段彩靈

（東南大學(xué) 兒童發(fā)展與學(xué)習(xí)科學(xué)教育部重點實驗室，江蘇南京 210096）

海洛因和MAM是目前我國濫用人群最多的兩類毒品。在血液和尿液中，海洛因的代謝速度很快，吸食較長時間后很難被檢出，但其代謝物6-單乙酰嗎啡（6AM）可作為海洛因吸食的標(biāo)志物[1]。頭發(fā)可長時間保留海洛因、6AM和MAM的信息[2]。此外，頭發(fā)采集簡單、無創(chuàng)傷。

海洛因、6AM和MAM在頭發(fā)中含量低，需氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）和液相色譜-質(zhì)譜（LC-MS）等高靈敏度的方法才能檢出。但這些方法能檢測出頭發(fā)中的6AM和MAM，并不能檢出海洛因。究其原因，一是海洛因在頭發(fā)中的含量非常低；二是頭發(fā)樣本處理過程中共溶物濃度過高，產(chǎn)生較大的基質(zhì)效應(yīng)、較差的分離效果和較低的離子化效率，從而導(dǎo)致檢測限較高。因此，本文從頭發(fā)樣本處理方法、分離方法和分析方法三個角度，對近年來同時檢測頭發(fā)中海洛因和甲基苯丙胺方法進(jìn)行綜述，以期為今后的實驗室毒品分析提供借鑒。

1 樣本處理

頭發(fā)樣本的處理對分析物準(zhǔn)確檢測有顯著影響，尤其對含量較低的物質(zhì)影響更大。因此，選擇適當(dāng)?shù)臉颖咎幚矸椒ň拖喈?dāng)重要。本文將從頭發(fā)的采集、清洗、孵育和提純四個方面展開敘述。

1.1 頭發(fā)采集

由于后腦枕部的頭發(fā)生長較穩(wěn)定，通常采集該部位的發(fā)段用于毒品分析，以減少采樣誤差。收集后，用錫箔紙或紙質(zhì)信封包裝，放在室溫干燥通風(fēng)處保存。

1.2 頭發(fā)清洗

海洛因、6AM和MAM是外源性物質(zhì)，檢測前需清洗頭發(fā)樣本，以排除頭發(fā)被外在污染的可能。Orfanidis等使用1.5mL蒸餾水先震蕩清洗3 min，超聲5 min，然后用丙酮和二氯甲烷清洗頭發(fā)樣本[3]，檢出了MAM和6AM，但沒檢測出海洛因?？赡芤驗樵撗芯渴褂们逅搭^發(fā)，且清洗時間較長。水的極性較強且分子較小，有可能破壞頭發(fā)的表皮結(jié)構(gòu)，進(jìn)入內(nèi)部的皮質(zhì)層和髓質(zhì)層，導(dǎo)致頭發(fā)內(nèi)部的海洛因等分析物逸出，影響海洛因等分析物的準(zhǔn)確測量。故尋找一種適當(dāng)?shù)那逑丛噭┦直匾?/p>

在清洗頭發(fā)樣本時，使用丙酮或二氯甲烷較好，這兩種試劑屬于不含質(zhì)子的溶劑，極性較弱，不會破壞頭發(fā)結(jié)構(gòu)。而甲醇或磷酸鹽水溶液等屬于含質(zhì)子的溶劑，會加速頭發(fā)的膨脹，破壞頭發(fā)結(jié)構(gòu)。在使用此類溶劑清洗頭發(fā)樣本時，時間不宜過長。

1.3 頭發(fā)孵育

包埋在毛發(fā)角蛋白中的毒品，需先釋放為游離狀態(tài)方可檢測。MAM屬于堿性物質(zhì)，使用磷酸鹽緩沖劑釋放效率較高，但酸性水溶液會促進(jìn)海洛因和6AM進(jìn)一步分解，導(dǎo)致海洛因和6AM的含量減少，因此不適合海洛因的萃取。使用NaOH水溶液孵育會使頭發(fā)全部溶解，其中的物質(zhì)全部釋放，盡管待測物含量較高，但雜質(zhì)含量也較高，產(chǎn)生較大的基質(zhì)效應(yīng)。而含質(zhì)子的甲醇或乙腈等溶劑超聲水解能夠降低待測物在毛發(fā)毒品釋放過程中的水解，適合海洛因的萃取。因此，在同時檢測海洛因和甲基苯丙胺時，使用甲醇孵育頭發(fā)樣本可獲得較為干凈且含量較高的物質(zhì)。

