朱 玲 青海省祁連縣野牛溝鄉(xiāng)畜牧獸醫(yī)站 810499

牛病毒性腹瀉（Bovine viral diarrhea，BVD）是由牛病毒性腹瀉病毒 （Bovine viral diarrhea virus，BVDV）引起牛的一種急性、熱性傳染病[1]，牛感染BVDV后主要表現(xiàn)為腹瀉，進(jìn)行性消瘦，脫水，嚴(yán)重的可引起死亡[2]。BVDV可以導(dǎo)致免疫耐受和免疫抑制，母畜流產(chǎn)和奶牛產(chǎn)奶量下降，以及生產(chǎn)性能下降，每年都給全球養(yǎng)牛業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失[3-4]。近幾年來(lái)，我國(guó)BVDV的感染情況日益嚴(yán)重，為了掌握青海牦牛BVDV的感染情況，為青海牦牛BVDV的綜合防控提供參考依據(jù)，本研究對(duì)采集于青海省6個(gè)規(guī)模牦牛飼養(yǎng)場(chǎng)和11戶(hù)散養(yǎng)戶(hù)的559份血清樣品進(jìn)行了ELISA抗體檢測(cè)?，F(xiàn)將整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程介紹如下。

1 材料和方法

（1）血清樣品來(lái)源。2017年3～12月，采集于青海省6個(gè)規(guī)模牦牛飼養(yǎng)場(chǎng)和11戶(hù)散養(yǎng)戶(hù)的血清樣品共計(jì)559份。

（2）試劑與儀器。牛病毒性腹瀉病毒ELISA抗體檢測(cè)試劑盒為美國(guó)IDEXX公司產(chǎn)品；ELx800酶標(biāo)儀為美國(guó)BIOtek公司產(chǎn)品。

（3）檢測(cè)方法。按照牛病毒性腹瀉病毒ELISA抗體檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，首先在96孔酶標(biāo)板每個(gè)孔加入100μL樣品稀釋液，之后在檢測(cè)孔加入25μL血清樣品，在陽(yáng)性對(duì)照孔和陰性對(duì)照孔中各加入25μL陽(yáng)性和陰性對(duì)照血清，加完后在室溫下作用90分鐘，之后棄去酶標(biāo)板液體，每孔加入300μL洗液洗5次，最后一次洗完拍干。在每個(gè)酶標(biāo)孔加入100μL酶標(biāo)抗體，室溫下作用30分鐘，之后棄去酶標(biāo)板液體，每孔加入300μL洗液洗5次，最后一次洗完拍干。每孔加入100μL TMB底物，室溫下避光10分鐘H歐諾個(gè)顯色，之后每孔加入100μL終止液終止反應(yīng)，酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)讀數(shù)，記錄分析檢測(cè)結(jié)果。

（4）結(jié)果判定。按照牛病毒性腹瀉病毒ELISA抗體檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)要求，陰性對(duì)照平均值≤0.25，陽(yáng)性對(duì)照平均值-陰性對(duì)照平均值≥0.15，試驗(yàn)結(jié)果成立，計(jì)算檢測(cè)血清樣品的S/P值。公式為S/P=樣品OD值-陰性平均OD值/陽(yáng)性平均OD值-陰性平均OD值。S/P≥0.3，檢測(cè)樣品為陽(yáng)性；S/P＜0.2， 檢測(cè)樣品為陰性；0.2≤S/P＜0.3，檢測(cè)樣品為可疑；可疑樣品需要重新檢測(cè)。

