番茄葉霉病菌對咯菌腈敏感基線的建立及田間防治效果評價(jià)

禾麗菲，陳樂樂，肖斌，趙時(shí)峰，李秀環(huán)，慕衛(wèi)，劉峰

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番茄葉霉病菌對咯菌腈敏感基線的建立及田間防治效果評價(jià)

禾麗菲1，陳樂樂1，肖斌2，趙時(shí)峰3，李秀環(huán)1，慕衛(wèi)1，劉峰1

（1山東農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院/山東省蔬菜病蟲生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/山東省高校農(nóng)藥毒理與應(yīng)用技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東泰安 271018；2山東省農(nóng)藥檢定所，濟(jì)南 250100；3莘縣農(nóng)業(yè)局，山東聊城 252400）

【目的】番茄葉霉病是危害溫室番茄的重要病害之一，其致病菌對常用殺菌劑已產(chǎn)生不同程度的抗性，亟待開發(fā)高效替代藥劑。研究旨在探索番茄葉霉病菌（）對咯菌腈的敏感性，建立敏感性基線，明確咯菌腈在田間的防治效果?！痉椒ā吭谏綎|濟(jì)南、泰安、聊城、濰坊、萊蕪、淄博6個(gè)蔬菜產(chǎn)區(qū)采集感葉霉病的番茄葉片，經(jīng)分離純化后，培養(yǎng)得到126株番茄葉霉菌株；采用菌絲生長速率法和孢子萌發(fā)法，測定咯菌腈對3株代表菌株菌絲生長、分生孢子萌發(fā)和芽管伸長3個(gè)生長發(fā)育階段的抑制活性；利用菌絲生長速率法測定不同地區(qū)的126株菌株對咯菌腈的敏感性，并建立敏感性基線。通過兩年的田間試驗(yàn)，評價(jià)咯菌腈的保護(hù)作用和治療作用?！窘Y(jié)果】咯菌腈對番茄葉霉病菌芽管伸長和菌絲生長均有較強(qiáng)的抑制活性，平均EC50值分別為0.30和0.80 μg·mL-1，而對孢子萌發(fā)抑制作用較弱，平均EC50值均＞100 μg·mL-1。不同地區(qū)番茄葉霉病菌群體間對咯菌腈的敏感性均無顯著差異。其中，濰坊地區(qū)葉霉菌株對咯菌腈敏感性最高，平均EC50值為0.43 μg·mL-1；淄博地區(qū)葉霉菌株敏感性相對較低，平均EC50值為0.79 μg·mL-1。泰安、濟(jì)南、聊城、萊蕪地區(qū)的葉霉菌株敏感性無顯著差異，平均EC50值分別為0.65、0.75、0.71、0.58 μg·mL-1。咯菌腈對供試菌株菌絲生長的EC50值在0.16—1.69 μg·mL-1，平均值為0.64 μg·mL-1，敏感性頻率呈單峰曲線分布，符合正態(tài)分布，可作為番茄葉霉病菌對咯菌腈的敏感性基線。2016—2017年田間試驗(yàn)表明，咯菌腈對番茄葉霉病均具有較好的防治效果，咯菌腈在60.75 g a.i./hm2劑量下對番茄葉霉病保護(hù)作用和治療作用防治效果分別為72.21%—75.02%和61.94%—70.65%，均顯著高于對照藥劑苯醚甲環(huán)唑100 g a.i./hm2、代森錳鋅700 g a.i./hm2和甲基硫菌靈540 g a.i./hm2，與氟吡菌酰胺150 g a.i./hm2防治效果差異不顯著；咯菌腈有效成分為40.50 g a.i./hm2時(shí)對番茄葉霉病保護(hù)作用和治療作用的防治效果分別高于對照藥劑甲基硫菌靈540 g a.i./hm2的保護(hù)和治療防治效果。2017年咯菌腈有效成分為20.25 g a.i./hm2時(shí)對番茄葉霉病保護(hù)作用和治療作用的防治效果分別顯著高于對照藥劑代森錳鋅700 g a.i./hm2和甲基硫菌靈540 g a.i./hm2的保護(hù)作用和治療作用的防治效果?？┚鎸Ψ讶~霉病的保護(hù)作用均高于治療作用。【結(jié)論】咯菌腈對番茄葉霉病菌菌絲生長和芽管伸長具有顯著的抑制作用，而對孢子萌發(fā)基本無抑制作用，山東省6個(gè)蔬菜產(chǎn)區(qū)番茄葉霉病菌對咯菌腈相對比較敏感。該藥劑在番茄葉霉病的田間防治中具有一定的應(yīng)用潛力。

