效應(yīng)面法優(yōu)選建昌幫米泔水漂蒼術(shù)炮制工藝*

★ 龔鵬飛 于歡 龔千鋒 黃小方

(1.江西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院 南昌 330004; 2.江西中醫(yī)藥大學(xué)科技學(xué)院 南昌 330004)

蒼術(shù)為菊科植物茅蒼術(shù)Atractylodeslancea(Thunb.)DC.或北蒼術(shù)Atractylodeschinensis(DC.)Koidz.干燥根莖。主要產(chǎn)地為江蘇(茅山)和湖北等地的稱為“茅蒼術(shù)”或“南蒼術(shù)”；主要產(chǎn)地為河北、東北等地的蒼術(shù)稱“北蒼術(shù)”。蒼術(shù)具有祛風(fēng)、散寒、健脾燥濕的作用,臨床上主要用于治療風(fēng)寒感冒、水腫、腹瀉、濕阻脾胃、風(fēng)濕痹痛等病[1]。蒼術(shù)炮制品有清炒、炒焦、麩炒、土炒、米泔水浸等多種，2015版《中國(guó)藥典》[2]收載生品蒼術(shù)和麩炒蒼術(shù)，而米泔水制也是蒼術(shù)炮制的一大特色，早在宋代《重修政和經(jīng)史證類備用本草》就有記載，蒼術(shù)用米泔水浸泡2-3天，每天換水，至蒼術(shù)具米香，現(xiàn)在任然有很多地方一直應(yīng)用這種炮制方法，米泔水炮制蒼術(shù)能顯著降低其過(guò)燥之性，增加健脾和胃之效[1]。近年報(bào)道，對(duì)蒼術(shù)的水洗、麩炒、烘制、土炒工藝都有研究；對(duì)炒蒼術(shù)的輔料麥麩做了化學(xué)、藥理研究[3]，并對(duì)樟幫蜜麩的制備工藝進(jìn)行了研究，但是，江西建昌幫米泔水漂蒼術(shù)尚未見報(bào)道，不利于蒼術(shù)特色炮制品種的開發(fā)與利用[4]。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，β-桉葉醇、蒼術(shù)素是健脾和胃的主要成分之一[5-6]。而孟鶴[7]等人研究發(fā)現(xiàn)蒼術(shù)酮為燥性成分。此實(shí)驗(yàn)通過(guò)高效液相測(cè)定β-桉葉醇、蒼術(shù)素及蒼術(shù)酮的含量，并通過(guò)星點(diǎn)設(shè)計(jì)-效應(yīng)面法優(yōu)選使β-桉葉醇、蒼術(shù)素含量相對(duì)較高以及蒼術(shù)酮含量較低的米泔水炮制蒼術(shù)的工藝。蒼術(shù)米泔水工藝研究為其標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)奠定基礎(chǔ)，更為“建昌幫”特色炮制工藝的發(fā)展和傳承打下堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。

1 材料

HH-6 數(shù)顯恒溫水浴鍋(常州國(guó)華電器有限公司)；DFY-400高速中藥粉碎機(jī)(溫嶺市林大機(jī)械有限公司)；Ultimate3000 型高效液相全自動(dòng)色譜儀 ( 美國(guó)Dionex 公司，PDA 二極管陣列紫外檢測(cè)器，Chromelon 色譜工作站)；AE240型1/10 萬(wàn)電子天平( 瑞士梅特勒-托利多公司) ;SQP型Sartorius萬(wàn)分之一電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器有限公司)。

生茅蒼術(shù)片(樟樹市東北參茸藥站，批號(hào) 20160920，產(chǎn)地湖北)，經(jīng)江西中醫(yī)藥大學(xué)鄧可眾副教授鑒定為菊科植物蒼術(shù)Atractylodeslancea(Thunb.)DC.的干燥根莖；大米(圣毅園現(xiàn)代農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司，圣毅園生態(tài)米，產(chǎn)地長(zhǎng)沙縣北山鎮(zhèn))。甲醇、乙腈(色譜純，西隴化工股份有限公司)；純凈水(哇哈哈)；標(biāo)準(zhǔn)品β-桉葉醇、蒼術(shù)素及蒼術(shù)酮(均為四川省維克奇生物科技有限公司，批號(hào)分別為140728、140805、16111403)。

