趙昌通　劉妙錚　張世華　王浩巖　楊德森

【摘要】 目的：探究ADAM-15在WHOⅠ級腦膜瘤中的表達情況，進一步分析其在WHOⅠ級腦膜瘤侵襲性生長中的意義。方法：收集63例WHOⅠ級腦膜瘤標本（33例有侵襲性，30例無侵襲性）為試驗組，21例正常腦膜組織為對照組。通過免疫組織化SP法檢測去整合素-金屬蛋白酶15（A Disintegrin and Metalloproteinase 15，ADAM-15）在上述不同腦膜組織中的表達情況。結果：試驗組ADAM-15的陽性表達率高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（ 字2=17.296，P<0.001）。侵襲性組ADAM-15的陽性表達率高于非侵襲性組，差異有統(tǒng)計學意義（ 字2=8.376，P=0.004）。侵襲性組ADAM-15的陽性表達率高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（ 字2=24.661，P<0.001）。非侵襲性組ADAM-15的陽性表達率高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（ 字2=6.801，P=0.009）。結論：ADAM-15在WHOⅠ級腦膜瘤侵襲性生長中起一定作用。

【關鍵詞】 ADAM-15； 腦膜瘤； 侵襲性； 免疫組織化學

Expression of ADAM-15 in WHOⅠ Meningiomas and Its Correlation with Invasiveness/ZHAO Changtong，LIU Miaozheng，ZHANG Shihua，et al.//Medical Innovation of China，2018，15（07）：035-038

【Abstract】 Objective：To investigate the expression of ADAM-15 in WHOⅠ meningiomas and its significance in the invasive growth of WHOⅠ meningiomas.Method：63 cases of WHOⅠ meningioma （33 cases with invasive and 30 non invasiveness） were collected as experimental group，21 cases of normal meningeal tissue served as control group.Immunohistochemical SP method was used to detect the expression of ADAM-15 in different meninges.Result：The positive expression rate of ADAM-15 in the experimental group was higher than that in the control group，the difference was statistically significant（ 字2=17.296，P<0.001）.The positive expression rate of ADAM-15 in invasive group was higher than that in non-invasive group，the difference was statistically significant（ 字2=8.376，P=0.004）.The positive expression rate of ADAM-15 in invasive group was higher than that in control group，the difference was statistically significant（ 字2=24.661，P<0.001）.The positive expression rate of ADAM-15 in non-invasive group was higher than that in control group，the difference was statistically significant（ 字2=6.801，P=0.009）.Conclusion：ADAM-15 plays a role in the invasive growth in WHOⅠ meningioma.

【Key words】 ADAM-15； Meningioma； Invasiveness； Immunohistochemistry

First-authors address：Graduate Department of Jiamusi University，Jiamusi 154007，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2018.07.010

腦膜瘤是顱內常見的良性腫瘤，約占原發(fā)于顱內腫瘤的30%[1]。腦膜瘤通常為良性腫瘤，但其具有廣泛的臨床特征和組織學分類，根據WHO中樞神經系統(tǒng)腫瘤的分類[2]，將腦膜瘤分為三個級別共15個亞型，良性腦膜瘤（WHOⅠ級）復發(fā)和侵襲性生長的風險低，非典型腦膜瘤（WHOⅡ級）更可能復發(fā)，而間變性（惡性）腦膜瘤（WHOⅢ級）復發(fā)的可能性最大和/或具有更強的侵襲性。良性腦膜瘤在組織病理學方面無明顯差別，但有一部分良性腦膜瘤細胞表現(xiàn)出向周圍組織浸潤生長的侵襲性生物行為。腦膜瘤目前的治療手段仍以手術切除為主，雖然良性腦膜瘤理論上手術全切可以治愈，但是部分良性腦膜瘤因其對周圍組織的浸潤而無法行全切手術，部分腦膜瘤即使手術全切，術后也有一定的復發(fā)率。研究良性腦膜瘤侵襲性生長的相關因素，尋找有效的診斷及預測其侵襲性的生物學指標非常重要。去整合素-金屬蛋白酶15（A Disintegrin and Metalloproteinase 15，ADAM-15）是一種Zn2+依賴的Ⅰ型多結構域跨膜內肽酶，屬于ADAM家族20多個成員中重要的一員[3-4]，活化的ADAM-15參與細胞生長以及細胞外基質（ECM）中Ⅳ型膠原和明膠的蛋白水解[5-6]。ADAM-15參與了人類許多疾病的發(fā)展，尤其是在腫瘤的侵襲性生長中起非常重要的作用。本試驗通過檢測ADAM-15在WHOⅠ級腦膜瘤中的表達情況，研討ADAM-15在WHOⅠ級腦膜瘤侵襲性過程中的作用，為臨床提供有價值的WHOⅠ級腦膜瘤侵襲性生長的預測因子，現(xiàn)將研究結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集佳木斯大學附屬第一醫(yī)院神經外科2012年12月-2016年12月經手術切除（術前均未行放、化療及免疫治療，腫瘤切除程度為辛普森Ⅰ～Ⅲ）且臨床資料完整的63例經病理證實的WHOⅠ腦膜瘤病理組織標本（根據術中情況及術后病理結果，確定腦膜瘤對周圍組織有無侵犯，侵襲性者33例，無侵襲性者30例）為試驗組。收集佳木斯大學附屬第一醫(yī)院神經外科2017年1-9月收治的顱腦外傷患者受傷后3 h內行急診手術，術中內減壓廢棄的正常腦膜組織21例為對照組。以上患者均需排除伴隨重大全身性疾病和其他部位腫瘤者，且手術切除的所有標本均經病理明確診斷?；颊呔橥?，該研究已經醫(yī)院倫理學委員會批準。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑 生工生物工程（上海）股份有限公司的一抗，Anti-ADAM15 antibody，北京中杉金橋生物技術有限公司的二抗PV-8000-1。