番茄葉霉病菌；咯菌腈；敏感基線；田間防治效果

0 引言

【研究意義】番茄葉霉病是由無性態(tài)真菌黃枝孢菌（）侵染引起的一種世界性病害，在保護(hù)地和露地條件下均可發(fā)生[1-4]。該病在中國黑龍江、吉林、遼寧、北京、天津、河北、山西、山東等地均有發(fā)生。高溫高濕有利于病菌傳播，其主要侵染葉片，發(fā)病初期葉正面產(chǎn)生褪綠斑，背面有白色霉層，嚴(yán)重時(shí)霉層變?yōu)樽睾稚?，葉片卷曲、黃化干枯，致使番茄葉片光合效率降低，營養(yǎng)物質(zhì)積累量減少，嚴(yán)重影響番茄產(chǎn)量，一般損失為20%—30%，嚴(yán)重時(shí)可達(dá)50%以上[5-6]。目前，化學(xué)防治是控制番茄葉霉病的主要手段，由于該病菌易變異導(dǎo)致抗藥性產(chǎn)生，需要不斷研發(fā)新型高效藥劑以滿足生產(chǎn)需要。【前人研究進(jìn)展】目前，國內(nèi)外登記用于防治番茄葉霉病的藥劑主要有甲氧基丙烯酸酯類的嘧菌酯、苯并咪唑類的多菌靈和甲基硫菌靈、麥角甾醇生物合成抑制劑類的氟硅唑、有機(jī)硫類的克菌丹、抗生素類的多抗霉素和春雷霉素等。但隨著各類殺菌劑的大量、廣泛使用，抗藥性問題越來越突出。王美琴等[7-8]對山西省的番茄葉霉病菌進(jìn)行了抗藥性監(jiān)測，發(fā)現(xiàn)各地菌株對多菌靈、乙霉威和代森錳鋅的抗性頻率分別在70%、33.3%和80%以上，且抗性能夠穩(wěn)定遺傳。同時(shí)又測定了山西各地區(qū)、遼寧沈陽、山東壽光和河北保定的番茄葉霉病菌對多菌靈和乙霉威的抗性水平，結(jié)果表明各菌株對這兩種殺菌劑均產(chǎn)生了不同程度的抗性，且抗性水平較高[8]。已有報(bào)道表明，遼寧省番茄葉霉病菌已對氟硅唑產(chǎn)生了不同程度的抗性，且氟硅唑與腈菌唑、三唑酮存在交互抗性[9]。趙建江等[10]研究表明，河北、浙江、江蘇等6省的番茄葉霉病菌對嘧菌酯也產(chǎn)生了不同程度的抗性?？┚嬉言谔镩g用于番茄灰霉病的防治，用于蘸花處理預(yù)防灰霉病，其在100 mg·L-1的劑量下防治效果達(dá)到100%[11]?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】咯菌腈屬非內(nèi)吸性的苯基吡咯類殺菌劑，具有高效、廣譜及持效期長的特點(diǎn)，因能專一性抑制病菌生長，廣泛用于防治農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的真菌性病害[12-13]。國際殺菌劑抗性行動(dòng)小組（FRAC）認(rèn)為咯菌腈的作用機(jī)理是影響滲透壓調(diào)節(jié)信號(hào)相關(guān)的組氨酸激酶的活性，即咯菌腈主要作用于組氨酸激酶（HOG）信號(hào)途徑，最終導(dǎo)致病菌死亡?？┚婢哂歇?dú)特的作用機(jī)制，與其他已知的殺菌劑沒有交互抗性，目前未發(fā)現(xiàn)對此類藥劑抗性菌株[11,14]。筆者實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn)，咯菌腈對番茄葉霉病菌具有較高的毒力[15]，但尚未進(jìn)行系統(tǒng)研究?！緮M解決的關(guān)鍵問題】建立番茄葉霉病菌對咯菌腈的敏感基線，明確咯菌腈對番茄葉霉病菌的作用方式及田間防治效果，為指導(dǎo)其合理使用提供依據(jù)。