2 方法與結(jié)果

2.1 蒼術(shù)炮制品的制備 根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)、文獻(xiàn)資料[8-9]與工業(yè)化實(shí)際操作需要，將大米打碎成米粉，過(guò)4號(hào)篩，用時(shí)將米粉與水以2∶100 進(jìn)行米泔水配比，充分?jǐn)嚢栊纬苫鞈乙杭吹妹足锼芤骸Ｔ俜Q取30g生蒼術(shù)片放入500mL的燒杯中，加入適量的米泔水，待蒼術(shù)漂后，取出蒼術(shù)將上面的米泔水沖洗干凈，并放入烘箱40℃烘干至恒重，即得蒼術(shù)炮制品。

2.2 β-桉葉醇、蒼術(shù)素及蒼術(shù)酮的含量測(cè)定

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取β-桉葉醇、蒼術(shù)素及蒼術(shù)酮對(duì)照品適量分別加甲醇溶解制成對(duì)照品母液，分別精密吸取2mL各對(duì)照品母液，用甲醇定容于10 mL 容量瓶中，制成標(biāo)準(zhǔn)品混合液，β-桉葉醇、蒼術(shù)素及蒼術(shù)酮濃度分別為：0.194 mg/mL、0.222 mg/mL、0. 600 mg/mL。

2.2.2 供試品溶液的制備 取米泔水漂蒼術(shù)樣品粉末 1.0 g(過(guò)四號(hào)篩)，置具塞錐形瓶中，加入30 mL甲醇溶液，稱重，30℃超聲60 min，放涼后并補(bǔ)足失重，靜置取上清液過(guò) 0.22 μm 微孔濾膜，注射入進(jìn)樣瓶中待測(cè)定備用。

2.2.3 色譜條件 采用依利特C18色譜柱(4.6mm×250mm,5μm)，色譜條件參照陳佳等[10]的色譜條件進(jìn)行調(diào)整，PDA全波段掃描檢測(cè)雙波長(zhǎng) 203 nm(β-桉葉醇與蒼術(shù)酮)和340 nm(蒼術(shù)素)；流速 1.0 mg/mL，柱溫 30℃；流動(dòng)相水A-流動(dòng)相乙腈B，梯度洗脫(0～5.5 min，76%B；5.5～7.7 min，76～90%B；7.7～18 min，90%)。見圖1。

1.β-桉葉醇；2.蒼術(shù)素；3.蒼術(shù)酮

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 線性關(guān)系考察 將對(duì)照品的混合溶液的進(jìn)樣量設(shè)為：20，16，12，8，4，2μL，按2.2.5的色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣。以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸。β-桉葉醇、蒼術(shù)素及蒼術(shù)酮回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性范圍見表1。

表1 線性回歸考察分析結(jié)果

2.3.2 精密度試驗(yàn) 將2.2.1 項(xiàng)下標(biāo)準(zhǔn)品混合液進(jìn)樣20 μL，按 2.2.3 色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣 6 次，計(jì)算得β-桉葉醇、蒼術(shù)素及蒼術(shù)酮的RSD值分別 0.51%、0.67%、0.45%，表明在此色譜條件下本儀器精密度較好。

2.3.3 重復(fù)性試驗(yàn) 稱取同一蒼術(shù)炮制品 6 份，分別按 2.2.2 項(xiàng)進(jìn)行制備供試品溶液，并按2.2.3 的色譜條件下進(jìn)樣，測(cè)得β-桉葉醇、蒼術(shù)素及蒼術(shù)酮平均含量分別為0.7071%、0.1431%、3.5987%，RSD值分別 3.01%、1.88%、1.75%，表明在該條件下，本實(shí)驗(yàn)重復(fù)性較好。

