骨肉瘤組織XIAP蛋白表達(dá)臨床意義的研究

李從達(dá) 萬(wàn)磊 林祥波 王賓 王代憲

【摘要】 目的 綜合分析骨肉瘤組織X連鎖凋亡抑制蛋白（XIAP）表達(dá)的臨床意義， 深入研究骨肉瘤發(fā)生和發(fā)展相關(guān)作用。方法 28例骨肉瘤組織標(biāo)本作為實(shí)驗(yàn)組， 28例正常骨組織作為對(duì)照組。兩組均采用免疫組織化學(xué)SP染色法。比較兩組XIAP蛋白陽(yáng)性表達(dá)情況， 觀察XIAP蛋白陽(yáng)性表達(dá)與骨肉瘤組織患者臨床參數(shù)關(guān)系。結(jié)果 實(shí)驗(yàn)組XIAP蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為64.29%， 對(duì)照組XIAP蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為0， 實(shí)驗(yàn)組XIAP蛋白陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于對(duì)照組， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。XIAP蛋白高表達(dá)與XIAP蛋白低表達(dá)患者性別、年齡比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；XIAP蛋白高表達(dá)與XIAP蛋白低表達(dá)患者病理分型和臨床分期比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論 骨肉瘤組織XIAP蛋白呈現(xiàn)高表達(dá)， 對(duì)骨肉瘤患者的預(yù)后具有參考價(jià)值。

【關(guān)鍵詞】 骨肉瘤組織；X連鎖凋亡抑制蛋白；表達(dá)；臨床意義

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2018.09.005

【Abstract】 Objective To comprehensively analyze the clinical significance of X-linked inhibitor of apoptosis protein （XIAP） expression in osteosarcoma tissue， and further study the related role of occurrence and development. Methods There were 28 osteosarcoma tissue as experimental group， and 28 normal bone tissue as control group. Immunohistochemistry SP staining was used in both groups. The positive expression of XIAP protein in two groups was compared， and the relationship between the positive expression of XIAP and the clinical parameters of osteosarcoma tissue patients was observed. Results The experimental group had positive expression of XIAP as 64.29%， which was 0 in the control group. The control group had obviously higher positive expression of XIAP than the control group， and the difference was statistically significant （P<0.05）. There was no statistically significant difference in gender and age between high and low expression of XIAP patients （P>0.05）. There was no statistically significant difference in pathological classification and clinical staging between high and low expression of XIAP patients （P>0.05）. Conclusion The high expression of XIAP in osteosarcoma tissue is of reference value for the prognosis of osteosarcoma patients.

【Key words】 Osteosarcoma tissue； X-linked inhibitor of apoptosis protein； Expression； Clinical significance

骨肉瘤是較為常見(jiàn)的一種惡性骨腫瘤疾病， 好發(fā)于青少年人群， 具有以下幾種臨床特點(diǎn)：①侵襲性非常強(qiáng)；②預(yù)后效果較差；③轉(zhuǎn)移率高[1]。為了能夠研究出骨肉瘤預(yù)后指標(biāo)， 相關(guān)學(xué)者進(jìn)行了大量的臨床研究。XIAP蛋白是最新發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞凋亡調(diào)節(jié)因子， 在腸癌、胰腺癌和肺癌患者的腫瘤細(xì)胞表達(dá)中呈現(xiàn)高表達(dá)， 而XIAP蛋白的高低表達(dá)水平與腫瘤的預(yù)后效果密切相關(guān)[2]。但是， XIAP蛋白在骨肉瘤中的表達(dá)和預(yù)后效果等研究資料較少。本文將綜合分析骨肉瘤組織XIAP蛋白表達(dá)的臨床意義， 深入研究骨肉瘤發(fā)生和發(fā)展相關(guān)作用， 為治療骨肉瘤患者提供科學(xué)的數(shù)據(jù)參考?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取本院2015年11月～2017年11月收治的28例骨肉瘤組織標(biāo)本作為實(shí)驗(yàn)組， 選取同一階段28例正常骨組織作為對(duì)照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①所有入組者均在知情下參與本次研究；②實(shí)驗(yàn)組均經(jīng)過(guò)病理學(xué)、臨床研究和影像學(xué)等確診；③兩組均進(jìn)行手術(shù)治療且在標(biāo)本采集之前未實(shí)施放化療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①中途退出本次研究者；②精神障礙者。實(shí)驗(yàn)組中男19例， 女9例；年齡12.22～20.32歲， 平均年齡（16.27±3.32）歲；體重36.33～55.15 kg， 平均體重（45.74±10.13）kg；骨肉瘤組織類(lèi)型：2例腓骨、10例肱骨、8例股骨、8例脛骨；Enneking臨床分期：Ⅰ期6例， ⅡA期7例， ⅡB期10例， Ⅲ期5例。對(duì)照組中男21例， 女7例；年齡12.25～20.29歲， 平均年齡（16.27±3.35）歲；體重36.35～55.12 kg， 平均體重（45.73±10.16）kg。兩組性別比例、平均體重、平均年齡等一般資料比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 實(shí)驗(yàn)方法 兩組入選者均采用免疫組織化學(xué)SP（組織標(biāo)本用10%甲醛浸泡， 石蠟包埋， 常規(guī)厚4 μm連續(xù)切片， 常規(guī)脫蠟、水化， 滅活）染色法， 滴入XIAP蛋白多克隆抗體， 其他試劑（DAB顯色試劑盒、EDTA抗原修復(fù)液和PBS粉劑）由北京某醫(yī)院病理科所提供。操作過(guò)程中需要嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)， 以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。

