當(dāng)歸潤(rùn)腸茶潤(rùn)腸通便功能和急性毒性研究

吳國(guó)泰，杜麗東，王瑞瓊，王水明，劉峰林，任遠(yuǎn)

（甘肅中醫(yī)藥大學(xué)，甘肅省中藥藥理與毒理學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，甘肅蘭州 730000）

便秘是臨床最常見(jiàn)的復(fù)雜的消化道疾病，也是其他疾病的并發(fā)癥。隨著人們飲食結(jié)構(gòu)和生活習(xí)慣的變化，便秘的發(fā)病率異常升高。便秘后機(jī)體會(huì)出現(xiàn)腹脹、精神倦怠、體重減輕、不思飲食、面色晦暗、色斑出怒、口臭，食欲減退等諸多病征，給患者帶來(lái)了極大現(xiàn)、反應(yīng)遲緩、大便色黑，干燥。同患者也會(huì)伴有易的不適和痛苦，嚴(yán)重影響生活質(zhì)量[1]。西醫(yī)現(xiàn)有治療便秘的藥物是瀉藥，近年來(lái)，部分便秘患者出現(xiàn)了藥物依賴性便秘的現(xiàn)象，便秘的治療難度明顯增加。中藥是中國(guó)的傳統(tǒng)瑰寶，越來(lái)越多地用于開(kāi)發(fā)具有保健功能的食品，對(duì)臨床常見(jiàn)的慢性疾病輔助治療和康復(fù)具有非常重要的意義[2]，本研究按照傳統(tǒng)中醫(yī)理論組方制備當(dāng)歸潤(rùn)腸茶，當(dāng)歸潤(rùn)腸茶由當(dāng)歸、枳殼、干姜、大棗和蜂蜜組成，具有養(yǎng)血溫陽(yáng)、潤(rùn)腸導(dǎo)滯的功能；主治血虛、寒凝、瘀滯之冷秘。本研究采用冰水混合物建立脾胃虛寒型小鼠便秘模型，用甲狀腺素和氫化可的松聯(lián)合建立陰虛血瘀型小鼠便秘模型，用復(fù)方地芬諾酯建立慢傳輸型小鼠便秘模型，從多種病理模型入手，通過(guò)研究當(dāng)歸潤(rùn)腸茶對(duì)模型小鼠排便時(shí)間、排便量、糞便含水量和腸推進(jìn)率的影響，對(duì)當(dāng)歸潤(rùn)腸茶的潤(rùn)腸通便功能進(jìn)行評(píng)價(jià)，用最大給藥量法評(píng)價(jià)當(dāng)歸潤(rùn)腸茶的急性毒性，為后續(xù)開(kāi)發(fā)提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要材料與試劑

當(dāng)歸潤(rùn)腸茶，自制（處方：當(dāng)歸3 g、枳殼0.25 g、干姜1 g、大棗4 g、蜂蜜16 g；制法：取當(dāng)歸、枳殼、干姜、大棗（破）處方100倍用量，加10倍量水煎煮1 h，過(guò)濾，藥渣再加8倍量水煎煮40 min，合并藥液濃縮至500 mL，取250 mL藥液加蜂蜜800 g，得流浸膏，蒸餾水定容至1000 mL，備用）。

潤(rùn)腸丸，自制（元·《丹溪心法》卷五處方：麻子仁30 g、當(dāng)歸30 g、桃仁30 g、生地黃30 g、枳殼30 g；制法：取處方10倍用量藥材，加10倍量水煎煮1 h，過(guò)濾，藥渣再加8倍量水煎煮40 min，合并藥液濃縮至1500 mL，備用）。

氫化可的松注射液，國(guó)藥集團(tuán)容生制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào) 1507281；甲狀腺素片，上海長(zhǎng)城藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)20150103；復(fù)方地芬諾酯片，新鄉(xiāng)市常樂(lè)制藥有限責(zé)任公司生產(chǎn)，批號(hào) 1407025；活性炭粉末，天津市大茂化學(xué)試劑廠生產(chǎn)，批號(hào)20140106。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為昆明種小鼠，SPF級(jí)，試驗(yàn)開(kāi)始體重為 18～22 g，雌雄兼用，由甘肅中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào) SCXK（甘）2015-0002-62003800000296。

1.2 主要設(shè)備與儀器

HX2001電子天平，由慈溪市天東衡器廠生產(chǎn)；SQP型分析天平，由賽多利斯科學(xué)儀（北京）有限公司生產(chǎn)；DHG-9123A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，由上海齊欣科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的飼養(yǎng)與檢疫