1 材料與方法

試驗(yàn)于2016—2017年在山東農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院完成。

1.1 材料

供試菌株：2016年在山東濟(jì)南（JN）、泰安（TA）、聊城（LC）、濰坊（WF）、萊蕪（LW）、淄博（ZB）6個(gè)地區(qū)采集番茄葉霉病病葉，實(shí)驗(yàn)室分離純化，得到126株番茄葉霉病菌，轉(zhuǎn)接于馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA）培養(yǎng)基斜面上，4℃冰箱保存。

供試藥劑：95%咯菌腈（fludioxonil）原藥，山東濰坊潤豐化工股份有限公司；50%咯菌腈可濕性粉劑，瑞士先正達(dá)作物保護(hù)有限公司；95%多菌靈原藥（carbendazim），江蘇輝豐農(nóng)化股份有限公司；70%甲基硫菌靈（thiophanate-methyl）可濕性粉劑，江蘇龍燈化學(xué)有限公司；70%代森錳鋅（mancozeb）可濕性粉劑，江蘇南通寶葉化工有限公司；10%苯醚甲環(huán)唑（difenoconazole）水分散粒劑，山東東泰農(nóng)化有限公司；41.7%氟吡菌酰胺（fluopyram）懸浮劑，拜耳作物科學(xué)（中國）有限公司?？┚嬖幦苡诒?、多菌靈原藥溶于0.1 mol·L-1的鹽酸，用含0.1%吐溫-80的滅菌去離子水配制成10 mg·mL-1的母液備用。

供試培養(yǎng)基：馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂20 g，1 L去離子水），用于葉霉病菌菌株分離、純化、保存以及菌絲生長速率測定；水瓊脂（WA）培養(yǎng)基（瓊脂10 g，葡萄糖20 g，1 L去離子水），用于孢子萌發(fā)和芽管伸長的測定。

1.2 咯菌腈對番茄葉霉病菌的抑制活性測定

在所有供試菌株中隨機(jī)選擇3株番茄葉霉病菌菌株（LW-2、TA-23、JN-5），用于測定咯菌腈對番茄葉霉病菌菌絲生長、分生孢子萌發(fā)和芽管伸長的抑制活性。

采用菌絲生長速率法[16]測定咯菌腈對番茄葉霉病菌菌絲生長的抑制活性。將10 mg·mL-1咯菌腈母液稀釋為系列濃度，與冷卻至50℃左右的滅菌PDA培養(yǎng)基混合，配制咯菌腈濃度為0.2、0.5、1、2、5 μg·mL-1的含藥平板。將菌株培養(yǎng)7 d后用打孔器在菌落邊緣打取直徑為8 mm的菌餅，接種在含藥平板上。以不含藥劑的處理為空白對照。25℃下培養(yǎng)14 d后十字交叉法測量菌落直徑，每處理重復(fù)4次，根據(jù)公式（2）計(jì)算各藥劑處理對菌絲生長的抑制率。

