聶映 由志鈺 黃亞梅

【摘要】目的：對TP-ELISA（梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）與TPPA（梅毒螺旋體明膠凝集實(shí)驗(yàn)）兩種方法在孕婦梅毒螺旋體篩查中的應(yīng)用比較，以優(yōu)化梅毒血清學(xué)篩查方案。方法：分別選取86例TP-ELISA結(jié)果陽性或弱陽性（S/co值≥1）以及8例TP-ELISA結(jié)果陰性（S/CO值<1）的孕婦血標(biāo)本，采用TPPA進(jìn)行檢測，對兩種方法所得的檢測結(jié)果進(jìn)行比較分析。結(jié)果：對于TP-ELISA結(jié)果陰性（S/CO值<1）的8例標(biāo)本，TPPA檢測結(jié)果為陰性;TP-ELISA結(jié)果弱陽性（1≤S/CO值<4）的6例標(biāo)本，TPPA檢測結(jié)果全為陰性;而TP-ELISA結(jié)果陽性（S/CO值≥4）的80例標(biāo)本，TPPA檢測結(jié)果陽性率為98.75%。結(jié)論：利用TP-ELISA可實(shí)現(xiàn)大批量樣本的自動化處理，但TP-ELISA陽性結(jié)果尤其是弱陽性結(jié)果需要聯(lián)合TPPA確認(rèn)，并進(jìn)行追蹤復(fù)查以獲得更為準(zhǔn)確的判斷。

【關(guān)鍵詞】TP-ELISA; TPPA;梅毒螺旋體篩查

梅毒是一種由梅毒螺旋體感染而引起的慢性性傳播性疾病，具有高度傳染性，屬于醫(yī)院檢驗(yàn)科傳染病檢測的常規(guī)項(xiàng)目。梅毒感染機(jī)體臨床表現(xiàn)復(fù)雜，可引起全身各組織和器官產(chǎn)生慢性系統(tǒng)性病變，嚴(yán)重危害機(jī)體健康。孕婦感染梅毒，可經(jīng)由胎盤傳染給胎兒，引發(fā)宮內(nèi)感染進(jìn)而導(dǎo)致胎兒流產(chǎn)、早產(chǎn)或?qū)е鲁苫钐夯加邢忍烀范尽Ｒ虼?，出于?yōu)生優(yōu)育及傳染病防控的目的，對孕婦進(jìn)行梅毒篩查是至關(guān)重要的[1]。目前，針對孕婦梅毒篩查，常采用TP-ELISA（梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）及TPPA（梅毒螺旋體明膠凝集實(shí)驗(yàn)）兩種梅毒抗原血清學(xué)方法進(jìn)行檢測。但由于兩種方法在靈敏性及特異性等多個(gè)方面存在差異，可導(dǎo)致梅毒檢出率不一致，也容易導(dǎo)致臨床醫(yī)生難于做出正確判斷[2]。為此，本研究擬對TP-ELISA與TPPA兩種方法進(jìn)行比較分析，以探討孕婦梅毒血清學(xué)篩查方案。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇近來于我院做梅毒篩查的孕婦94例，其中86例TP-ELISA結(jié)果陽性或弱陽性（S/CO值>1），8例TP-ELISA結(jié)果陰性（S/CO值<1）。對以上標(biāo)本進(jìn)行TPPA檢測。

1.2 材料和方法

1.2.1 材料

材料及試劑TP-ELISA操作采用煙臺煙臺艾德康生物科技有限公司全自動酶免儀;TP-ELISA及TPPA檢測試劑盒分別購自北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司和珠海麗珠試劑公司。