1.2.2 免疫組化 將標本連續(xù)切片、脫蠟、水化，將標本抗原熱修復，滅活內源性過氧化物酶，然后滴入一抗，電熱恒溫干燥箱孵育4 h，經PBS緩沖液沖洗3次后再滴加二抗PV-8000-1，再次孵育30 min，上述步驟間隔均需用PBS緩沖液沖洗，DAB顯色約10 min，蘇木素復染、脫水、透明，最后封片。

1.3 結果判定 由2位副主任級別及以上的病理醫(yī)師獨立審片，記錄結果。ADAM-15的陽性表達是胞質出現(xiàn)棕黃色顆?；驁F塊，切片在高倍顯微鏡（×400）下觀察。分別計算陽性細胞百分比和染色強度，兩項結果的乘積作為評分標準。（1）陽性細胞比例：陰性記作0分，陽性細胞百分比≤10%記作1分，11%～50%計作2分，51%～75%記作3分，>75%記作4分；（2）細胞染色強度：無染色記作0分，淡黃色記作1分，棕黃色記作2分，棕褐色記作3分。兩項相乘，積分≤3分為陰性（-），4～6分為弱陽性（+）；7～9分為中度陽性（++），10～12分為強陽性（+++）。

1.4 統(tǒng)計學處理 運用SPSS 22.0 統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析，計數(shù)資料以率（%）表示，比較采用 字2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

ADAM-15的陽性表達是胞質出現(xiàn)棕黃色顆?；驁F塊。（1）63例良性腦膜瘤病理標本中，39例出現(xiàn)了ADAM-15的陽性表達，陽性率為61.90%（39/63）。（2）33例侵襲性良性腦膜瘤中，26例出現(xiàn)了陽性表達，陽性率為78.79%（26/33），30例無侵襲性良性腦膜瘤中，13例出現(xiàn)了陽性表達，陽性率為43.33%（13/30）。（3）21例正常腦膜組織中，2例中出現(xiàn)ADAM-15弱陽性表達，陽性表達率為9.52%（2/21）。試驗組ADAM-15的陽性表達率高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（ 字2=17.296，P<0.001），見表1。侵襲性組ADAM-15的陽性表達率高于非侵襲性組，差異有統(tǒng)計學意義（ 字2=8.376，P=0.004），見表2。侵襲性組ADAM-15的 陽性表達率高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（ 字2=24.661，P<0.001）；非侵襲性組ADAM-15的陽性表達率高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（ 字2=6.801，P=0.009）。ADAM-15在侵襲性良性腦膜瘤、非侵襲性良性腦膜瘤、正常腦膜組織中的陽性表達率依次遞增。