菌落增長直徑（mm）=菌落直徑-菌餅直徑 （1）

菌絲生長抑制率（%）=（對照菌落增長直徑-處理菌落增長直徑）/對照菌落增長直徑×100 （2）

采用孢子萌發(fā)法[17]測定咯菌腈對番茄葉霉病菌分生孢子萌發(fā)和芽管伸長的抑制活性。供試菌株培養(yǎng)7 d后，用無菌去離子水將分生孢子洗下，雙層紗布過濾得到孢子懸浮液，在顯微鏡下調(diào)節(jié)孢子濃度為1×105個(gè)/mL。將咯菌腈母液稀釋成系列濃度，與冷卻至50℃左右的WA培養(yǎng)基混勻，配制成藥劑濃度為0.1、0.5、1、2、5、10、20、100 μg·mL-1的含藥WA平板。移取100 μL孢子懸浮液并均勻涂布在培養(yǎng)基表面，置于25℃生化培養(yǎng)箱黑暗培養(yǎng)。以不加藥劑為空白對照，每處理重復(fù)3次。培養(yǎng)14 h后顯微鏡下觀察孢子萌發(fā)情況，以芽管長度大于孢子短半徑視為萌發(fā)，待對照萌發(fā)率達(dá)到90%以上時(shí)，記錄各處理孢子萌發(fā)情況。每重復(fù)隨機(jī)調(diào)查3個(gè)視野，并且每個(gè)重復(fù)測量20—40個(gè)萌發(fā)孢子的芽管長度。按照公式（4）和（5）計(jì)算各處理的孢子萌發(fā)抑制率和芽管伸長抑制率。

孢子萌發(fā)率（%）=孢子萌發(fā)數(shù)/孢子總數(shù)×100（3）

孢子萌發(fā)抑制率（%）=（對照孢子萌發(fā)率-處理孢子萌發(fā)率）/對照孢子萌發(fā)率×100 （4）

芽管伸長抑制率（%）=（對照芽管長度-處理壓管長度）/對照芽管長度×100 （5）

1.3 番茄葉霉病菌對咯菌腈的敏感基線建立

采用菌絲生長速率法[16]測定126株番茄葉霉病菌對咯菌腈的敏感性。參照1.2的方法，配制咯菌腈濃度為0.1、0.2、0.5、1、2、5 μg·mL-1和多菌靈濃度為0.1、0.5、1、10、50、250、500、1000 μg·mL-1的PDA含藥平板，接菌后25℃黑暗培養(yǎng)14 d，以添加多菌靈的處理為藥劑對照，以不加藥劑處理為空白對照，每處理重復(fù)4次。采用十字交叉法測量菌落直徑，計(jì)算各處理菌絲生長抑制率。利用數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)軟件計(jì)算藥劑對各菌株的抑制中濃度（EC50）。

1.4 咯菌腈對番茄葉霉病的田間防治效果

田間藥效試驗(yàn)參照GB/T17980.111-2004《殺菌劑防治番茄葉霉病藥效試驗(yàn)準(zhǔn)則》。分別于2016年4—5月、9—10月和2017年9—10月在泰安市岱岳區(qū)大汶口鎮(zhèn)番茄葉霉病常年自然發(fā)生的日光溫室進(jìn)行試驗(yàn)，種植的番茄品種均為金鵬11-8。50%咯菌腈WP試驗(yàn)用量為20.25、40.50、60.75 g a.i./hm2，以10%苯醚甲環(huán)唑WDG 100 g a.i./hm2、41.7%氟吡菌酰胺SC 150 g a.i./hm2、70%代森錳鋅WP 700 g a.i./hm2和70%甲基硫菌靈WP 540 g a.i./hm2為對照藥劑，清水處理為空白對照，每處理設(shè)置4次重復(fù)，采用完全隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，每小區(qū)面積30 m2，設(shè)置保護(hù)行。使用WS-16農(nóng)用背負(fù)式噴霧器施藥。番茄葉霉病發(fā)病前施藥作為保護(hù)作用試驗(yàn)，發(fā)病后施藥作為治療作用試驗(yàn)，施藥前調(diào)查病情指數(shù)，每隔7 d施藥一次，共施藥3次。末次施藥后7 d調(diào)查病情指數(shù)，每小區(qū)三點(diǎn)取樣，每點(diǎn)調(diào)查5棵番茄植株，每株調(diào)查上中下3個(gè)復(fù)葉，以復(fù)葉上每張小葉片病斑面積占整個(gè)小葉片面積的百分率分級。分級標(biāo)準(zhǔn)：0級：無病斑；1級：病斑面積占整個(gè)小葉面積的5%以下；3級：病斑面積占整個(gè)小葉面積的6%—10%；5級：病斑面積占整個(gè)小葉面積的11%—20%；7級：病斑面積占整個(gè)小葉面積的21%—50%；9級：病斑面積占整個(gè)小葉面積的51%以上；并根據(jù)公式（6）—（8）計(jì)算病情指數(shù)及防治效果。

