蒲公英總黃酮制備技術研究進展*

許先猛 董文賓 盧 軍 （

1運城職業(yè)技術學院健康學院，山西運城044000） （2陜西科技大學化學與化工學院，陜西西安710021）（3漢中市食品藥品監(jiān)督管理局，陜西漢中723000）

蒲公英 （Taraxacum mongolicum Hand.-Mazz）屬于菊科蒲公英屬，是多年生草本植物。蒲公英別名婆婆丁、白鼓丁、黃花地丁、華花郎等。蒲公英具有清熱解毒、利尿通淋、消腫散結、健胃消炎和保肝利膽的功效，還有清熱活血的功能。現(xiàn)代研究表明，蒲公英中含有豐富的生物活性物質，包括黃酮類物質、多糖、酚類化合物、甾醇、生物堿、萜類、糖蛋白、低聚糖等，具有抑菌、抗氧化、抗腫瘤、調節(jié)激素水平、降血糖血脂、保護肝臟和前列腺等功能。蒲公英中富含黃酮類物質，且黃酮是蒲公英中研究較為普遍的功效成分，國內外學者對蒲公英中總黃酮的提取純化、生物活性等方面的研究越來越深入。蒲公英總黃酮制備技術是其研究的最基礎也是最重要的環(huán)節(jié)，本文對近些年國內外研究學者在蒲公英總黃酮提取工藝、純化方法和生物發(fā)酵等方面的制備技術研究進行了綜述，旨在為蒲公英總黃酮深度開發(fā)和研究提供理論基礎。

1 蒲公英總黃酮提取工藝

1.1 有機溶劑提取法

大部分黃酮易溶于極性較強的有機溶劑，如甲醇、乙酸乙酯、乙醇等。黃酮因含酚羥基，也溶于堿性水溶液中。蒲公英總黃酮提取常采用乙醇浸提的方法，此外甲醇、乙酸乙酯等也可作為蒲公英總黃酮提取溶劑。冉靚等采用正交法結合人工神經網絡的方法優(yōu)化乙醇提取蒲公英總黃酮工藝，在提取溫度75℃，乙醇濃度65%，料液比1∶30條件下提取3 h時提取率最高。王廷璞等在乙醇濃度45%，提取溫度70℃，料液比1∶10條件下提取1 h，蒲公英總黃酮提取率為26.21mg/g。李喜鳳等以20倍量的甲醇為溶劑，在溫度70℃條件下超聲提取10min，蒲公英總黃酮提取率為53.48mg/g。

1.2 超聲波輔助提取法

超聲波提取法是利用超聲波破壞植物細胞壁，加快植物細胞中有效成分的溶出，有提取率高、耗能低和速度快等優(yōu)勢。楊嵐等以75%乙醇為提取溶劑，在料液比1∶100，微波功率功率100W，提取溫度55℃的條件下超聲提取2次，每次30min，蒲公英花總黃酮含量為3.65%。吳燕等用響應面法優(yōu)化蒲公英中總黃酮超聲提取工藝，在乙醇濃度36%，料液比1：130，超聲時間42min的提取條件下，蒲公英總黃酮含量為3.10%。

1.3 微波輔助提取法

微波具有能夠對不同物質選擇性加熱的特性，加快物質的分子擴散運動，從而起到對有效成分提取和分離的作用。王婧怡等采用正交試驗優(yōu)化蒲公英總黃酮微波提取工藝，在乙醇濃度70%，微波功率462W，提取時間6min條件下提取3次，蒲公英總黃酮得率3.826%。楊兵等采用微波萃取方法提取蒲公英中總黃酮，在萃取溶液乙醇濃度70%，微波溫度70℃，微波加熱時間5min條件下，蒲公英總黃酮得率23.19mg/g。

1.4 雙水相體系萃取法

雙水相體系萃取法是利用不相溶的兩相（兩種高聚物或高聚物與無機鹽溶于水）穩(wěn)定體系對化學物質存在溶解性差異，從而對有效成分進行重新分配的過程。楊利民等利用聚乙二醇/硫酸銨雙水相體系萃取分離蒲公英總黃酮，優(yōu)化后萃取條件為：硫酸銨質量分數(shù)18%，聚乙二醇質量分數(shù)23%，溶液pH值5.34，萃取溫度25℃，在此條件下蒲公英中總黃酮的萃取率為5.47%。