1. 3 觀察指標(biāo)及判定標(biāo)準(zhǔn) 比較兩組XIAP蛋白陽(yáng)性表達(dá)情況， 觀察XIAP蛋白陽(yáng)性表達(dá)與骨肉瘤組織患者臨床參數(shù)關(guān)系。XIAP蛋白表達(dá)：根據(jù)細(xì)胞著色程度評(píng)分：0分為不著色、1分為淺黃色、2分為棕黃色、3分為棕褐色。隨機(jī)觀察10個(gè)高倍視野（×400）， 計(jì)數(shù)100個(gè)骨肉瘤細(xì)胞， 再計(jì)算陽(yáng)性百分率；各視野計(jì)數(shù)相加之和除以10作為最后計(jì)分。綜合計(jì)分（顏色計(jì)分與陽(yáng)性細(xì)胞百分率的乘積為每例組織染色的綜合計(jì)分）中低水平表達(dá)為0～1分， 高水平表達(dá)為>1分。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0計(jì)學(xué)軟件對(duì)研究數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 兩組XIAP蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較 實(shí)驗(yàn)組XIAP蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為64.29%（18/28）， 對(duì)照組XIAP蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為0（0/28）， 實(shí)驗(yàn)組XIAP蛋白陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于對(duì)照組， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

2. 2 XIAP蛋白陽(yáng)性表達(dá)與骨肉瘤組織患者臨床參數(shù)關(guān)系 XIAP蛋白高表達(dá)中男10例、女4例， XIAP蛋白低表達(dá)中男9例、女5例；XIAP蛋白高表達(dá)中年齡<18歲有6例、≥18歲有8例， XIAP蛋白低表達(dá)中年齡<18歲有7例、≥18歲有7例；XIAP蛋白高表達(dá)與XIAP蛋白低表達(dá)患者性別、年齡比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。XIAP蛋白高表達(dá)與XIAP蛋白低表達(dá)患者病理分型和臨床分期比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見(jiàn)表1。

3 討論

骨肉瘤是最為常見(jiàn)的原發(fā)性骨腫瘤之一， 在化療之前， 5年內(nèi)的骨肉瘤生存率僅占18.83%。隨著影像學(xué)技術(shù)和外科技術(shù)的不但發(fā)展， 5年內(nèi)的骨肉瘤生存率上升到58.98%～62.33%[3]。常見(jiàn)的骨肉瘤標(biāo)本一般為手術(shù)切除標(biāo)本， 化療會(huì)影響到XIAP水平的表達(dá)敏感性?；诖?， 為了消除化療產(chǎn)生的影響， 必須對(duì)骨肉瘤化療之前的穿刺標(biāo)本加以研究分析， 從而方便認(rèn)清X(qián)IAP水平表達(dá)和骨肉瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)系[4]。

XIAP是一種獨(dú)特的處于細(xì)胞增殖和細(xì)胞死亡分界面的分子， XIAP能夠顯著抑制凋亡蛋白酶， 使得腫瘤細(xì)胞能夠逃避細(xì)胞周期檢測(cè)點(diǎn)的監(jiān)控， 從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的分裂和增殖。XIAP在胰腺癌細(xì)胞系和大腸癌細(xì)胞系中呈現(xiàn)高表達(dá)， 在皮膚纖維原細(xì)胞系和正常人乳腺上皮細(xì)胞系中呈現(xiàn)低表達(dá)[5， 6]。在急性髓性白細(xì)胞疾病中， XIAP的異常增高與預(yù)后效果不良密切相關(guān)。除此之外， XIAP表達(dá)增高與生存期限過(guò)短密切相關(guān)， 高表達(dá)XIAP水平也是胰腺癌化療耐藥的主要原因。本文研究結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組XIAP蛋白陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于對(duì)照組， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。研究資料顯示[5]， XIAP與多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。通過(guò)上述數(shù)據(jù)不難發(fā)現(xiàn) ， XIAP在正常骨組織和骨良性病變組織表達(dá)中呈現(xiàn)低表達(dá)水平， 在骨肉瘤組織中表達(dá)量顯著上升。在骨肉瘤組織中， 通過(guò)采取放射治療方法和化學(xué)治療方法等， 促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡， 在一定程度上釋放骨肉瘤組織對(duì)放射治療和化學(xué)治療不敏感的原因。

