猴面包樹果多糖超聲輔助提取及其抗氧化活性研究

孫連立，劉露，裴運(yùn)林，聶艷峰，萬水停，吳陽(yáng)清

（廣東丸美生物技術(shù)股份有限公司，廣東廣州510530）

猴面包樹果是錦葵目木槿科植物猴面包樹（Adansonia digitata L.）的成熟果實(shí)，產(chǎn)于非洲大陸、馬達(dá)加斯加、地中海及澳洲北部等地。猴面包樹果因其外觀像面包，并且果肉酸甜多汁，可作為食物而得名[1]。

猴面包樹果含有豐富的營(yíng)養(yǎng)成分，有學(xué)者對(duì)猴面包樹果組分進(jìn)行了研究，結(jié)果顯示其含有糖類46%～88%，粗蛋白2.5%～17%，油脂0.2%～15.5%，纖維素11%左右，能量8 489 KJ/kg，此外，其含有豐富的維生素C，含量介于150 mg/100 g～500 mg/100 g[2]。猴面包樹果具有顯著的生理功效，除了可以直接食用外，還可入藥，具有消炎、退熱并預(yù)防痢疾的功效，此外，其還具有養(yǎng)胃利膽、清熱消腫、止血止瀉和鎮(zhèn)靜安神的作用[3]。

多糖是由不少于10個(gè)糖醛酸或酮糖通過糖苷鍵的鏈接形成的一種聚合物，同蛋白質(zhì)和核酸一樣均屬生物信息大分子，并參與各種生命活動(dòng)[4-6]。多糖具有廣泛的藥理作用，在抗氧化、調(diào)節(jié)免疫功能、抗病毒、抗腫瘤、抗衰老、降血脂等方面具有多種生物活性[7-12]。猴面包樹果實(shí)含有豐富的多糖，但目前對(duì)其提取及體外生理功效的研究還很少。

隨著人們生活水平的提高，猴面包樹果及其健康食品逐漸進(jìn)入中國(guó)市場(chǎng)，其豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和良好的生理功效正越來越受到人們的歡迎。本文探索利用超聲波輔助提取技術(shù)制備猴面包樹果多糖，通過單因素試驗(yàn)和響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)確定最佳提取工藝，經(jīng)過脫蛋白后得到猴面包樹果粗多糖，并對(duì)其抗氧化活性進(jìn)行研究。本試驗(yàn)結(jié)果可以為猴面包樹果多糖的功效研究提供數(shù)據(jù)支撐，同時(shí)為其在更廣泛領(lǐng)域的開發(fā)應(yīng)用提供可行性參考。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

1.1.1 材料

猴面包樹果實(shí)，已烘干，購(gòu)于弘亞食品公司，原產(chǎn)地加納。

1.1.2 主要試劑

葡萄糖、濃硫酸、苯酚、無水乙醇、氯仿、正丁醇、甲醇、冰乙酸、無水乙酸鈉、鹽酸、氯化鐵、硫酸亞鐵、鐵氰化鉀（均為分析純）：廣州化學(xué)試劑廠；1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）、2，2-聯(lián)氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二銨鹽（ABTS）：廣州左克生物科技有限公司。

1.1.3 主要儀器

P300H超聲波清洗器：德國(guó)ELMA公司；UV2600紫外-可見分光光度計(jì)：日本島津公司；RV10旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：德國(guó)IKA集團(tuán)；SHZ-DⅢ循環(huán)水式真空泵：河南鞏義予華儀器設(shè)備有限公司；大容量高速離心機(jī)（3-16KL）：德國(guó) Sigma公司；冷凍干燥機(jī)（FDU-2110）：日本東京理化公司；多功能酶標(biāo)儀（Spark 10M）：瑞士Tecan公司。