病情指數(shù)=∑（病級數(shù)×病級葉數(shù)）/（調(diào)查總?cè)~數(shù)×9）×100 （6）

防治效果（%）（藥前有基數(shù)）= [1-（空白對照藥前病情指數(shù)×處理組藥后病情指數(shù)）/（空白對照藥后病情指數(shù)×處理組藥前病情指數(shù)）]×100 （7）

防治效果（%）（藥前無基數(shù)）=（對照組病情指數(shù)-處理組病情指數(shù)）/對照組病情指數(shù)×100 （8）

1.5 數(shù)據(jù)處理與分析

采用DPS 7.05軟件計(jì)算藥劑對番茄葉霉病菌菌絲生長、孢子萌發(fā)及芽管伸長的毒力回歸方程、EC50（EC90）及95%置信限。田間藥效試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Tukey法進(jìn)行差異顯著性分析（＜0.05）。

2 結(jié)果

2.1 咯菌腈對不同發(fā)育階段番茄葉霉病菌的抑制活性

咯菌腈對3株番茄葉霉病菌的芽管伸長和菌絲生長抑制作用較強(qiáng)，平均EC50值分別為0.30和0.80 μg·mL-1，對孢子萌發(fā)抑制作用較弱，平均EC50值均＞100 μg·mL-1（表1）。

表1 咯菌腈對不同發(fā)育階段番茄葉霉病菌的抑制活性

2.2 山東省不同地區(qū)番茄葉霉病菌菌絲對咯菌腈的敏感性

采自山東省6個(gè)地區(qū)的番茄葉霉病菌對咯菌腈的敏感性均較高，EC50值范圍為0.16—1.69 μg·mL-1，不同地區(qū)病原菌群體間對咯菌腈的敏感性均無顯著差異。濰坊地區(qū)葉霉菌株對咯菌腈敏感性最高，平均EC50值為0.43 μg·mL-1，淄博地區(qū)葉霉菌株敏感性相對較低，平均EC50值為0.79 μg·mL-1。泰安、濟(jì)南、聊城、萊蕪地區(qū)的葉霉菌株敏感性平均EC50值分別為0.65、0.75、0.71、0.58 μg·mL-1。番茄葉霉病菌對多菌靈的敏感性明顯低于咯菌腈，除發(fā)現(xiàn)少數(shù)敏感菌株外，多菌靈對73.81%的葉霉菌株EC50值均＞1 mg·mL-1，表明山東地區(qū)番茄葉霉病菌對多菌靈的抗性頻率較高（表2）。

表2 山東省不同地區(qū)番茄葉霉病菌菌絲對咯菌腈的敏感性

同列數(shù)據(jù)后相同字母表示差異不顯著（＞0.05）。下同

The same letters in the same column indicate no significant difference (＞0.05). The same as below

2.3 番茄葉霉病菌對咯菌腈的敏感基線

利用菌絲生長速率法測定了126株番茄葉霉病菌對咯菌腈的敏感性，其EC50分布范圍為0.16—1.69 μg·mL-1，平均值為（0.64±0.03）μg·mL-1，敏感性頻率分布呈單峰曲線，經(jīng)Shapiro-Wilk 法分析得到=0.63＞0.05，符合正態(tài)分布（圖1），可以作為山東地區(qū)番茄葉霉病菌對咯菌腈的敏感基線。