1.5 其他提取方法

纖維素酶能夠破壞細胞壁從而使植物細胞內有效物質被提取和分離，能夠提高提取率，纖維素酶酶解法也是植物原料有效成分提取方法研究的重點。超臨界流體因具備特有屬性，對許多物質有較大溶解性，且超臨界CO2提取方法具有無毒無害、成本較低、提取率高等優(yōu)勢，超臨界CO2流體萃取技術在食品、藥品功能成分萃取方面的研究和應用也較為廣泛。

2 蒲公英總黃酮純化方法

2.1 大孔吸附樹脂純化法

大孔吸附樹脂因具有良好大孔網狀結構和較大比表面積，可以選擇性吸附有機物。趙惠茹等利用AB-8型樹脂吸附蒲公英總黃酮，從而對蒲公英總黃酮進行純化。蒲公英總黃酮大孔吸附樹脂吸附條件為：吸附液質量濃度9.2 g/L，溶液pH6.0，上樣液體積9 B V；洗脫條件為：4.5 B V體積的75%乙醇洗脫，流速為2 B V/h。在此條件下，蒲公英總黃酮產品精制度為372.2%。衛(wèi)建琮等采用D-101大孔吸附樹脂對蒲公英花總黃酮進行純化，大孔吸附樹脂純化條件為：上樣液質量濃度1.238mg/mL，溶液pH3.0，上樣量2 B V，2.0 B V/h流速吸附至飽和，用同樣流速4 B V體積的乙醇（50%～70%） 洗脫，所得蒲公英花總黃酮純度為92.56%。

2.2 聚酰胺柱吸附純化法

聚酰胺分子中含有的酰胺基可以與黃酮類化合物中的酚羥基形成氫鍵締合而進行選擇性吸附，因此利用聚酰胺樹脂對總黃酮進行純化技術研究比較廣泛，應用也比較成熟。陳景耀等利用聚酰胺柱吸附和純化蒲公英總黃酮，吸附后的聚酰胺柱使用蒸餾水充分洗滌，然后在洗脫速度為1.5mL/min條件下，用95%乙醇洗脫至無色，蒲公英總黃酮的純度為67.41%。

2.3 分階段萃取純化法

萃取法是利用物質在互不相溶的溶劑里溶解度不同，將物質進行分離和純化。薛燕斌等將蒲公英花提取液先用石油醚進行萃取，萃取3次，然后用乙酸乙酯萃取，最后用正丁醇進行萃取，蒲公英花乙酸乙酯萃取部位的黃酮含量為96.44%。

2.4 其他純化方法

高效液相色譜法也是將有效成分分離純化常用的方法，將不同極性的流動相溶液泵入色譜柱，不同組分在流動相和固定相之間進行吸附和解吸的過程，從而使不同組分進行分離和純化。高速逆流色譜法是色譜法的一個分支，常用于黃酮等有效成分的分離純化。此外，硅膠柱層析法、葡聚糖凝膠柱層析法、紙層析法、薄層層析法、活性炭吸附法等方法也廣泛應用于黃酮類化合物及其他有效成分的分離純化。

3 蒲公英總黃酮發(fā)酵制備技術

目前，對蒲公英提取制備總黃酮的研究較多且制備技術較為成熟，而利用微生物發(fā)酵制備總黃酮的研究報道較少。宗凱等研究了枯草芽孢桿菌、米根霉和黑曲霉對蒲公英粗提液發(fā)酵后蒲公英總黃酮含量的影響，研究發(fā)現(xiàn)蒲公英粗提液中接種黑曲霉能夠有效增加總黃酮含量。培養(yǎng)基配方：碳源為9%氨基乙酸，氮源為1.5%尿素，添加0.5%氯化鈣和0.5%硫酸銨，調整pH值為6.0，接種黑曲霉菌懸液，在溫度30℃，轉速183 r/min條件下發(fā)酵3 d，在此發(fā)酵條件下，蒲公英粗提液中總黃酮含量提高了將近5倍。

4 總結

蒲公英是一種藥食兩用植物，具有多種藥用和保健功效，在臨床應用和保健食品開發(fā)方面的研究和應用較為廣泛。蒲公英黃酮類物質是蒲公英中最主要的功效成分之一，具有抗氧化、清除自由基、抑菌、抗衰老、抗腫瘤、保護心肌細胞、保護腦組織等功能特性。蒲公英總黃酮制備是蒲公英總黃酮研究的必需步驟，開展蒲公英總黃酮制備技術研究對蒲公英功效成分、功能特性、臨床應用和保健食品開發(fā)等進一步研究具有非常重要的意義。

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