1.2 方法

1.2.1 原料預(yù)處理

將已干燥的猴面包樹果粉碎，剝除種子后過60目篩，95%酒精回流脫脂除雜，晾干，得到猴面包樹果干粉，密封、干燥條件下保藏備用。

1.2.2 猴面包樹果多糖提取工藝

稱取3.00 g猴面包樹果干粉，按照一定的料液比（g/mL）加蒸餾水混合，密封，放置于超聲波清洗器中，按照單因素試驗(yàn)設(shè)定的參數(shù)進(jìn)行提??；提取結(jié)束后，于4℃、4 500 r/min條件下離心20 min，得上清液；將上清液于55℃條件下減壓濃縮至原體積的1/4～1/5；緩慢加入5倍體積的95%乙醇，4℃醇沉12 h；將沉淀冷凍干燥后用蒸餾水復(fù)溶，利用sevage法（氯仿∶正丁醇=4∶1（體積比））脫蛋白，重復(fù) 2 次；再次醇沉，將沉淀冷凍干燥，即為猴面包樹果粗多糖。

1.2.3 提取單因素試驗(yàn)

參照方法1.2.2多糖提取工藝，以多糖提取率為考查指標(biāo)，分別選擇提取溫度、提取時(shí)間、超聲功率、料液比、提取次數(shù)5個(gè)因素進(jìn)行猴面包樹果多糖提取單因素試驗(yàn)。

提取溫度的選擇：分別稱取3.00 g猴面包樹果干粉，固定提取時(shí)間1.5 h、超聲功率304 W、料液比1∶30（g/mL）、提取次數(shù) 1 次，提取溫度分別選擇 40、50、60、70、80、90℃，比較不同提取溫度下多糖提取率。

提取時(shí)間的選擇：分別稱取3.00 g猴面包樹果干粉，固定提取溫度70℃、超聲功率304 W、料液比1∶30（g/mL）、提取次數(shù)1次，提取時(shí)間分別選擇0.25、0.5、1、1.5、2、2.5 h，比較不同提取時(shí)間下多糖提取率。

超聲功率的選擇：分別稱取3.00 g猴面包樹果干粉，固定提取溫度70℃、提取時(shí)間2 h、料液比 1∶30（g/mL）、提取次數(shù) 1 次，超聲功率分別選擇 190、228、266、304、342、380 W，比較不同超聲功率下多糖提取率。

料液比的選擇：分別稱取3.00 g猴面包樹果干粉，固定提取溫度70℃、提取時(shí)間2 h、超聲功率304 W、提取次數(shù) 1 次，料液比分別選擇 1∶10、1∶20、1∶30、1∶40、1∶50（g/mL），比較不同料液比下多糖提取率。

提取次數(shù)的選擇：分別稱取3.00 g猴面包樹果干粉，固定提取溫度70℃、提取時(shí)間2 h、超聲功率304 W、料液比 1∶30（g/mL），提取次數(shù)分別選擇 1 次、2次、3次、4次、5次，比較不同提取次數(shù)下多糖提取率。

1.2.4 響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)設(shè)計(jì)

通過分析單因素試驗(yàn)結(jié)果，確定提取溫度、提取時(shí)間、料液比3個(gè)因素的零水平，以多糖的提取率為響應(yīng)值，通過Design Expert 8.0.5軟件，采用Box-Behnken設(shè)計(jì)，運(yùn)用三因素三水平響應(yīng)面分析法，對(duì)猴面包樹果多糖提取率進(jìn)行優(yōu)化設(shè)計(jì)，試驗(yàn)因素水平及編碼見表1。

1.2.5 多糖提取率的測(cè)定

采用苯酚-硫酸法測(cè)定猴面包樹果多糖，操作方法參照農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T 1676-2008《食用菌中粗多糖含量測(cè)定測(cè)定》中多糖的測(cè)定方法進(jìn)行，以葡萄糖質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以吸光值為縱坐標(biāo)繪制回歸曲線，所得回歸方程為：y=0.010 4x-0.010 6，R2=0.999。