圖1 番茄葉霉病菌對咯菌腈的敏感性頻率分布

2.4 咯菌腈對番茄葉霉病的田間防治效果

每年4—5月、9—10月是番茄葉霉病發(fā)生的最佳時(shí)期，同時(shí)番茄葉霉病發(fā)生的嚴(yán)重程度較高，所以本研究田間試驗(yàn)防治效果均在76%以下。兩年的試驗(yàn)結(jié)果表明，咯菌腈對番茄葉霉病均具有較高的防治效果。2016—2017年咯菌腈有效成分為60.75 g a.i./hm2時(shí)對番茄葉霉病保護(hù)作用和治療作用的防治效果分別為72.21%—75.02%和61.94%—70.65%，均高于對照藥劑苯醚甲環(huán)唑100 g a.i./hm2、氟吡菌酰胺150 g a.i./hm2、代森錳鋅700 g a.i./hm2和甲基硫菌靈540 g a.i./hm2的防治效果，但2017年咯菌腈60.75 g a.i./hm2對番茄葉霉病保護(hù)作用和治療作用的防治效果與對照藥劑氟吡菌酰胺150 g a.i./hm2的保護(hù)和治療防治效果差異均不顯著。2016年咯菌腈有效成分為40.50 g a.i./hm2時(shí)對番茄葉霉病保護(hù)作用和治療作用的防治效果分別高于對照藥劑甲基硫菌靈540 g a.i./hm2的保護(hù)和治療防治效果；2017年咯菌腈有效成分為40.50 g a.i./hm2時(shí)對番茄葉霉病保護(hù)作用和治療作用的防治效果分別高于對照藥劑苯醚甲環(huán)唑100 g a.i./hm2、代森錳鋅700 g a.i./hm2和甲基硫菌靈540 g a.i./hm2的保護(hù)和治療防治效果。而2016年咯菌腈有效成分為20.25 g a.i./hm2時(shí)對番茄葉霉病保護(hù)作用和治療作用的防治效果分別顯著高于對照藥劑甲基硫菌靈540 g a.i./hm2的保護(hù)作用和治療作用的防治效果；2017年咯菌腈有效成分為20.25 g a.i./hm2時(shí)對番茄葉霉病保護(hù)作用和治療作用的防治效果分別顯著高于對照藥劑代森錳鋅700 g a.i./hm2和甲基硫菌靈540 g a.i./hm2的保護(hù)作用和治療作用的防治效果。2016—2017年咯菌腈20.25、40.50和60.75 g a.i./hm2的保護(hù)作用防治效果均略高于其治療作用的防治效果（表3—表5）。

3 討論

咯菌腈對不同發(fā)育階段番茄葉霉病菌的抑制活性存在差異。其中，咯菌腈對番茄葉霉病菌的芽管伸長和菌絲生長具有較高的毒力，而對孢子萌發(fā)基本無抑制作用，這與郭貝貝等的研究結(jié)果基本一致[15,18-19]。

表4 咯菌腈對番茄葉霉病的田間防治效果（2016年9—10月）

陳治芳等研究發(fā)現(xiàn)，咯菌腈對番茄灰霉病菌的孢子萌發(fā)、芽管伸長和菌絲生長均具有較好的抑制活性[20-21]，與本試驗(yàn)結(jié)果不同，表明不同病原菌對咯菌腈的反應(yīng)存在差異?？┚鎸Ψ讶~霉病菌的作用機(jī)制及其對葉霉病菌和灰霉病菌不同發(fā)育階段抑制作用差異的原因有待進(jìn)一步明確。

山東省6個(gè)地區(qū)的番茄葉霉病菌對咯菌腈均具有較高的敏感性，其中濰坊地區(qū)菌株敏感性最高，淄博地區(qū)菌株敏感性較低，其他各地區(qū)敏感性居中且差異不顯著?？┚婺壳吧形吹怯浻糜诜乐畏讶~霉病，但各地區(qū)卻存在敏感性低的菌株，這是否與地理差異和不同地區(qū)間天然的耐藥個(gè)體有關(guān)還需要進(jìn)一步研究。近年來，咯菌腈逐步開始用于防治番茄灰霉病，而葉霉病與灰霉病在環(huán)境適宜條件下可在同一時(shí)期發(fā)生，在同一地塊用其防治灰霉病也可能會(huì)導(dǎo)致部分葉霉病菌株敏感性降低[22]。

