutical Sciences, 2017, (03): 230-233.

[2] 王玉杰, 黨奇峰, 萬輝琴, 等. 注射型殼聚糖溫敏相變復(fù)合材料的制備及性能研究[J]. 功能材料, 2014, (S1): 117-121.

Wang Y J, Dang Q F, Wan H Q,etal. Preparation and performance study of the inj ectable thermo-sensitive chitosan-based complexity[J]. Journal of Functional Materials, 2014, (S1): 117-121.

[3] 陳奮, 賈連群, 秦興軍, 等. 平陽霉素殼聚糖溫敏原位凝膠的制備及體外評價[J]. 中國醫(yī)院藥學(xué)雜志, 2017, (09): 792-796.

Chen F, Jia L Q, Qin X J,etal. Preparation andinvitroevaluation of Pingyangmycin loaded chitosan thermogels[J]. Chinese Journal of Hospital Pharmacy,2017, (09): 792-796.

[4] 蔡喆, 潘文合. 和厚樸酚泊洛沙姆F-127膠束的制備及其體外抗腫瘤研究[J]. 中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué), 2014, (02): 186-189.

Cai J, Pan W H. Preparation of honokiol Poloxamer F-127 micelles and its antitumor studies in vitro[J]. Chinese Journal of Modern Applied Pharmacy, 2014, (02): 186-189.

[5] Bilensoy, E.,etal. Thermosensitive vaginal gel formulation for the controlled release of clotrimazole via complexation to beta-cyclodextrin[J]. J Control Release, 2006, 116(2): 107-109.

[6] 汪爭光, 胡朵, 吳東蔚, 等. 結(jié)冷膠與聚乙二醇丙烯酸酯雙網(wǎng)絡(luò)凝膠的制備及生物相容性評價[J]. 高等學(xué)校化學(xué)學(xué)報, 2017, (02): 275-283.

Wang Z G, Hu D, Wu D W,etal. Preparation and Properties of Double Network Hydrogels Based on Gellan Gum and Polyethylene Glycol Acrylate[J]. Chemical Research In Chinese Universities, 2017, (02): 275-283.

[7] 王頤婷. 聚乙二醇/聚己內(nèi)酯/聚乙烯亞胺載胰島素納米粒的制備及其體內(nèi)外釋放性質(zhì)考察[D]. 南方醫(yī)科大學(xué), 2016.

Wang Y T. Preparation and in vitro/in vitro evaluation of insulin-loaded nanoparticles assembled by polyethylene glycol, polycarprolactone and polyethyleneimine[D]. Southern Medical University, 2016.

[8] 魏亞超, 劉皈陽, 陳召紅. PLGA-PEG-PLGA溫敏水凝膠的制備及表征[J]. 解放軍藥學(xué)學(xué)報, 2010, 26(6): 506-508.

Wei Y C, Liu G Y, Chen Z H. Synthesis and Characterization of Thermosensitive PLGA-PEG-PLGA Hydrogel[J]. Pharmaceutical Journal of Chinese People's Liberation Army. 2010, 26(6): 506-508.

[9] 張升, 王利勝, 賴寶林, 等. 溫敏型原位凝膠的熱力學(xué)及流變學(xué)性質(zhì)研究[J]. 中國醫(yī)院藥學(xué)雜志, 2012, (02): 103-106.

Zhang S, Wang L S, Lai B L,etal. Thermodynamic and rheological properties of thermosensitive gels[J]. Chinese Journal of Hospital Pharmacy. 2012, (02): 103-106.

[9] Singh N K, Lee D S. In situ gelling pH-and temperature-sensitive biodegradable block copolymer hydrogels for drug delivery[J]. Journal of Controlled Release, 2014, 193: 214-227.

[10]陳斌. 斑蝥素羥丙基β-環(huán)糊精原位凝膠劑的制備[J]. 中華中醫(yī)藥學(xué)刊, 2010, (10): 2215-2217.

Chen B. Preparation of β- hydroxypropyl cyclodextrin cantharidin situ gel[J]. Chinese Archives of Traditional Chinese Medicine, 2010, (10): 2215-2217.

[11]陳其鋱. 對乙酰氨基酚溫敏凝膠的制備與質(zhì)量評價研究[D]. 山東中醫(yī)藥大學(xué), 2014.

Chen Q T. Evaluation preparation of thermosensitive hydrogel paracetamol and quality[D]. Shandong University of Traditional Chinese Medicine, 2014.

[12]蔣凡. 氟苯尼考注射用原位凝膠初步質(zhì)量評價及在犬體內(nèi)藥代動力學(xué)研究[D]. 南京農(nóng)業(yè)大學(xué), 2013.

Jiang F. In partial fulfilment of the requirements For The Master Degree Of Veterinary Medicine[D]. Nanjing Agricultural University, 2013.

[13]李欣宇. 泊洛沙姆溫度敏感型原位凝膠的研制[D]. 重慶醫(yī)科大學(xué), 2008.

Li X Y. Research on poloxamer thermosensitive in situ gel[D]. ChongQing Medical University, 2008.

[14]范霄宇, 劉蔚, 陳佳,等. 雌二醇凝膠流變學(xué)性質(zhì)及動力黏度測定方法的研究[J]. 藥物分析雜志, 2016, (10): 1880-1884.

Fan X Y, Liu W, Chen J,etal. Research on the nature and method of estradiol gel kinetic viscosity measurement Rheology[J]. Chinese Journal of Pharmaceutical Analysis, 2016, (10): 1880-1884.