飼養(yǎng)管理：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)于甘肅中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心 SPF級(jí)動(dòng)物房，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)施使用證號(hào)SYXK(甘)2015-0005。SPF級(jí)飼料(由北京科奧協(xié)力飼料有限公司提供)喂養(yǎng)，5只/大箱，群養(yǎng)，自由進(jìn)食，自由飲水，室溫 25±0.5 ℃，相對(duì)濕度 55±5%，12 h燈光，12 h黑暗，適應(yīng)3 d后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。

檢疫：對(duì)購(gòu)入動(dòng)物檢疫3 d。期間每日檢查動(dòng)物一次，未發(fā)現(xiàn)不健康的動(dòng)物，全部動(dòng)物納入實(shí)驗(yàn)。

1.3.2 動(dòng)物的造模、給藥與檢測(cè)指標(biāo)

脾胃虛寒型便秘小鼠模型[3]：取60只小鼠，隨機(jī)抽取10只為正常組，其余50只用活性炭冰水混合物（0～2 ℃）灌胃3 d后隨機(jī)分為模型組、陽(yáng)性組，當(dāng)歸潤(rùn)腸茶高、中、低劑量組，共6組。陽(yáng)性組、當(dāng)歸潤(rùn)腸茶高、中、低劑量組分別灌胃潤(rùn)腸丸(25.0 g生藥/kg體重，相當(dāng)于臨床成人日用量的10倍)、當(dāng)歸潤(rùn)腸茶（40.4、20.2、10.1生藥/kg體重，分別相當(dāng)于推薦人用量100倍、50倍和25倍），正常組和模型組灌胃等量蒸餾水，給藥容量為20 mL/kg體重，每天1次，連續(xù)3 d。第2 d給藥后記錄首次排便時(shí)間和6 h內(nèi)排便總重量，第 3 d在藥液中加入活性炭（終濃度為10%），灌胃20 min后處死，解剖，測(cè)量小腸總長(zhǎng)和炭末推進(jìn)距離，計(jì)算腸推進(jìn)率。

腸推進(jìn)率=炭末在小腸內(nèi)的推進(jìn)距離(cm)/小腸總長(zhǎng)度(cm)×100%

陰虛血瘀型便秘小鼠模型[4,5]：取60只小鼠，隨機(jī)分為6組，設(shè)正常組、模型組、陽(yáng)性組、當(dāng)歸潤(rùn)腸茶高、中、低劑量組，每組10只，除正常組外，其余各組小鼠每天灌胃甲狀腺素150 mg/kg和皮下注射氫化可的松2.0 mg/kg，連續(xù)7 d。造模第3 d，陽(yáng)性組、當(dāng)歸潤(rùn)腸茶高、中、低劑量組分別灌胃潤(rùn)腸丸(劑量同上)、當(dāng)歸潤(rùn)腸茶（劑量同上），正常組和模型組灌胃等量蒸餾水，給藥容量為20 mL/kg體重，每天1次，連續(xù)7 d。給藥第7 d，灌胃60 min后，各組小鼠灌胃10%活性炭1.0 mL/只，單籠飼養(yǎng)，記錄各小鼠首次排黑便時(shí)間，并記錄6 h內(nèi)排便總粒數(shù)，稱糞便濕重，80 ℃烘干4 h，稱糞便干重，計(jì)算糞便含水量，糞便含水量=（糞便濕重-糞便干重）/糞便濕重×100%。給藥第8 d，禁食不禁水12 h，各組小鼠灌胃60 min后，各組小鼠灌胃10%活性炭1.0 mL/只，30 min后，處死小鼠，摘自幽門(mén)部到回盲部的全部腸管，在光滑桌面鋪直，觀察腸道形態(tài)，測(cè)量腸管全長(zhǎng)、炭末在腸管內(nèi)推進(jìn)距離，計(jì)算腸推進(jìn)率。