咯菌腈作用廣譜，建立敏感基線對監(jiān)測病原菌的敏感性變化和抗藥性發(fā)生具有重要價(jià)值[23-25]，也為藥劑的科學(xué)使用提供理論依據(jù)。范子耀等[12]建立了馬鈴薯早疫病菌對咯菌腈的敏感性基線，指出咯菌腈與吡唑醚菌酯和苯醚甲環(huán)唑之間無交互抗性關(guān)系；Liu等建立了河南省番茄灰霉病菌對咯菌腈的敏感性基線，研究了抗性菌株的生物學(xué)特性，認(rèn)為咯菌腈防治灰霉病具有潛在的抗性風(fēng)險(xiǎn)[22,26]。目前，已在西班牙、以色列、德國、美國發(fā)現(xiàn)了抗咯菌腈的灰霉菌株[27-30]。王智等[31]研究表明，咯菌腈對番茄灰霉病菌具有較高的抑制活性，且與腐霉利和多菌靈之間均不存在交互抗性。由于咯菌腈在番茄葉霉病上尚未取得登記，本研究建立的番茄葉霉病菌對咯菌腈的敏感性基線，可為其在該病上使用提供依據(jù)。灰霉病、早疫病和葉霉病均為番茄上的常見病害，根據(jù)本研究及其他作物上類似病害研究結(jié)果，在這些病害同時(shí)發(fā)生時(shí)，科學(xué)合理地施用咯菌腈能夠?qū)崿F(xiàn)兼治作用。目前生產(chǎn)中可用于番茄葉霉病防治的藥劑種類較少，且番茄葉霉病對多種藥劑產(chǎn)生不同程度的抗性。而咯菌腈具有獨(dú)特的作用機(jī)制，不易與其他類藥劑產(chǎn)生交互抗性，所以該藥具有登記防治番茄葉霉病的前景。

田間條件下50%咯菌腈可濕性粉劑60.75 g a.i./hm2對番茄葉霉病的保護(hù)和治療防治效果均顯著高于對照藥劑70%代森錳鋅可濕性粉劑700 g a.i./hm2和70%甲基硫菌靈可濕性粉劑540 g a.i./hm2的防治效果，與41.7%氟吡菌酰胺和10%苯醚甲環(huán)唑防治效果差異不顯著，因此，咯菌腈有可能與氟吡菌酰胺以及苯醚甲環(huán)唑等藥劑輪換使用防治番茄葉霉病?？┚鎸θ~霉病菌芽管伸長具有較高的抑制活性，這表明咯菌腈可以通過抑制分生孢子芽管的伸長，阻止菌絲體的形成和入侵植株，而對植株起到較好的保護(hù)作用。咯菌腈屬于非內(nèi)吸性殺菌劑，可被植物少量吸收，但不能在植株體內(nèi)輸導(dǎo)，不過咯菌腈性質(zhì)穩(wěn)定，能夠在施藥部位長期存在，因此保護(hù)作用優(yōu)異。而對于已侵入植株體內(nèi)的病菌，咯菌腈僅能夠限制著藥部位葉霉菌絲的擴(kuò)展，治療效果有限。本研究證明咯菌腈的治療作用略低于保護(hù)作用，建議在發(fā)病前預(yù)防性使用。

4 結(jié)論

咯菌腈對番茄葉霉病菌的芽管伸長和菌絲生長具有較高的毒力，而對孢子萌發(fā)基本無抑制作用。山東省不同地區(qū)番茄葉霉病菌對咯菌腈相對比較敏感。在田間咯菌腈對番茄葉霉病的保護(hù)性防治效果高于治療性防治效果，應(yīng)在發(fā)病前或初期使用。

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Establishment of Sensitivity baseline and Evaluation of Field Control efficacy of fludioxonil against

He LiFei1, Chen LeLe1, XIAO Bin2, ZHAO Shifeng3, Li XiuHuan1, Mu Wei1, Liu Feng1

(1College of Plant Protection, Shandong Agricultural University/Shandong Provincial Key Laboratory for Biology of Vegetable Diseases and Insect Pests/Shandong Provincial Key Laboratory of Pesticide Toxicology & Application Technique, Taian 271018, Shandong;2Shandong Provincial Pesticide Verification Institute, Ji’nan 250100;3Shenxian Agriculture Bureau, Liaocheng 252400, Shandong)