2.3.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一米泔水白術(shù)炮制品供試溶液，按2.2.3色譜條件下分別在 0，6，12，18，24，48 h 分別進(jìn)樣 20 μL，計(jì)算得β-桉葉醇、蒼術(shù)素及蒼術(shù)酮的峰面積RSD值分別 0.83%、0.54%、1.39 %，表明在該條件下，白術(shù)炮制品供試溶液在48 h 穩(wěn)定性較好。

2.3.5 加樣回收試驗(yàn) 精密稱取已知含量樣品(β-桉葉醇4.518 mg/mL、蒼術(shù)素mg/mL及蒼術(shù)酮21.954 mg/mL)6 份各1 g，按照2.2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，并各加入β-桉葉醇、蒼術(shù)素及蒼術(shù)酮對(duì)照品適量,按照2.2.3色譜條件測(cè)定含量，計(jì)算得β-桉葉醇、蒼術(shù)素及蒼術(shù)酮的平均加樣回收率見表2。

表2 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

表3 星點(diǎn)設(shè)計(jì)結(jié)果

2.4 炮制工藝優(yōu)化

2.4.1 工藝優(yōu)化設(shè)計(jì)與結(jié)果 該優(yōu)選實(shí)驗(yàn)采用3個(gè)因變量(蒼術(shù)酮、β-桉葉醇、蒼術(shù)素)進(jìn)行優(yōu)選。根據(jù)黃小方等[11]的實(shí)驗(yàn)改進(jìn)設(shè)定A浸漂溫度、B浸漂時(shí)間、C米泔水用量(所漂蒼術(shù)質(zhì)量的倍數(shù))為自變量，制得因素水平表，共20份生蒼術(shù)飲片，每份30 g,如表3。分析計(jì)算β-桉葉醇、蒼術(shù)素、蒼術(shù)酮含量及其OD值.β-桉葉醇、蒼術(shù)素的含量越大越好，而蒼術(shù)酮的含量越小越好，通過(guò)Hassan[12]法計(jì)算OD值，dmax=(yi-ymin)/(ymax-ymin),dmin=(ymin-yi)/(ymax-ymin)。

2.4.2 模型擬合與響應(yīng)面分析 應(yīng)用響應(yīng)面分析軟件Design Expert DX8.2分別對(duì)各因素(溫度、時(shí)間、用量)進(jìn)行多元線性回歸，二項(xiàng)式方程擬合:OD=-0.101013-0.025424A+0.016999B+0.37241×C-1.36615×10-4AB+2.45×AC10-5+1.4562510-4BC+5.49812×10-4A2-7.49396×10-5B2-0.02569×10-2C2，R=0.8305，值較大接近1，說(shuō)明該方程擬合度佳，預(yù)測(cè)性良好，P<0.01表示差異性極顯著。預(yù)測(cè)最優(yōu)條件為：米泔用量為7.42倍、漂洗時(shí)間72h、漂洗溫度 20 ℃，在此條件炮制下的蒼術(shù)含β-桉葉醇、蒼術(shù)素、蒼術(shù)酮的量預(yù)測(cè)值分別為：0.8178%、0.1433%、2.9854%，經(jīng)加權(quán)折合綜合評(píng)分，折合系數(shù)OD為0.77。繪制不同變量間響應(yīng)面值，見圖2。

圖2 因素間的三維效應(yīng)面圖

2.4.3 最佳工藝驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 選取3批次生蒼術(shù)片各30g，按照優(yōu)選所得米泔水漂制的最佳工藝條件進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，重復(fù)3次，預(yù)測(cè)值與實(shí)際值偏差較小，誤差均在 5%以內(nèi)，表明工藝預(yù)測(cè)性良好。