表1 試驗(yàn)因素水平及編碼Table 1 Experimental factors level and coding

式中：n為稀釋倍數(shù)；C為多糖的質(zhì)量濃度，mg/mL；V為多糖溶液體積，mL；m為猴面包樹果干粉的質(zhì)量，g。

1.2.6 猴面包樹果多糖抗氧化活性研究

1.2.6.1 猴面包樹果多糖對(duì)DPPH·清除能力測(cè)定

參照文獻(xiàn)[13]的方法，配制濃度為0.2 mmol/L的DPPH甲醇溶液，用蒸餾水將樣品配制為不同濃度的溶液。準(zhǔn)確量取2 mL樣品溶液，加入2 mL DPPH甲醇溶液，混勻，避光反應(yīng)30 min，用分光光度計(jì)在517 nm處測(cè)定吸光度，以甲醇溶液調(diào)零，以維生素C溶液做陽(yáng)性對(duì)照。

式中：A0為以蒸餾水替代樣品測(cè)定的吸光度；A1為樣品組測(cè)定的吸光度；A2為以甲醇替代DPPH甲醇溶液測(cè)定的吸光度。

1.2.6.2 猴面包樹果多糖對(duì)ABTS+·清除能力測(cè)定

參照Re等[14]的方法，并稍作修改。準(zhǔn)確稱取0.192 g ABTS，用2.45 mmol/L的過硫酸鉀定容50 mL，室溫避光保存12 h～16 h后使用，作為ABTS儲(chǔ)備液。將ABTS儲(chǔ)備液用磷酸鹽緩沖液（10 mmol/L，pH=7.4）稀釋，使其在734 nm處的吸光度達(dá)到0.70±0.02，即為ABTS工作液。量取5 mL ABTS工作液，加入0.1 mL樣品溶液，振蕩10 s，30℃條件靜置6 min，測(cè)定734 nm處的吸光度。以不同濃度的Trolox溶液作為陽(yáng)性對(duì)照，每組試驗(yàn)平行進(jìn)行3次，按照下式計(jì)算ABTS+·清除率。

式中：A0為以磷酸鹽緩沖液代替樣品測(cè)定的吸光度；A1為樣品組測(cè)定的吸光度；A2為以磷酸鹽緩沖液代替ABTS工作液測(cè)定的吸光度。

1.2.6.3 猴面包樹果多糖還原能力測(cè)定

參照文獻(xiàn)[15]的方法，并稍作修改。取2 mL樣品溶液，加入5 mL的磷酸鹽緩沖液（0.2 mol/L，pH=6.6），再加入5 mL的1%鐵氰化鉀溶液，50℃條件下保溫20 min。急速冷卻，加入5 mL的質(zhì)量濃度為10%的三氯乙酸溶液，混勻，3 000 r/min離心10 min，取上清液2.5 mL，加入2.5 mL蒸餾水和0.5 mL的質(zhì)量濃度為0.1%的FeCl3溶液，室溫反應(yīng)10 min，測(cè)定700 nm波長(zhǎng)條件下吸光度。以吸光度的大小衡量還原能力的強(qiáng)弱，吸光度越大，還原能力越強(qiáng)。以蒸餾水代替樣品溶液為空白對(duì)照，以不同濃度的VC溶液作為陽(yáng)性對(duì)照，每組試驗(yàn)平行進(jìn)行3次。

1.3 數(shù)據(jù)分析

利用SPSS18.0和Design-Expert 8.0.5數(shù)據(jù)處理軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取單因素試驗(yàn)

2.1.1 提取溫度對(duì)猴面包樹果多糖提取率的影響

固定其它參數(shù)的條件不變，考察不同提取溫度對(duì)猴面包樹果多糖提取率的影響，試驗(yàn)結(jié)果見圖1。

圖1 提取溫度對(duì)猴面包樹果多糖提取率的影響Fig.1 Effect of temperature on polysaccharide extraction rate