2 結(jié)果和分析

試驗(yàn)結(jié)果顯示，6個(gè)規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)和11戶(hù)散養(yǎng)戶(hù)均存在BVDV抗體陽(yáng)性牛，陽(yáng)性率達(dá)100%。共計(jì)檢測(cè)559份樣品，陽(yáng)性樣品為202份，平均陽(yáng)性率為36.14%。其中，6個(gè)規(guī)模牦牛場(chǎng)的BVDV血清抗體陽(yáng)性率最高的為47.27%，最低的為16.67%，平均陽(yáng)性率為34.19%。11戶(hù)散養(yǎng)戶(hù)的BVDV血清抗體陽(yáng)性率最高的為57.89%，最低的為27.78%，平均陽(yáng)性率為39.42%。散養(yǎng)戶(hù)與規(guī)模牛場(chǎng)相比，無(wú)論是最高陽(yáng)性率還是最低陽(yáng)性率都高于規(guī)模牛場(chǎng)，其中散養(yǎng)戶(hù)的平均陽(yáng)性率較規(guī)模養(yǎng)牛場(chǎng)高5.23個(gè)百分點(diǎn)。因采集血清樣品的牦牛養(yǎng)殖場(chǎng)和散養(yǎng)戶(hù)均未免疫過(guò)BVDV疫苗，該抗體陽(yáng)性表明均由BVDV野毒感染所致。

3 討論

BVDV是牛群普遍易感的疾病，也是危害養(yǎng)牛業(yè)最主重的疾病之一，BVDV抗體普查具有十分重要的意義，通過(guò)BVDV抗體普查可以了解牛群BVDV感染情況，由于本病的臨床癥狀不明顯，有時(shí)還不表現(xiàn)臨床癥狀，在實(shí)際生產(chǎn)中常常不易診斷。從青海牦牛的血清BVDV抗體檢測(cè)結(jié)果可以看出，559份血清樣品的平均陽(yáng)性率為36.14%，規(guī)模牦牛場(chǎng)的陽(yáng)性率為34.19%，散養(yǎng)戶(hù)的陽(yáng)性率為39.42%，散養(yǎng)戶(hù)的平均陽(yáng)性率較規(guī)模牛場(chǎng)高5.23個(gè)百分點(diǎn)，說(shuō)明青海牦牛存在嚴(yán)重的BVDV污染，尤其是散養(yǎng)戶(hù)牛的感染狀況更為嚴(yán)重。BVDV感染后可以引起本病在牛群中潛伏感染，也可以引起免疫抑制，雖然牛暫時(shí)不發(fā)病，但在受到應(yīng)激刺激或遇惡劣氣候時(shí)，就可以引發(fā)病毒性腹瀉的急性感染。建議根據(jù)檢測(cè)結(jié)果對(duì)牛群進(jìn)行凈化處理，將BVDV抗體陽(yáng)性的牛逐漸淘汰，更不能留作種用。

BVDV在牛群中的潛伏感染狀況常常導(dǎo)致本病很難凈化，本病可以通過(guò)母牛垂直傳播，感染BVDV的母牛會(huì)出現(xiàn)產(chǎn)死胎及弱仔現(xiàn)象，嚴(yán)重影響規(guī)模養(yǎng)牛場(chǎng)的發(fā)展。隨著B(niǎo)VDV在我國(guó)感染情況的日益嚴(yán)重，各大養(yǎng)牛場(chǎng)都應(yīng)該對(duì)本病引起重視。對(duì)BVDV的防治需做到以下幾點(diǎn)。首先要加強(qiáng)對(duì)新購(gòu)牛的檢疫，最好堅(jiān)持自繁自養(yǎng)，對(duì)引進(jìn)的犢牛一定要做好BVDV抗體檢測(cè)工作，只有血清抗體檢測(cè)顯示陰性的方可引進(jìn)。防治BVDV最有效的手段就是牛群BVDV凈化，逐步淘汰陽(yáng)性牛。其次，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，經(jīng)常消毒，保持良好的環(huán)境衛(wèi)生。及時(shí)清理糞便，保持牛舍通風(fēng)良好。本病重在預(yù)防，發(fā)病后目前主要采取對(duì)癥治療、及時(shí)補(bǔ)液防止脫水等措施。