腸推進(jìn)率(%)=炭末推進(jìn)距離(cm)/腸道總長(zhǎng)(cm)×100%

慢傳輸型便秘小鼠模型[6,7]：取60只小鼠，隨機(jī)分為6組，設(shè)正常組、模型組、陽(yáng)性組、當(dāng)歸潤(rùn)腸茶高、中、低劑量組，每組10只。陽(yáng)性組、當(dāng)歸潤(rùn)腸茶高、中、低劑量組分別灌胃潤(rùn)腸丸(劑量同上)、當(dāng)歸潤(rùn)腸茶（劑量同上），正常組和模型組灌胃等量蒸餾水，給藥容量為20 mL/kg體重，每天1次，連續(xù)7 d。末次給藥后各小鼠隔夜禁水不禁食20 h，除正常組外，其余各組小鼠分別灌胃復(fù)方地芬諾酯10 mg/kg，正常組灌胃等量蒸餾水，30 min后，各組小鼠給藥1次并灌胃10%活性炭1.0 mL/只。立即單籠飼養(yǎng)，記錄各小鼠首次排黑便時(shí)間，6 h內(nèi)排便總粒數(shù)，稱糞便濕重，80 ℃烘干4 h，稱糞便干重，計(jì)算糞便含水量。處死小鼠，摘自幽門(mén)部到回盲部的全部腸管，在光滑桌面鋪直，觀察腸道形態(tài)，測(cè)量腸管全長(zhǎng)、炭末在腸管內(nèi)推進(jìn)距離，計(jì)算腸推進(jìn)率。

腸推進(jìn)率（%）=炭末推進(jìn)距離（cm）/腸道總長(zhǎng)（cm）×100%

1.3.3 當(dāng)歸潤(rùn)腸茶的急性毒性試驗(yàn)[8]

預(yù)實(shí)驗(yàn)無(wú)法測(cè)定當(dāng)歸潤(rùn)腸茶的小鼠經(jīng)口LD50，另取小鼠40只，雌雄各半，隨機(jī)分為對(duì)照組和受試組，每組20只，禁食不禁水12 h，受試組小鼠按40 mL/kg體重的容量灌胃（10 g當(dāng)歸潤(rùn)腸茶膏溶于20 mL蒸餾水），共2次，間隔6 h，對(duì)照組小鼠灌胃等容量蒸餾水。觀察各小鼠的飲食、活動(dòng)、精神狀態(tài)、皮毛膚色、大小便、體重變化及死亡情況，連續(xù)觀察14 d，頸椎脫臼處死小鼠，大體解剖，觀察肝、腎、肺、脾、心等臟器形態(tài)和色澤，并計(jì)算小鼠1日最大給藥量相當(dāng)于臨床成人日用量的倍數(shù)。

1.3.4 數(shù)據(jù)分析

2 結(jié)果與討論

2.1 當(dāng)歸潤(rùn)腸茶對(duì)脾胃虛寒型便秘小鼠的影響

如表1所示，模型小鼠出現(xiàn)豎毛，少動(dòng)，蜷曲，行動(dòng)遲緩，被毛干枯、色暗，尿液呈現(xiàn)黃色，大便干硬、排便次數(shù)減少，解剖發(fā)現(xiàn)結(jié)腸內(nèi)糞便多呈球狀或串珠狀，質(zhì)輕干硬。與正常組比較，模型組小鼠排便時(shí)間顯著延長(zhǎng)、排便量和腸推進(jìn)率顯著減小(p<0.01，p<0.05)；與模型組比較，潤(rùn)腸丸組和當(dāng)歸潤(rùn)腸茶高、中劑量組排便時(shí)間顯著縮短、排便量和腸推進(jìn)率顯著增加（p<0.01，p<0.05），當(dāng)歸潤(rùn)腸茶低劑量組組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；結(jié)果提示脾胃虛寒型便秘在體質(zhì)特征方面表現(xiàn)為畏寒肢冷，喜靜屈曲，長(zhǎng)期導(dǎo)致胃腸動(dòng)力減弱，引發(fā)便秘，當(dāng)歸潤(rùn)腸茶組方中含有干姜、當(dāng)歸等溫?zé)嵝灾兴?，能全面調(diào)理機(jī)體體征狀態(tài)，從而改善胃腸功能，促進(jìn)排便。

表1 當(dāng)歸潤(rùn)腸茶對(duì)脾胃虛寒型便秘小鼠排便情況和腸推進(jìn)率的影響Table 1 Influences of DRT on defecation and peristalic rate of intestinal in SSD mice