由圖1可知，隨著溫度的升高，猴面包樹果多糖提取率逐漸升高，當(dāng)溫度達(dá)到70℃時(shí)，猴面包樹果多糖提取率達(dá)到最大，為41.76%，之后繼續(xù)升高提取溫度，提取率趨于穩(wěn)定并略有下降。隨著提取溫度的升高，多糖分子運(yùn)動(dòng)加快，同時(shí)可以增加溶劑的滲透能力，提取率隨之升高，但是過高的溫度可能會(huì)對(duì)多糖分子結(jié)構(gòu)和生物活性產(chǎn)生破壞作用，因此選擇70℃為適宜的提取溫度。

2.1.2 提取時(shí)間對(duì)猴面包樹果多糖提取率的影響

固定其它參數(shù)的條件不變，考察不同提取時(shí)間對(duì)猴面包樹果多糖提取率的影響，試驗(yàn)結(jié)果見圖2。

由圖2可知，隨著提取時(shí)間的延長(zhǎng)，猴面包樹果多糖提取率逐漸升高，當(dāng)提取時(shí)間為1.5 h時(shí)，多糖提取率達(dá)到最高，為41.53%，之后提取時(shí)間繼續(xù)延長(zhǎng)，猴面包樹果多糖的提取率幾乎不變。延長(zhǎng)提取時(shí)間，可以使更多的多糖分子滲出到提取溶劑中，但是過長(zhǎng)的提取時(shí)間存在增加能耗的問題，對(duì)多糖的提取率也無提升效果，因此選取1.5 h為合適的提取時(shí)間。

圖2 提取時(shí)間對(duì)猴面包樹果多糖提取率的影響Fig.2 Effect of time on polysaccharide extraction rate

2.1.3 超聲功率對(duì)猴面包樹果多糖提取率的影響

固定其它參數(shù)的條件不變，考察不同超聲功率對(duì)猴面包樹果多糖提取率的影響，試驗(yàn)結(jié)果見圖3。

圖3 超聲功率對(duì)猴面包樹果多糖提取率的影響Fig.3 Effect of ultrasonic power on polysaccharide extraction rate

由圖3結(jié)果可以看出，隨著超聲功率的增大，猴面包樹果多糖提取率呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)，當(dāng)超聲功率為342 W時(shí)，多糖提取率達(dá)到最大，為42.01%，之后將超聲功率調(diào)至最大功率380 W，多糖提取率反而有小幅降低。超聲波的空化作用可以對(duì)細(xì)胞壁產(chǎn)生破碎作用，加速細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的溶出，但是較長(zhǎng)時(shí)間的大功率處理，可能會(huì)對(duì)多糖的分子結(jié)構(gòu)產(chǎn)生破壞，同時(shí)較高的功率意味著較大的能耗，因此選擇342 W的超聲功率進(jìn)行后續(xù)優(yōu)化試驗(yàn)。

2.1.4 料液比對(duì)猴面包樹果多糖提取率的影響

固定其它參數(shù)的條件不變，考察不同料液比對(duì)猴面包樹果多糖提取率的影響，試驗(yàn)結(jié)果見圖4。

圖4 料液比對(duì)猴面包樹果多糖提取率的影響Fig.4 Effect of solid-liquid ratio on polysaccharide extraction rate

由圖4結(jié)果可知，隨著料液比的減小，猴面包樹果多糖的提取率呈現(xiàn)先升高后緩慢降低的趨勢(shì)。當(dāng)料液比為1∶30（g/mL）時(shí)，多糖提取率達(dá)到最大，為40.09%，之后隨著料液比繼續(xù)減小，提取率也隨之降低。料液比較大時(shí)，混合物的黏度較大，對(duì)超聲波有一定的阻斷作用，不利于細(xì)胞內(nèi)有效物質(zhì)的滲出，但是過低的料液比會(huì)加大后續(xù)濃縮過程的難度，耗時(shí)耗能，同樣會(huì)造成多糖的損失。因此，選擇料液比1∶30（g/mL）進(jìn)行后續(xù)優(yōu)化試驗(yàn)。