【Objective】Tomato leaf mold is one of the most devastating diseases that endanger greenhouse tomato. At present,has been reported to develop resistance to common fungicides, and thus the control efficacy reduced. It is necessary to develop and introduce the new and effective alternative fungicides. The objective of this study is to investigate the sensitivity ofto fludioxonil, establish baseline toxicity and definite the effect of disease prevention of fludioxonil in the field.【Method】The strains of tomato leaf mold were collected from six vegetable production areas, including Ji’nan, Taian, Liaocheng, Weifang, Laiwu and Zibo in Shandong Province. After isolation and purification, 126 strains ofwere obtained. With the methods of inhibition rate on mycelial growth and spore germination, the inhibitory activity of fludioxonil against mycelial growth, spore germination and germ tube elongation at different growth and development stages of 3 representative strains was determined. The sensitivity of 126 strains from different regions in Shandong to fludioxonil was determined by mycelial growth rate method, and the sensitive baseline was also established. Two-year field trials were conducted to evaluate the protective and curative effects of fludioxonil.【Result】Fludioxonil had high inhibitory activity against germ tube elongation and mycelial growth, the average EC50values were 0.30 and 0.80 μg·mL-1, respectively, but the inhibition of spore germination ofwas weak, the average EC50values were greater than 100 μg·mL-1. There was no significant difference in the sensitivity of the strains among different populations of tomato leaf mold. Among them, the strains from Weifang had the highest sensitivity to fludioxonil, and the average EC50value was 0.43 μg·mL-1. The sensitivity of strains from Zibo was relatively low, with an average EC50value of 0.79 μg·mL-1. There was no significant difference in the sensitivity ofin Taian, Ji’nan, Liaocheng and Laiwu areas, with average EC50values of 0.65, 0.75, 0.71, 0.58 μg·mL-1, respectively. EC50values to fludioxonil ranged from 0.16 to 1.69 μg·mL-1, with a mean of 0.64 μg·mL-1. The average EC50value ofto fludioxonil could be regarded as the baseline sensitivity as the sensitivity frequency complied with single peak curve of Gaussian distribution. In 2016-2017, fludioxonil had high control effect on tomato leaf mold, the protective and curative activity of fludioxonil on tomato leaf mold was 72.21%-75.02% and 61.94%-70.65% at the dose of 60.75 g a.i./hm2, which was significantly higher than that of difenoconazole at 100 g a.i./hm2, mancozeb at 700 g a.i./hm2and thiophanate-methyl at 540 g a.i./hm2, and which had no significant difference with fluopyram at 150 g a.i./hm2. The protective and curative activity of fludioxonil on tomato leaf mold at the dose of 40.50 g a.i./hm2was significantly higher than that of thiophanate-methyl at 540 g a.i./hm2. In 2017, the protective and curative activity of fludioxonil on tomato leaf mold at the dose of 20.25 g a.i./hm2was significantly higher than that of mancozeb at 700 g a.i./hm2and thiophanate-methyl at 540 g a.i./hm2. All the protective effect of fludioxonil against tomato leaf mold was higher than that of the curative ones.【Conclusion】Fludioxonil has good inhibitive activity against germ tube elongation and mycelial growth of, but had no effect on spore germination, and the strains from six cities in Shandong Province are relatively sensitive to it. Fludioxonil could be applied before the invasion of the pathogen and has great potential in the control of tomato leaf mold.

; fludioxonil; sensitivity baseline; field control efficacy

（責(zé)任編輯 岳梅）

10.3864/j.issn.0578-1752.2018.08.005

2017-11-16；

2017-12-21

國家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃（2016YFD0200500）、山東省重大科技創(chuàng)新工程（2017CXGC0207）

禾麗菲，E-mail：18763823516@163.com。

劉峰，Tel/Fax：0538-8242611；E-mail：fliu@sdau.edu.cn