[15]廖望. 溫敏性微凝膠形成水凝膠的動力學(xué)、分形結(jié)構(gòu)和性能改進(jìn)[D]. 南開大學(xué), 2013.

Liao W. Gelation kinetics, fractal structure and improvement of hydrogels formed from thermosensitive microgels[D]. Nankai University, 2013.

[16]申獻(xiàn)玲, 朱慧娟. 塞克硝唑溫敏性水凝膠的制備及質(zhì)量控制[J]. 中國醫(yī)院藥學(xué)雜志, 2009, (23): 2041-2043.

Shen X L, Zhu H J. Preparation and quality control of thermosensitive hydrogel of secnidazole[J]. Chinese Journal of Hospital Pharmacy, 2009, (23): 2041-2043.

[17]張麗萍. 小檗堿生物黏附緩釋片的制備及體外評價[J]. 安徽醫(yī)藥, 2016, (11): 2033-2036.

Zhang L P. Preparation of berberine bioadhesive sustained release tablets and the valuationinvitro[J]. Anhui Medical and Pharmaceutical Journal, 2016, (11): 2033-2036.

[18]趙壯, 杜守穎, 陸洋, 等. 卡波姆等6種生物黏附材料體內(nèi)外黏附性能評價[J]. 中國藥學(xué)雜志, 2014, (24): 2188-2192.

Zhao Z, Du S Y, Lu Y,etal. Evaluation of adhesive properties of 6 kinds of biological adhesive materials[J]. Chinese Pharmaceutical Journal, 2014, (24): 2188-2192.

[19]Cong Z, Shi Y, Xue P,etal. Design and optimization of thermosensitive nanoemulsion hydrogel for sustained-release of praziquantel[J]. Drug Development & Industrial Pharmacy, 2017, 43(4): 558.

[20]Jun Cui, Xin Xu, Kangning Sun. Preparation and characterization of chitosan/β-GP membranes for guided bone regeneration[J]. Journal of Wuhan University of Technology(Materials Science Edition), 2011, (2): 242-246.

[21]鄭艷利. 吉林地區(qū)豬萎縮性鼻炎病原分離鑒定及環(huán)丙沙星殼聚糖溫敏性水凝膠治療效果研究[D]. 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué), 2013.

Zheng Y L. Isolation and identification of swine atrophic rhinitis pathogens in Jilin area and the effect of ciprofloxacin chitosan thermo-sensitive hydrogel[D]. Jilin Agricultural University, 2013.

[22]Yan J，Yang L，Wang G，etal. Biocompatibility evaluation of chitosan-based injectable hydrogels for the culturing mice mesenchymal stem cells in vitro[J]. J Biomater Appl，2010 , 24(7): 625.

[23]Wu J, Liu J, Shi Y,etal. Rheological, mechanical and degradable properties of injectable chitosan/silk fibroin/hydroxyapatite/glycerophosphate hydrogels[J]. Journal of the Mechanical Behavior of Biomedical Materials, 2016, 64: 161-172.

[24]高穎. 第七屆中國畜牧科技論壇論文集: A集[C]. 北京: 中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會, 2016: 2.

Gao Y. The Collection of the 7th China Livestock Science and Technology Forum: A set[C]. Beijing: Chinese Society of Animal Husbandry and Veterinary Medicine, 2016: 2.

[25]盧朝成, 符華林, 周濤, 等. 促孕原位凝膠灌注液的制備及其體外釋放度[J]. 過程工程學(xué)報, 2014, (01): 139-144.

Lu C H, Fu H L, Zhou T,etal. Preparation of fertility-promoting intrauterine infusion in situ gel and itsinvitrorelease[J], The Chinese Journal of Process Engineering, 2014, (01): 139-144.

[26]曹禮華, 張東娟, 陳輝, 等. 乳酸環(huán)丙沙星溫度敏感型原位凝膠的制備及其體外釋藥評價[J]. 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報, 2013, (02): 125-131.

Cao L H, Zhang D J, Chen H,etal. Preparation and evaluation ofinvitrorelease of ciprofloxacin lactate temperature-sensitive in situ gel[J]. Journal of Nanjing Agricultural University, 2013, (2): 125-131.

[27]劉曉君, 李坤, 包泳初, 等. 溫度敏感型聚酯/聚乙二醇三嵌段生物可降解共聚物的降解性能及藥物釋放的影響因素研究進(jìn)展[J]. 中國醫(yī)藥工業(yè)雜志, 2012, (10): 865-870.

Liu X J, Li K, Bao Y C,etal. Research on influence factors on degradation property and drug release of thermosensitive polyester block/polyethylene glycol block triblock biodegradable copolymer[J]. Chinese Journal of Pharmaceuticals, 2012, (10): 865-870.

[28]Lai M C, Chang K C, Hsu S C,etal. In situ gelation of PEG-PLGA-PEG hydrogels containing high loading of hydroxyapatite: in vitro and in vivo characteristics[J]. Biomedical Materials, 2014, 9(1): 015011.

[29]Yan Q, Xiao L Q, Tan L,etal. Controlled release of simvastatin-loaded thermo-sensitive PLGA-PEG-PLGA hydrogel for bone tissue regeneration: in vitro and in vivo characteristics[J]. Journal of Biomedical Materials Research Part A, 2015, 103(11): 3580.

[30]官員. GHRP-6溫敏型緩釋凝膠的制備及其對獺兔生長和皮張品質(zhì)的作用[D]. 吉林大學(xué), 2014.

Guan Y. Preparation of GHRP-6 thermosensitive sustained release gel and its effect on the growth and skin quality of rex rabbit[D]. Jilin University, 2014.