2.1.5 提取次數(shù)對(duì)猴面包樹果多糖提取率的影響

固定其它參數(shù)的條件不變，考察不同提取次數(shù)對(duì)猴面包樹果多糖提取率的影響，試驗(yàn)結(jié)果見圖5。

圖5 提取次數(shù)猴面包樹果多糖提取率的影響Fig.5 Effect of extraction times on polysaccharide extraction rate

由圖5可以看出，隨著提取次數(shù)的增加，猴面包樹果多糖提取率呈現(xiàn)出先快速升高后趨于平衡的趨勢(shì)。當(dāng)提取次數(shù)達(dá)到2次時(shí)，提取率有顯著升高，達(dá)到42.18%，之后增加提取次數(shù)，猴面包樹果多糖提取率基本趨于穩(wěn)定。增加提取次數(shù)，可以利用新的提取溶劑的濃度差，促進(jìn)多糖的溶出，當(dāng)提取次數(shù)過多時(shí)，原料中的多糖基本提取完畢，提取率達(dá)到平衡，同時(shí)過多的提取次數(shù)耗時(shí)耗能，因此選擇對(duì)猴面包樹果提取2次。

2.2 提取響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)

2.2.1 試驗(yàn)結(jié)果及方差分析

運(yùn)用Box-Behnken法，設(shè)計(jì)三因素三水平的響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)，試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果如表2所示。

表2 Box-Behnken響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果Table 2 Box-Behnken experiment design and corresponding experimental values

續(xù)表2 Box-Behnken響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果Continue table 2 Box-Behnken experiment design and corresponding experimental values

運(yùn)用Design Expert 8.0.5數(shù)據(jù)處理軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸擬合分析，得到多糖提取率與各因素變量的二次回歸方程模型：

對(duì)該回歸模型進(jìn)行方差分析，結(jié)果見表3。

表3 回歸模型方差分析表Table 3 Table of variance analysis of regression model

由表3可知，此模型具有極顯著性（p＜0.01），失擬項(xiàng)不顯著（p＞0.05）：另外模型的 R2=0.9705，R2Adj=0.9325，信噪比S/N=13.792，模型響應(yīng)值的變異系數(shù)為2.3，小于5，可知回歸方程擬合度和可信度均很高，試驗(yàn)誤差較小，可以用此模型對(duì)猴面包樹果多糖的提取工藝進(jìn)行分析和預(yù)測(cè)。

通過表3方差分析結(jié)果可知，各因素對(duì)猴面包樹果多糖提取率的影響大小為：料液比＞提取時(shí)間＞提取溫度，其中料液比對(duì)多糖提取率影響極顯著，提取時(shí)間對(duì)多糖提取率影響顯著。

2.2.2 交互作用分析及驗(yàn)證試驗(yàn)

響應(yīng)面圖坡度的陡峭程度可以反應(yīng)各因素對(duì)響應(yīng)值的影響程度，坡度越陡峭說明各因素交互作用對(duì)響應(yīng)值的影響越大[16]。對(duì)每?jī)蓚€(gè)因素間的交互作用進(jìn)行分析，其響應(yīng)面圖結(jié)果見圖6～圖8。

圖6 料液比和提取溫度交互作用對(duì)多糖提取率影響的響應(yīng)面圖Fig.6 Response surface methodology for the effect of solid-liquid ratio and extraction temperature on the extraction rate of polysaccharide

圖7 料液比和提取時(shí)間交互作用對(duì)多糖提取率影響的響應(yīng)面圖Fig.7 Response surface methodology for the effect of solid-liquid ratio and extraction time on the extraction rate of polysaccharide

圖8 提取時(shí)間和提取溫度交互作用對(duì)多糖提取率影響的響應(yīng)面圖Fig.8 Response surface methodology for the effect of extraction time and extraction temperature on the extraction rate of polysaccharide