本文研究結(jié)果還顯示， XIAP蛋白高表達(dá)與XIAP蛋白低表達(dá)患者性別、年齡比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；XIAP蛋白高表達(dá)與XIAP蛋白低表達(dá)患者病理分型和臨床分期比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。研究資料顯示， 胰腺癌細(xì)胞系中的XIAP表達(dá)與化療耐藥密切相關(guān)， XIAP在胰腺癌細(xì)胞系中呈現(xiàn)高表達(dá)， 在正常細(xì)胞系中呈現(xiàn)極低表達(dá)， 與此同時(shí)對(duì)腫瘤細(xì)胞的耐藥性也產(chǎn)生一定影響， XIAP蛋白水平表達(dá)能夠作為評(píng)價(jià)骨肉瘤生物學(xué)行為的一個(gè)獨(dú)立危險(xiǎn)因

素[7]。通過(guò)研究資料證實(shí)， XIAP在骨肉瘤組織中的表達(dá)水平與腫瘤大小以及腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[8， 9]。XIAP水平表達(dá)能夠抑制腫瘤細(xì)胞的分化， 積極誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡， 組織細(xì)胞進(jìn)入到G0期。XIAP對(duì)惡性腫瘤的調(diào)節(jié)與其自身特殊結(jié)構(gòu)密切相關(guān)， XIAP由N端桿狀病毒的IAP重復(fù)區(qū)域和C端環(huán)狀鋅指結(jié)構(gòu)所組成， 分別由4個(gè)閱讀框轉(zhuǎn)錄翻譯而成。XIAP是一種抑制細(xì)胞凋亡的基因， 編碼產(chǎn)物XIAP蛋白的過(guò)度表達(dá)會(huì)抑制細(xì)胞凋亡， 最終促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。研究資料顯示， 運(yùn)用免疫組化方法檢測(cè)人胎盤(pán)滋養(yǎng)細(xì)胞的XIAP蛋白表達(dá)水平[10]。從上述研究結(jié)果不難看出， XIAP蛋白水平在妊娠早期滋養(yǎng)層中過(guò)于旺盛表達(dá)， 在妊娠晚期時(shí)， XIAP水平表達(dá)顯著下降， XIAP的表達(dá)與細(xì)胞增殖密切相關(guān)。XIAP在人類(lèi)白血病和肝癌患者和子宮頸癌患者中有增高表達(dá)。XIAP抑制凋亡的作用對(duì)骨肉瘤的發(fā)生具有顯著作用， 因此提示XIAP抑制細(xì)胞凋亡的作用與早期骨肉瘤分子事件密切相關(guān)。

綜上所述， 骨肉瘤組織XIAP蛋白呈現(xiàn)高表達(dá)， 對(duì)骨肉瘤患者的預(yù)后具有參考價(jià)值。

參考文獻(xiàn)

[1] 張龍， 王景峰， 劉寶平， 等. 骨肉瘤組織中XIAP和NF-κB的表達(dá)變化及意義. 山東醫(yī)藥， 2016， 56（45）：57-59.

[2] 尹軍強(qiáng)， 謝顯彪， 溫麗麗， 等. 華蟾酥毒基誘導(dǎo)骨肉瘤細(xì)胞凋亡的體外實(shí)驗(yàn)研究. 中華骨科雜志， 2014， 34（4）：472-477.

[3] 何畔， 梁珊， 王愉思， 等. RNAi沉默XIAP基因抑制MG-63細(xì)胞增殖及其分子機(jī)制. 江蘇醫(yī)藥， 2011， 37（2）：148-151.

[4] 申瑩瑩， 蘇小桃， 歐軍， 等. 二甲雙胍聯(lián)合異羥肟酸對(duì)骨肉瘤細(xì)胞增殖凋亡的影響. 中南醫(yī)學(xué)科學(xué)雜志， 2016， 44（1）：11-15.

[5] 邢旻琰， 何愛(ài)娜， 余文悉， 等. 骨肉瘤組織XIAP蛋白表達(dá)臨床意義的研究. 中華腫瘤防治雜志， 2013， 20（3）：214-216， 220.

[6] 楊運(yùn)發(fā)， 杜洪， 王建煒， 等. 凋亡抑制蛋白XIAP在骨肉瘤組織中的表達(dá)及意義. 中國(guó)骨與關(guān)節(jié)雜志， 2008， 7（3）：000146-000148.

[7] 鄧超. XIAP和caspase-3在骨肉瘤中的表達(dá)及其意義. 哈爾濱醫(yī)科大學(xué)， 2008.

[8] 楊運(yùn)發(fā)， 杜洪， 黃蘋(píng)， 等. XIAP表達(dá)在ⅡB期骨肉瘤早期預(yù)后的意義. 中國(guó)骨科臨床與基礎(chǔ)研究雜志， 2009， 1（1）：62-65.

[9] 楊湘丞. XIAP和Caspase-3在骨肉瘤中的表達(dá)及意義. 中南大學(xué)， 2009.

[10] 鄧超， 曲國(guó)蕃. XIAP和Caspase-3在骨肉瘤中的表達(dá)及其意義. 哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)， 2010， 44（2）：156-159.

[收稿日期：2017-12-13]