1.2.2 檢測方法

（1） TP-ELISA：按照煙臺煙臺艾德康生物科技有限公司全自動酶免儀使用說明書，設(shè)置好各項(xiàng)參數(shù)并準(zhǔn)備好血清標(biāo)本及相應(yīng)試劑，儀器自動完成測試操作及讀數(shù)。（2） TPPA：首先，將100μ1生理鹽水加入U(xiǎn)型板第1個(gè)孔，后面7孔每孔加入25μl生理鹽水;然后，第1孔加入25μl待測血清，混勻后取出25μl加入第2孔，稀釋至第8個(gè)孔，棄掉25μl稀釋血清;最后，在第3個(gè)孔加入25μl未致敏粒子，第4至8孔均加入25μl致敏粒子，混勻后室溫靜置2h，結(jié)果判讀參照文獻(xiàn)[3]，以血清稀釋度1：80作為陽性最低稀釋度報(bào)告標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 TP-ELISA和TPPA兩種檢測結(jié)果比較

在所檢的94例孕婦血標(biāo)本中，8例TP-ELISA結(jié)果陰性的標(biāo)本，TPPA檢測結(jié)果同樣為陰性，符合率為100%;而86例TP-ELISA結(jié)果陽性（80例）或弱陽性標(biāo)本（6例），TPPA檢測結(jié)果為陽性的標(biāo)本數(shù)為79例，符合率為91.86%（見表1）。進(jìn)一步的分析發(fā)現(xiàn)，在TP-ELISA結(jié)果為弱陽性值（1≤S/CO值<4）的6例血標(biāo)本檢測中，TPPA結(jié)果均為陰性;而TP-ELISA結(jié)果陽性（S/CO值>4）的80例標(biāo)本，TPPA檢測結(jié)果陽性標(biāo)本數(shù)為79例，未檢出的一例標(biāo)本為TP-ELISA結(jié)果S/CO值介于4～5之間，陽性檢測結(jié)果符合率為98.75%。

2.2 TP-ELISA S/CO值與TPPA抗體效價(jià)關(guān)系分析

為了進(jìn)一步探討TP-ELISA與TPPA檢測結(jié)果的關(guān)系，我們對TP-ELISA S/CO值與其相對應(yīng)的TPPA抗體效價(jià)進(jìn)行深入分析。如圖l所示，在TP-ELISA S/CO值大于4，TPPA抗體效價(jià)總體趨勢上是隨著S/CO值上升而上升的，比如TPPA檢測效價(jià)為1280對應(yīng)的TP-ELISA檢測值絕大多數(shù)分布在S/CO≥20。但我們也同時(shí)注意到，這兩種檢測方法的檢測結(jié)果并不是成線性關(guān)系的，這值得廣大臨床檢驗(yàn)工作者注意。

3 討論

研究表明，近年來，隨著社會經(jīng)濟(jì)快速發(fā)展，我國梅毒發(fā)病率逐年上升，而先天性梅毒感染上升趨勢明顯，防控形勢嚴(yán)峻H。機(jī)體在感染梅毒螺旋體約兩周后即可產(chǎn)生特異性抗體，主要包括IgG和IgM兩種特異性抗體，前者為治愈后也終生存在，而后者在機(jī)體存在時(shí)間較短[5]。通過檢測受檢者血清中的梅毒特異性抗體，即可對梅毒進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室篩查。實(shí)驗(yàn)室梅毒血清學(xué)特異性抗體檢測方法主要是TP-ELISA和TPPA兩種方法，具有很高的特異性和敏感性。