由圖6～圖8可以看出，每?jī)蓚€(gè)因素間的響應(yīng)面圖均呈現(xiàn)為較明顯的凸球形曲面，坡度較陡峭，同時(shí)，其在平面投影的等高線圖呈現(xiàn)為橢圓形，說明每?jī)梢蛩亻g交互作用顯著，而圖8對(duì)應(yīng)的等高線表現(xiàn)為更明顯的橢圓形，說明提取時(shí)間與提取溫度的交互作用對(duì)多糖提取率的影響更加顯著，這與表2中對(duì)每?jī)梢蛩亻g交互作用的方差分析結(jié)果一致。

通過二次回歸方程模型分析得到猴面包樹果多糖提取的最佳工藝參數(shù)為：A=0.32，B=-0.16，C=-0.03，即料液比為 1∶33.2（g/mL），提取溫度 68.4 ℃，提取時(shí)間1.485 h，此時(shí)猴面包樹果多糖的理論提取率達(dá)到45.71%。結(jié)合實(shí)際條件對(duì)工藝條件修改為料液比1∶33（g/mL），提取溫度 68 ℃，提取時(shí)間 1.5 h，超聲功率342 W，提取2次，在此條件下進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，得到猴面包樹果多糖的提取率為（45.03±0.76）%，與理論值相符較好。由此證明，此回歸方程擬合良好，試驗(yàn)結(jié)果可靠。

2.3 猴面包樹果多糖抗氧化性能研究

2.3.1 猴面包樹果多糖對(duì)DPPH·的清除能力

按照方法1.2.6.1考察0.1 mg/mL～7.5 mg/mL質(zhì)量濃度的猴面包樹果多糖和0.05 mg/mL～0.4 mg/mL的VC對(duì)DPPH·的清除能力，所得試驗(yàn)結(jié)果如圖9所示。

圖9 不同濃度猴面包樹果多糖和VC對(duì)DPPH·的清除能力Fig.9 Scavenging ability of VCand polysaccharide from baobab fruit to DPPH·

由圖9可以看出，隨著質(zhì)量濃度的增大，猴面包樹果多糖對(duì)DPPH·的清除率隨之升高，在濃度大于5 mg/mL后，其對(duì)DPPH·清除率的增速減慢；VC對(duì)DPPH·的清除率與濃度整體呈正相關(guān)性，當(dāng)濃度高于0.2 mg/mL時(shí)，VC對(duì)DPPH·的清除率增速減緩并趨向平衡。

考察質(zhì)量濃度為0.1 mg/mL～5 mg/mL的猴面包樹多糖與DPPH·清除率之間的線性關(guān)系，得到回歸方程y=15.244x+11.372，其R2=0.996，線性關(guān)系良好。根據(jù)回歸方程得到猴面包樹果多糖對(duì)DPPH·清除的半最大效應(yīng)濃度（concentration for 50%of maximal effect，EC50）值為2.53 mg/mL，用同樣的方式得到 VC對(duì)DPPH·清除率的回歸方程為y=429.58x-2.94，其R2=0.998，VC對(duì) DPPH·清除的 EC50值為 0.12 mg/mL。試驗(yàn)結(jié)果表明猴面包樹果多糖對(duì)DPPH·具有良好的清除能力，但遠(yuǎn)低于同濃度的VC對(duì)DPPH·的清除能力。

2.3.2 猴面包樹果多糖對(duì)ABTS+·的清除能力

按照方法1.2.6.2考察0.5mg/mL～15mg/mL質(zhì)量濃度的猴面包樹果多糖和0.025 mg/mL～0.5 mg/mL的Trolox對(duì)ABTS+·的清除能力，所得試驗(yàn)結(jié)果如圖10所示。

圖10 不同濃度猴面包樹果多糖和Trolox對(duì)ABTS+·的清除能力Fig.10 Scavenging ability of Trolox and polysaccharide from baobab fruit to ABTS+·