2.2 當(dāng)歸潤(rùn)腸茶對(duì)陰虛血瘀型便秘小鼠影響

如表2所示，實(shí)驗(yàn)期間小鼠均未出現(xiàn)死亡現(xiàn)象，與正常組小鼠比較，造模組小鼠精神亢奮，喜動(dòng)，活動(dòng)時(shí)間長(zhǎng)；與正常組比較，模型組小鼠排便時(shí)間顯著延長(zhǎng)、排便量顯著減少、糞便含水量顯著減少、腸推進(jìn)率顯著減?。╬<0.01，p<0.05）；與模型組比較，陽(yáng)性組、當(dāng)歸潤(rùn)腸茶高、中、低劑量組小鼠排便時(shí)間顯著縮短（p<0.01），陽(yáng)性組和當(dāng)歸潤(rùn)腸茶高劑量組排便量、糞便含水量和腸推進(jìn)率均顯著增加（p<0.01，p<0.05），當(dāng)歸潤(rùn)腸茶中、低劑量組組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；結(jié)果提示陰虛血瘀型便秘表現(xiàn)為津枯腸燥，五心煩熱，當(dāng)歸潤(rùn)腸茶能滋陰養(yǎng)血、養(yǎng)陰生津，從而潤(rùn)腸通便。

2.3 當(dāng)歸潤(rùn)腸茶對(duì)慢傳輸型便秘小鼠的影響

如表3所示，正常組小鼠反應(yīng)靈活，糞便稀軟，不成形；模型小鼠出現(xiàn)煩躁不安，排便量減少，大便質(zhì)硬；當(dāng)歸潤(rùn)腸茶各劑量組和陽(yáng)性組有所改善；與正常組比較，模型組小鼠首次排黑便時(shí)間顯著延長(zhǎng)、排便量顯著減少、便含水量和腸推進(jìn)率顯著降低(p<0.01，p<0.05)；與模型組比較，陽(yáng)性組、當(dāng)歸潤(rùn)腸茶高、中、低劑量組的首次排黑便時(shí)間均顯著縮短、排便量顯著增多(p<0.01，p<0.05)，當(dāng)歸潤(rùn)腸茶高、低劑量組小鼠糞便含水量均顯著增加(p<0.01)，當(dāng)歸潤(rùn)腸茶高、中劑量組的小腸推進(jìn)率均顯著升高(p<0.05)；結(jié)果提示，慢傳輸型便秘以胃腸動(dòng)力障礙為基本病機(jī)，腸動(dòng)力衰弱導(dǎo)致腸內(nèi)容物滯留，水分重新收引發(fā)腸燥，大便干結(jié)，當(dāng)歸潤(rùn)腸茶方中含有蜂蜜、當(dāng)歸等調(diào)節(jié)胃腸動(dòng)力兼潤(rùn)下導(dǎo)滯，從而促進(jìn)排便。

表2 當(dāng)歸潤(rùn)腸茶對(duì)陰虛血瘀型便秘小鼠排便情況和腸推進(jìn)率的影響Table 2 Influences of DRT on defecation and peristalic rate of intestinal in YDBS mice

表3 當(dāng)歸潤(rùn)腸茶對(duì)慢傳輸型便秘小鼠排便情況和腸推進(jìn)率的影響Table 3 Influences of DRT on defecation and peristalic rate of intestinal in GSTC mice

2.4 當(dāng)歸潤(rùn)腸茶的急性毒性

結(jié)果顯示，按最高濃度最大給藥容量灌胃后，各小鼠的飲食、自主活動(dòng)均未出現(xiàn)異常，皮毛膚色未見(jiàn)異常，體重增加正常，大小便未見(jiàn)異常；持續(xù)觀察14 d，期間未見(jiàn)動(dòng)物死亡；頸椎脫臼處死小鼠，大體解剖，肝、腎、肺、脾和心等臟器形態(tài)、色澤未見(jiàn)異常。經(jīng)計(jì)算，當(dāng)歸潤(rùn)腸茶小鼠1日最大給藥量為40.0 g/kg體重，折合為臨床70 kg成人日用量（7 g）的400倍，對(duì)小鼠未見(jiàn)明顯急性毒性反應(yīng)，口服安全性較高。

3 結(jié)論

研究結(jié)果表明潤(rùn)腸茶具有一定的潤(rùn)腸通便作用，可有效緩解脾胃虛寒型便秘、陰虛血瘀型便秘和慢傳輸型便秘體征，縮短小鼠排便時(shí)間，增加排便量，加快腸道推進(jìn)速度，有潤(rùn)腸通便功能，未見(jiàn)明顯急性毒性反應(yīng)，為當(dāng)歸潤(rùn)腸茶進(jìn)一步研究和開(kāi)發(fā)奠定了基礎(chǔ)。

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