TP-ELISA是采用酶聯(lián)免疫吸附法原理，在微孔板上包被梅毒螺旋體抗原，以雙抗原夾心法同時(shí)檢測IgM和IgG兩種特異性抗體，陽性結(jié)果S/CO值與血清中特異性抗體濃度成正相關(guān)。TP-ELISA檢測法操作簡單、測試費(fèi)低廉且易于自動化，適用于醫(yī)院大規(guī)模梅毒抗體篩查，是當(dāng)前最廣泛使用的梅毒特異性抗體檢測方法，也被作為實(shí)驗(yàn)室梅毒特異性抗體檢測的首選方法[6]。但研究發(fā)現(xiàn)，利用TP-ELISA檢測法進(jìn)行梅毒篩查，由于受檢者患有自身免疫疾病等原因可導(dǎo)致假陽性結(jié)果的產(chǎn)生，也可由于鉤狀效應(yīng)的原因?qū)е录訇幮越Y(jié)果的產(chǎn)生[7-8]。TPPA作為國際公認(rèn)的梅毒確診的首選檢測方法，是利用明膠顆粒包裹純化后的梅毒螺旋體毒株制成抗原，檢測受檢者血清中梅毒特異性抗體及效價(jià)，特異性及靈敏度均較好。然而，TPPA檢測法所需試劑的成本高，檢測費(fèi)相對于TP-ELISA也較高。與此同時(shí)，TPPA法需要檢驗(yàn)人員對血清標(biāo)本梯度稀釋，不能自動化操作，結(jié)果判讀也依賴于肉眼，結(jié)果準(zhǔn)確性也依賴于檢驗(yàn)人員的工作經(jīng)驗(yàn)，因而不適合于實(shí)驗(yàn)室大批量的梅毒篩查工作。

在本項(xiàng)研究中，TP-ELISA檢測結(jié)果陰性的8例標(biāo)本，TPPA檢測結(jié)果也均為陰性。而對于TP-ELISA檢測結(jié)果弱陽性（1 ≤S/CO值<4）的6例標(biāo)本，TPPA結(jié)果為陰性，說明TPPA特異性較TP-ELISA更好。值得注意的是，在TP-ELISA檢測結(jié)果陽性的80例標(biāo)本中，僅有一例S/CO值介于4～5的標(biāo)本，TPPA檢測結(jié)果為陰性，這說明隨著S/CO值得增大，TPPA與TP-ELISA的陽性檢測符合率就越高，所以TP-ELISA結(jié)果陽性的標(biāo)本，需要利用TPPA法進(jìn)一步確認(rèn)。

綜上所述，TP-ELISA適用于孕婦梅毒的大批量自動化篩查，但陽性結(jié)果需要通過TPPA法進(jìn)一步確認(rèn)，既能節(jié)約時(shí)間和醫(yī)療費(fèi)用成本，也能減少誤診。

（通訊作者：黃亞梅）

參考文獻(xiàn)

[1]丁靜，王泉，王慶國.RPR，TP-ELISA，TPPA試驗(yàn)在梅毒診斷中的應(yīng)用評價(jià)[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2016， 37 （07）： 997-998.

[2]廖遠(yuǎn)泉，梅毒的實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)進(jìn)展[J].熱帶病與寄生蟲學(xué)，2016，14 （04）： 245-250.

[3]趙娜，劉瑞霞，李魯平等，捕獲法ELISA檢測TP-IgM抗體在各期梅毒診斷及療效評估中的應(yīng)用[J].中國病原生物學(xué)雜志，2015，10 （12）：1104-1107.

[4]程娟，段紅巖，李安信，梅毒流行病學(xué)和診療現(xiàn)狀分析[J].傳染病信息，2012 （01）：58-60.

[5]葉霞，徐清芳，魏靖等.TP-ELISA，TPPA，RPR聯(lián)合檢測在梅毒診斷中的應(yīng)用價(jià)值[J].熱帶醫(yī)學(xué)雜志，2017 （05）： 639-642.

[6]吳立春，代黃梅，谷仕艷.3種梅毒抗體檢測方法在梅毒診斷中的應(yīng)用分析[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2017， 38 （08）：1053-1055.

[7]胡利清，周玉球，梅毒螺旋體抗體兩種檢測方法的對比分析[J].中國實(shí)用醫(yī)藥，2017，12 （13）：50一51.

[8]袁曉華，胡惠萍，關(guān)于梅毒檢測程序的探討[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012， 33 （24）： 3065-3067.