3 討論

ADAM-15參與了人類許多疾病的發(fā)展，尤其是在腫瘤的侵襲性生長中起非常重要的作用。ADAM-15的mRNA和/或蛋白水平在多種惡性腫瘤中表達上調，包括乳腺癌、胃癌、肺癌、胰腺癌和前列腺癌，而且ADAM-15也參與了包括前列腺癌和乳腺癌在內的多種腫瘤的轉移性進展[3，5，7]。目前關于ADAM家族成員在腦腫瘤中的研究還局限在膠質瘤中，關于ADAMs在腦膜瘤中的研究國內尚未見報道，國外僅通過定量實時聚合酶鏈式反應（qPCR）來評估17例良性腦膜瘤中8種ADAMs的表達情況，其研究證明ADAM-15的mRNA在良性腦膜瘤中過表達[8]。ADAMs可以通過調節(jié)細胞增殖、侵襲、血管生成和細胞凋亡而參與腫瘤進展的不同階段，因為它們可以調節(jié)生長因子活性以及整聯(lián)蛋白功能[5，9-11]，作為ADAM家族中重要的一員，ADAM-15在腫瘤進展和轉移中具有不同的生物學功能，如促進新血管形成、降解ECM、組織重塑、減少細胞與細胞間黏附以及調節(jié)促進腫瘤生長和存活的各種細胞因子和生長因子[3，12-13]。在本研究中，ADAM-15在良性腦膜瘤中的陽性表達率為61.90%（39/63），在正常腦膜組織中的陽性表達率為9.52%（2/21），差異有統(tǒng)計學意義（ 字2=17.296，P<0.001）。本研究結果表明，ADAM-15在腦膜瘤中高表達，這表明其能夠促進腦膜瘤的發(fā)生。雖然目前尚不清楚ADAM-15在腦膜瘤發(fā)生中的具體機制，但是ADAM-15作為ADAM家族中重要的一員，它可以調節(jié)細胞增殖、促進新生血管形成并可以調節(jié)促進腫瘤生長和存活的各種細胞因子和生長因子，這可能是ADAM-15在腦膜瘤發(fā)生中的重要機制。在本研究中，ADAM-15在侵襲性良性腦膜瘤中陽性表達率為78.79%（26/33）、在非侵襲性良性腦膜瘤中為43.33%（13/30），均高于正常腦膜組織的9.52%（2/21），兩兩比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。根據試驗結果，可以得出ADAM-15不僅可以促進腦膜瘤的發(fā)生，還可以促進良性腦膜瘤向周圍組織的浸潤性生長。雖然ADAM-15在良性腦膜瘤侵襲性中的作用機制目前尚不清楚，但是ADAM-15作為一種Zn2+依賴型的Ⅰ型跨膜內肽酶，其在降解Ⅳ型膠原和明膠、促進新血管形成、減少細胞與細胞間黏附中發(fā)揮著重要的作用，根據研究結果及ADAM-15在其他腫瘤發(fā)生及發(fā)展中的作用推測，ADAM-15對ECM的降解以及促進血管生成的作用在其促進良性腦膜瘤侵襲性生長中發(fā)揮著重要作用。

腦膜瘤目前主要的治療手段仍以手術切除為主，雖然良性腦膜瘤理論上手術全切可以治愈，但是部分良性腦膜瘤因其對周圍組織的浸潤而無法行全切，部分腦膜瘤即使手術全切，術后也有一定的復發(fā)率。而目前國內外針對良性腦膜瘤的治療只是手術切除，并沒有輔助放療、化療或免疫治療，對于有侵襲性的良性腦膜瘤術后是否需要輔助其他治療來降低術后的復發(fā)率是目前急需解決的問題。然而，術后的輔助治療涉及許多方面，其中就包括針對腫瘤的特異性靶向治療。本文的研究已經證實，ADAM-15在良性腦膜瘤的侵襲性生長中發(fā)揮著重要作用。而ADAMs作為抗癌療法的靶點一直受到了極大的關注，其幾種第一代和第二代抑制劑，如馬立馬司他林、普羅莫司他坦、坦莫司他坦或巴馬司他汀對ADAMs活性有廣泛的抑制性，但是臨床試驗中由于嚴重的副作用而導致令人失望的結果[14-17]，這可能與ADAMs參與許多生理過程有關，如炎癥、傷口愈合、組織修復和月經周期等[18-21]，所以需要研發(fā)針對ADAM家族中某一特定成員的抑制劑以獲得更好的臨床效果。不過遺憾的是，目前國內外尚未研制出ADAM-15特異性抑制劑，但是，ADAM-15作為ADAM家族中唯一含有RGD基序的成員，目前國外正在針對其RGD基序來研發(fā)抗腫瘤轉移的藥物。

本研究結果顯示，試驗組ADAM-15的陽性表達率高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（ 字2=17.296，P<0.001）。侵襲性組ADAM-15的陽性表達率高于非侵襲性組，差異有統(tǒng)計學意義（ 字2=8.376，P=0.004），表明ADAM-15可以促進良性腦膜瘤的侵襲性生長。據了解，本試驗是目前國內外首次應用免疫組化法研究ADAM-15在腦膜瘤病理組織中表達的試驗，對ADAM-15在腦膜瘤中的表達及對于腦膜瘤侵襲性生長的因子預測有很好的指導性，但是本研究局限于良性腦膜瘤中，下一步需要探究ADAM-15在不同級別腦膜瘤中表達是否具有差異性。

參考文獻

[1]周良輔.現(xiàn)代神經外科學[M].2版.上海：復旦大學出版社，2015：660-661.