由圖10可以看出，在較低濃度范圍內(nèi)，猴面包樹果多糖對(duì)ABTS+·的清除能力隨著濃度的增大而增強(qiáng)，當(dāng)濃度高于12 mg/mL時(shí)，其對(duì)ABTS+·的清除率趨于平衡。Trolox對(duì)ABTS+·的清除能力隨著濃度的增大而增強(qiáng)，當(dāng)濃度高于0.4 mg/mL時(shí)，其對(duì)ABTS+·的清除率亦趨于平衡。

對(duì)0.5 mg/mL～7.5 mg/mL范圍內(nèi)的猴面包樹果多糖和0.025 mg/mL～0.25 mg/mL范圍內(nèi)的Trolox與ABTS+·的清除率做線性回歸，得到回歸方程分別為y=8.871 1x+1.519 3和y=303.24x+2.398 5，其R2分別為0.997和0.998，由此得到猴面包樹果多糖和Trolox對(duì)ABTS+·的EC50分別為5.5 mg/mL和0.16 mg/mL。試驗(yàn)結(jié)果表明猴面包樹果多糖對(duì)ABTS+·具有較好的清除能力，但遠(yuǎn)低于同濃度的Trolox對(duì)ABTS+·的清除能力。

2.3.3 猴面包樹果多糖的還原能力

天然產(chǎn)物的還原能力是反應(yīng)其抗氧化性活性的一個(gè)有效指標(biāo)，并且其抗氧化活性與還原力呈正相關(guān)，還原能力越強(qiáng)，其抗氧化活性越強(qiáng)[17]。按照方法1.2.6.3考察0.5 mg/mL～10 mg/mL的猴面包樹果多糖和0.05 mg/mL～0.75 mg/mL的VC的還原能力，試驗(yàn)結(jié)果如圖11所示。

反應(yīng)體系在700 nm處的吸光值越大，則對(duì)應(yīng)樣品的還原能力越強(qiáng)。由圖11可以看出，在所設(shè)濃度范圍內(nèi)，猴面包樹果多糖還原能力隨濃度升高而增強(qiáng)。VC在濃度低于0.5 mg/mL范圍內(nèi)呈現(xiàn)同樣的趨勢(shì)，其后增大VC的濃度，在本方法的底物濃度范圍內(nèi)，其還原能力達(dá)到平衡。10 mg/mL的猴面包樹果多糖的還原能力和0.1 mg/mL的VC的還原能力基本一致。試驗(yàn)結(jié)果表明猴面包樹果多糖具有良好的還原能力，從而證明了其較好的抗氧化活性。

圖11 不同濃度猴面包樹果多糖和VC的還原能力Fig.11 Reducing ability of polysaccharide from baobab fruit and VCin different concentrations

3 結(jié)論

探索將超聲波輔助提取技術(shù)應(yīng)用于猴面包樹果多糖的提取中，通過單因素試驗(yàn)和響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)獲得了超聲波輔助提取猴面包樹果多糖的最佳工藝條件為：料液比 1∶33.2（g/mL），提取溫度 68 ℃，提取時(shí)間1.5 h，超聲功率342 W，提取2次，在此條件下，多糖提取率達(dá)到（45.03±0.76）%，因此，通過響應(yīng)面優(yōu)化模型獲得的最佳提取工藝條件，其數(shù)據(jù)可靠。

考察了猴面包樹果多糖的抗氧化性能，分別通過DPPH·清除試驗(yàn)、ABTS+·清除試驗(yàn)和還原能力試驗(yàn)進(jìn)行測(cè)定。在所設(shè)濃度范圍內(nèi)，猴面包樹果多糖對(duì)DPPH·的清除能力與質(zhì)量濃度呈正相關(guān)性，其對(duì)DPPH·的EC50為2.53 mg/mL；猴面包樹果多糖對(duì)ABTS+·的清除能力隨質(zhì)量濃度的升高而增強(qiáng)，其對(duì)ABTS+·的EC50為5.5 mg/mL；猴面包樹果多糖的還原能力隨質(zhì)量濃度升高而增強(qiáng)，10 mg/mL的猴面包樹果多糖和0.1 mg/mL的VC的還原能力基本一致。試驗(yàn)結(jié)果表明猴面包樹果多糖具有良好的抗氧化活性。