1.4 分析物提純

從頭發(fā)中釋放出的物質(zhì)除了待測物外，還有其他干擾物，會影響目標(biāo)物的檢測，尤其對含量較低的分析物影響更大，因此，純化待測物的步驟是有必要的。Imbert[4]等采用SPE萃取分析物，同時檢出了頭發(fā)中的海洛因、6AM和MAM。Lendoiro[5]等人先使用LLE，再使用SPE萃取分析物，同時檢出了6AM和MAM，并沒有檢出海洛因?？赡苁窃诩兓跤哼^程中，含量較少的海洛因損失。所以，在同時檢測海洛因和MAM時，純化過程應(yīng)盡量簡單，最好僅使用一次SPE。

2 分離和檢測方法

盡管使用了適合的樣本處理方法，提純所得到的待測物含量依然很低。若要準(zhǔn)確測出頭發(fā)中的海洛因、6AM和MAM，需結(jié)合分離效果好和靈敏度高、選擇性高的檢測方法，如GC-MS、LC-MS等。

2.1 GC-MS

使用GC-MS檢測，樣本需要先氣化后才能被氣相分離；對于揮發(fā)性差或極性較大的樣本，需要采用衍生或裂解等方法增加揮發(fā)性。Orfanidis[3]等采用GC-MS同時檢測頭發(fā)中的6AM和MAM等物質(zhì)，使用N，O-二(三甲基硅烷基)-三氟乙酰胺衍生。該方法未檢出海洛因，但檢出了6AM和MAM，其檢測限分別為0.29 ng/mg和0.34 ng/mg。這可能是因為采用氣相色譜－質(zhì)譜法分析之前，對含有游離的氨基、羥基和羧基的毒品進(jìn)行衍生，增強其揮發(fā)性。但該衍生過程較為繁瑣，且不穩(wěn)定。鑒于GC-MS的不足，有必要尋找分離更好和檢測更穩(wěn)定的方法。

2.2 LC-MS

與GC-MS相比，LC-MS沒有衍生過程，前處理過程簡單，檢測結(jié)果穩(wěn)定且具有較好的重復(fù)性。其中，LC-MS/MS法對海洛因和甲基苯丙胺的檢測高效、靈敏，與之對應(yīng)的樣品前處理方法也最簡便和快速。Imbert[4]等采用LC-ESI-MS/MS同時檢測頭發(fā)中的海洛因、6AM和MAM。該方法使用3mL磷酸鹽緩沖液孵育頭發(fā)樣本，孵育液經(jīng)SPE純化，于LC-ESI-MS/MS系統(tǒng)進(jìn)樣。6AM和MAM的檢測限為0.005 ng/mg，海洛因的檢測限為0.010 ng/mg。然而，K?ys[1]等使用LC-APCI-MS/MS檢測頭發(fā)中的MAM和6AM，粉碎的頭發(fā)樣本經(jīng)甲醇孵育后吹干進(jìn)樣，獲得的檢測限均為0.2 ng/mg。但此方法未檢出海洛因。

因此，在同時檢測頭發(fā)中海洛因、6AM和MAM時，采用ESI離子源較為合適。因為ESI可用于分析離子型化合物、極性化合物、難揮發(fā)或熱敏感化合物。而海洛因、6AM和MAM的極性較大，使用LC-ESIMS/MS分析較為合適。

3 結(jié)論

同時檢測頭發(fā)中海洛因、6AM和MAM時，頭發(fā)樣本適合經(jīng)丙酮或者二氯甲烷清洗，然后用甲醇孵育，經(jīng)SPE純化。LC-ESI-MS/MS的檢測靈敏度高、準(zhǔn)確度好，樣品前處理方法也最簡便和快速，滿足了頭發(fā)中海洛因和甲基苯丙胺的檢測需求。

[1]K?ys M,Rojek S,Kulikowska J,et al.Usefulness of Multi-parameter opiates-amphetamines-cocainics Analysis in Hair of Drug Users for the Evaluation of an Abuse Profile by Means of LC-APCI-MS-MS[J].Journal of Chromatography B,2007,854(1-2):299-307.

[2]Pragst F,Balikova M A.State of the Art in Hair Analysis for Detection of Drug and Alcohol Abuse[J].Clinica chimica acta; International Journal of Clinical Chemistry,2006,370(1-2):17-39.

[3]Orfanidis A,Mastrogianni O,Koukou A,et al.A GC-MS Method for the Detection and Quantitation of Ten Major Drugs of Abuse in Human Hair Samples[J].Journal of Chromatography B Analytical Technologies in the Biomedical & Life Sciences,2016(1047):141-150.

[4]Imbert L,Dulaurent S,Mercerolle M,et al.Development and Validation of a Single LC-MS/MS Assay Following SPE for Simultaneous Hair Analysis of Amphetamines,Opiates,Cocaine and Metabolites[J].Forensic Science International,2014,234(1):132-138.

[5]Lendoiro E,óscar Quintela,Castro A D,et al.Target Screening and Confirmation of 35 Licit and Illicit Drugs and Metabolites in Hair by LC-MSMS[J].Forensic Science International,2012,217(1-3):207-215.