[2] Louis D N，Ohgaki H，Wiestler O D，et al.The 2007 WHO Classifcation of Tumours of the Central Nervous System[J].Acta Neuropathol，2007，114：97-109.

[3] Lucas N，Day M L.The role of the disintegrin metalloproteinase ADAM15 in prostate cancer progression[J].Journal of Cellular Biochemistry，2009，106（6）：967-974.

[4] Edwards D R，Handsley M M，Pennington C J.The ADAM metalloproteinases[J].Molecular Aspects of Medicine，2008，29（5）：258-289.

[5] Kuefer R，Day K C，Kleer C G，et al.ADAM15 Disintegrin Is Associated with Aggressive Prostate and Breast Cancer Disease[J].Neoplasia，2006，8（4）：319-329.

[6] K?rkk?inen I，Karhu R，Huovila A P.Assignment of the ADAM15 gene to human chromosome band 1q21.3 by in situ hybridization[J].Cytogenetic & Genome Research，2000，88（3-4）：206-207.

[7] Murphy G.The ADAMs：signalling scissors in the tumour microenvironment[J].Nature Reviews Cancer，2008，8（12）：929-941.

[8] Rooprai H K，Martin A J，King A，et al.Comparative gene expression profiling of ADAMs，MMPs，TIMPs，EMMPRIN，EGF-R and VEGFA in low grade meningioma[J].International Journal of Oncology，2016，49（6）：2309-2318.

[9] Hirohata S，Wang L W，Miyagi M，et al.Punctin，a novel ADAMTS-like molecule，ADAMTSL-1，in extracellular matrix[J].Journal of Biological Chemistry，2002，277（14）：12182-12189.

[10] Kr?tzschmar J，Lum L，Blobel C P.Metargidin，a membrane-anchored metalloprotease-disintegrin protein with an RGD integrin binding sequence[J].Journal of Biological Chemistry，1996，271（9）：4593-4596.

[11] Kleino I，Ortiz R M，Huovila A P J.ADAM15 gene structure and differential alternative exon use in human tissues[J].BMC Molecular Biology，2007，8（90）：904-1110.

[12] Xie B，Shen J，Dong A，et al.An Adam15 amplification loop promotes vascular endothelial growth factor-induced ocular neovascularization[J].Faseb Journal Official Publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology，2008，22（8）：2775-2783.

[13] Horiuchi K，Weskamp G，Lum L，et al.Potential role for ADAM15 in pathological neovascularization in mice[J].Molecular & Cellular Biology，2003，23（16）：5614-5624.

[14] Moore M J，Hamm J，Dancey J，et al.Comparison of gemcitabine versus the matrix metalloproteinase inhibitor BAY 12-9566 in patients with advanced or metastatic adenocarcinoma of the pancreas：a phase Ⅲ trial of the National Cancer Institute of Canada Clinical Trials Group[J].Clin Oncol，2003，21（17）：3296-3302.

[15] Nuti E，Tuccinardi T，Rossello A.Matrix metalloproteinase inhibitors：new challenges in the era of post broad-spectrum inhibitors[J].Current Pharmaceutical Design，2007，13（20）：2087-2100.

[16] Mant T G K，Bradford D，Amin D M，et al.Pharmacokinetics and safety assessments of high-dose and 4-week treatment with S-3304，a novel matrix metalloproteinase inhibitor，in healthy volunteers[J].British Journal of Clinical Pharmacology，2007，63（5）：512-526.

[17] Nuti E，Cantelmo A R，Gallo C，et al.N-O-Isopropyl Sulfonamido-Based Hydroxamates as Matrix Metalloproteinase Inhibitors： Hit Selection and in Vivo Antiangiogenic Activity[J].Journal of Medicinal Chemistry，2015，58（18）：7224-7240.

[18] Ep V D V，Keijbeck A A，de Winther M P，et al.A disintegrin and metalloproteases：molecular scissors in angiogenesis，inflammation and atherosclerosis[J].Atherosclerosis，2012，224（2）：302-308.

[19] Sch?nefu? A，Abety A N，Zamek J，et al.Role of ADAM-15 in wound healing and melanoma development[J].Experimental Dermatology，2012，21（6）：437-442.

[20] Thathiah A，Carson D D.MT1-MMP mediates MUC1 shedding independent of TACE/ADAM17[J].Biochemical Journal，2004，382（1）：363-373.

[21] Moali C，Hulmes D J.Extracellular and cell surface proteases in wound healing： new players are still emerging[J].European Journal of Dermatology，2009，19（6）：552-564.

（收稿日期：2017-11-09） （本文編輯：張爽）