綜上所述，本試驗(yàn)通過超聲波輔助提取法制備猴面包樹果多糖，獲得了最佳提取工藝，并對(duì)多糖的抗氧化活性進(jìn)行研究，證明了其良好的抗氧化性能。鑒于目前對(duì)猴面包樹果多糖的研究較少，本試驗(yàn)結(jié)果可以為猴面包樹果多糖的進(jìn)一步研究及更廣泛地開發(fā)利用提供數(shù)據(jù)參考。

參考文獻(xiàn)：

[1]魏靜,段瓊芬,張燕平.猴面包樹引種栽培及其應(yīng)用前景[J].熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué),2011,31(7):16-21

[2]CHADARE F J,LINNEMANN A R,HOUNHOUIGAN J D,et al.Baobab Food Products:A Review on their Composition and Nutritional Value[J].Food Science and Nutrition,2009,49(3):254-274

[3]Sidibe M,Williams J T Baobab.Adansonia digitata[M].Southampton:International Centre for Underutilised Crops,2002

[4]王穎,王國(guó)紅,曾霞,等.響應(yīng)面法優(yōu)化荸薺多糖的提取工藝[J].食品研究與開發(fā),2016,37(6):112-116

[5]BERTOZZI C R,KIESSLING L L.Chemical glycobiology[J].Science,2001,291:2357-2364

[6]黃曉君,聶少平,王玉婷,等.鐵皮石斛多糖提取工藝優(yōu)化及其成分分析[J].食品科學(xué),2013,34(22):21-26

[7]LI J W,LIU Y F,FAN L P,et al.Antioxidant activities of polysaccharides from the fruiting bodies of Zizyphus Jujuba cv.Jinsixiaozao[J].Carbohydrate Polymers,2011,84(1):390-394

[8]劉杭達(dá),馬千蘇,王傑,等.紫山藥粗多糖提取工藝的優(yōu)化及其抗氧化性的研究[J].食品工業(yè)科技,2015,36(23):208-213

[9]MARIITA R M,ORODHO J A,OKEMO P O,et al.Methanolic extracts of Aloe secundiflora Eng l.inhibits in vitro growth of tuberculosis and diarrhea-causing bacteria[J].Pharmacognosy Research,2011,3(2):95-99

[10]劉杰麟,章靈華,錢玉昆.枸杞多糖對(duì)S180荷瘤小鼠的免疫抑瘤作用[J].中國(guó)免疫學(xué)雜志,1996,12(2):115-117

[11]岑穎洲,王凌云,馬夏軍,等.羊棲菜多糖體外抗病毒作用研究[J].中國(guó)病理生理雜志,2004,20(5):765-768

[12]史大華,劉瑋煒,劉永江,等.低分子量海帶巖藻多糖的制備及其抗腫瘤活性研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2012,23(1):53-55

[13]LU Y R,FOO Y L.Antioxidant and radical scavenging activities of polyphenols from apple pomace[J].Food Chemistry,2000,68(1):81-85

[14]RE R,PELLEQRINI N,PANNALA A,et al.Antioxidant activity applying an improved ABTS radical cation decolorization assay[J].Free Radical Biology&Medicine,1999,26(9/10):1231-1237

[15]吳峰華,楊虎清,何志平.山核桃青果皮提取物抗氧化活性研究[J].中國(guó)食品學(xué)報(bào),2011,11(1):40-44

[16]廖素鳳,陳建雄,黃志偉,等.響應(yīng)曲面分析法優(yōu)化葡萄籽原花青素提取工藝的研究[J].熱帶作物學(xué)報(bào),2011,32(3):554-559

[17]FAN L P,LI J W,DENG K Q,et al.Effects of drying methods on the antioxidant activities of polysaccharides extracted from Ganoderma lucidum[J].Carbohydrate Polymers,2012,87(2):1849-1854