3 討論

本文采用星點(diǎn)設(shè)計(jì)研究米泔水漂制蒼術(shù)的工藝，以米泔用量、漂洗時(shí)間、漂洗溫度主要考查三個(gè)揮發(fā)油成分作為優(yōu)選指標(biāo)，目的是優(yōu)選出能降低蒼術(shù)的燥性增強(qiáng)其健脾和胃功效的最佳工藝。本文采用三個(gè)指標(biāo)的含量來(lái)評(píng)價(jià)優(yōu)選工藝，β-桉葉醇、蒼術(shù)素是蒼術(shù)健脾和胃的主要有效成分[5-6]，蒼術(shù)酮是燥性成分[13]。在蒼術(shù)在米泔水漂制過(guò)程中，β-桉葉醇、蒼術(shù)素、蒼術(shù)酮隨著溫度和時(shí)間的提升而含量而升高，但因漂洗的泔水在25℃以上很容易因微生物的存在而發(fā)酵，而一系列酵解反應(yīng)過(guò)程可能促使了β-桉葉醇、蒼術(shù)素、蒼術(shù)酮及其他成分的產(chǎn)生，但如果漂洗時(shí)間太長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致霉變影響藥材品質(zhì)。本實(shí)驗(yàn)考察結(jié)果顯示最佳工藝參數(shù)為 20 ℃、3d、7.28倍的米泔水用量，而米泔水漂制古法一般在春秋季漂制水溫為20℃左右，漂 1～7 d[8]與古法炮制的要求基本一致。本實(shí)驗(yàn)優(yōu)選得到的最佳工藝預(yù)測(cè)性好OD值高，能為米泔米漂蒼術(shù)的炮制工藝研究提供一定的依據(jù)，為建昌幫米泔水漂蒼術(shù)飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)奠定基礎(chǔ)，為下一步對(duì)米泔水漂蒼術(shù)的藥效與炮制機(jī)理的相關(guān)性進(jìn)行研究提供依據(jù)。

[1]龔千鋒,黃文鴻,朱國(guó)強(qiáng),等.樟樹中藥炮制全書[M].南昌:江西科學(xué)技術(shù)出版社,1989:90.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典·一部[S].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2015:161-162.

[3]王文凱,張正,翁萍,等.近年蒼術(shù)炮制研究進(jìn)展[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2014,25(1): 195-197.

[4]王文凱,張正,翁萍,等.樟幫炮制輔料蜜麩的制備工藝研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2015,26(5): 1 136-1 138.

[5]劉芬,田春漫.蒼術(shù)素對(duì)脾虛證大鼠胃黏膜超微結(jié)構(gòu)及胃腸功能的影響[J].中華中醫(yī)藥雜志,2016,31(3):1 002-1 005.

[6]王金華,薛寶云,梁愛華,等.蒼術(shù)有效成分β-桉葉醇對(duì)小鼠小腸推進(jìn)功能的影響[J].中國(guó)藥學(xué)雜志,2002,37(4):28-30.

[7]孟鶴,馬躍平,王金輝,等.蒼術(shù)麩炒前后正己烷提取物中化學(xué)成分的研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2012,23(6):1 412-1 413.

[8]張鈺祺,龔千鋒.米泔水在中藥炮制中的古今應(yīng)用研究[J].江西中醫(yī)藥,2011,42(4):64-66.

[9]王文凱,張正,翁萍,等.建昌幫米泔水漂蒼術(shù)工藝研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥, 2015,26(9):2 157-2 159.

[10]陳佳,解小霞,劉合剛. 幾個(gè)道地產(chǎn)區(qū)茅蒼術(shù)指紋圖譜及蒼術(shù)素含量測(cè)定研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志, 2013,19(10):125-127.

[11]黃小方,鄢慶祥,龔鵬飛,等.星點(diǎn)設(shè)計(jì)-效應(yīng)面法優(yōu)選米泔水漂白術(shù)炮制工藝[J].中草藥. 2017,48(1):109-113.

[12]Abu-Lzzza K A,Carci-Contreras L,Lu DR.Preparation and evaluation of sustained release AZT-loaded microsphere optimization of the release characteristics using response surface methodology[J].J Pharm Sci,1996,85(2):144-149.

[13]趙文龍,吳慧,單國(guó)順,等. 麩炒白術(shù)“減酮減燥,增酯增效”炮制理論的再印證[J].中國(guó)中藥雜志,2013,38(20):3 493-3 497.