徐剛?cè)?，衛(wèi)朝輝，高 洪，嚴玉霖，曾夢穎，王改菊

(1.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)科技學(xué)院，昆明 650201；2.云南省德宏州梁河縣動物衛(wèi)生監(jiān)督所，云南德宏 679200；3.云南省德宏州梁河縣動物疫病預(yù)防控制中心，云南德宏 679200)

豬瘟(classical swine fever，CSF)，俗稱“爛腸瘟”，是由豬瘟病毒(classical swine fever virus， CSFV)引起的嚴重危害養(yǎng)豬業(yè)的一種高傳染性、高致死性豬傳染病[1-2]，豬瘟通常會引發(fā)高熱、出血綜合征，具有較高的死亡率[3]，也是豬主要繁殖障礙性疾病之一。世界動物衛(wèi)生組織(OIE)將其列為A類法定報告的傳染病[4]，我國也將其列為一類動物傳染病。豬瘟在我國呈現(xiàn)地區(qū)性散發(fā)性特點，并在豬群中存在一定隱性感染和持續(xù)性感染現(xiàn)象[5]。世界動物衛(wèi)生組織推薦的豬瘟抗體檢測方法是ELISA法，因其檢測方法操作簡便快速、結(jié)果易于判別，使得血清學(xué)方法檢測CSFV抗體成為目前預(yù)防和控制豬瘟大面積感染的主要手段，同時在監(jiān)測流行狀態(tài)和流行病學(xué)調(diào)查等方面有著重要的作用，是監(jiān)測免疫豬群抗體水平的主要方法，對豬瘟疫苗免疫效果評價及免疫程序的制定具有重要指導(dǎo)意義。但血液樣品采集具有耗時費力、對動物造成傷害、威脅采集人員安全等缺點，近年來有報道唾液樣品可替代血清樣品檢測豬瘟抗體[6]。為了解豬血清豬瘟抗體和相應(yīng)唾液中抗體的關(guān)系，根據(jù)云南省境內(nèi)某種豬場的血清豬瘟抗體和相應(yīng)唾液中抗體檢測數(shù)據(jù)，研究分析了血清豬瘟抗體和相應(yīng)唾液中抗體水平的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 檢測樣品 從云南省境內(nèi)9個豬瘟疫苗免疫1個月以上的規(guī)?；i場隨機采集60唾液樣品。每個相應(yīng)的豬場采集血液樣品，共采集180份血液，實驗室分離血清，-4 ℃保存血清。唾液采集方法：以圈為單位，將經(jīng)過高壓滅菌的棉線用鐵絲固定在豬圈的適當位置，利用豬的好奇心，讓其自由咀嚼，經(jīng)10～30 min后，待棉線濕透后，收集到密封袋中帶回實驗室。把棉紗繩上的唾液擠入10 mL離心管中，待檢測。

1.1.2 檢測試劑盒 豬瘟病毒ELISA抗體檢測試劑盒購于IDEXX股份有限公司。

1.2 方法

1.2.1 抗體水平檢測 待檢血清和唾液采用 ELISA 方法檢測CSFV抗體具體操作按照產(chǎn)品使用說明書進行。

1.2.2 數(shù)據(jù)處理與分析 豬瘟抗體水平檢測數(shù)據(jù)用阻斷率(%)表示，阻斷率=(1-S/N)×100%(S=樣品孔OD450nm值，N=陰性對照孔平均OD450nm)。檢測結(jié)果判斷標準為：CSFV抗體阻斷率≥40% 為陽性；阻斷率<40%為陰性。相應(yīng)血清抗體阻斷率算平均阻斷率，數(shù)據(jù)采用SPSS19.0進行統(tǒng)計分析，運用Pearson相關(guān)性分析(雙側(cè))豬唾液與血清中豬瘟抗體相關(guān)性。

2 結(jié)果與分析

2.1 CSFV血清抗體水平檢測結(jié)果 CSFV抗體阻斷率平均值為35.63%，離散度為14.51%，陽性率為37.50%(表1)。

2.2 CSFV唾液抗體水平檢測結(jié)果 CSFV抗體阻斷率平均值為33.53%，離散度為13.58%，陽性率為35.40%(表2)。

表1 CSFV血清抗體水平檢測結(jié)果Tab 1 Result of antibody of CSFV in serum of pigs

表2 CSFV唾液抗體水平檢測結(jié)果Tab 2 Result of antibody of CSFV in oral fluid of pigs

2.3 CSFV抗體阻斷率與唾液抗體水平的相關(guān)性

表3結(jié)果顯示，CSFV抗體阻斷率與相應(yīng)豬唾液抗體的皮爾遜相關(guān)系數(shù)為0.768，呈顯著正相關(guān)(P<0.05)。

2.4 CSFV抗體阻斷率與唾液抗體水平的線性回歸關(guān)系 由表4、表5以及圖1可得出CSFV抗體阻斷率(Y，單位：%)與相應(yīng)豬唾液抗體(X，單位：%)的回歸方程：Y=1.092X+1.535，r2=0.590。

表3 CSFV抗體阻斷率與唾液抗體水平的相關(guān)性Tab 3 Correlation between antibody of CSFV in oral fluid and serum of pigs

表4 回歸系數(shù)計算Tab 4 Regression coefficient calculation

表5 回歸顯著性檢驗Tab 5 Regression test

圖1 CSFV抗體阻斷率與唾液抗體水平的線性回歸關(guān)系Fig 1 Linear regression relationship of antibody of CSFV in oral fluid and serum of pigs

3 討 論

豬瘟血清抗體的檢測對于CSFV疫病診斷、免疫效果的評估和免疫時機的選擇都具有重要的指導(dǎo)意義，是目前獸醫(yī)實驗室診斷使用較多的方法?？贵w阻斷率與血清中的中和抗體效價成正相關(guān)，阻斷率越高，表明中和抗體水平越高[7]?？贵w陽性率代表檢測血清中中抗體阻斷率在40% 以上的個體占所檢全體的比例，抗體陽性率越高，表明豬群的疫苗免疫效果越好。離散度=標準差/平均阻斷率×100%。離散度越低，表明豬群個體的抗體水平整齊度好，免疫效果越好；反之，說明個體的抗體水平差異較大，免疫效果不好，離散度最好控制在15%以內(nèi)[7]。試驗數(shù)據(jù)顯示，豬瘟血清抗體阻斷率平均值為35.63%，離散度為14.51%；抗體陽性率為37.50%；CSFV唾液抗體阻斷率平均值為33.53%，離散度為13.58%，陽性率為35.40%，說明豬瘟血清抗體及相應(yīng)的唾液抗體整齊度較好?？贵w的陽性率檢測結(jié)果表明樣品收集豬場的豬群疫苗免疫效果需要加強。試驗進一步探討了豬血清中抗體阻斷率與唾液中抗體阻斷率的相關(guān)性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩者的皮爾遜相關(guān)系數(shù)為0.768。相關(guān)系數(shù)絕對值大于0.3，可以視為相關(guān)性[8]。因此，兩者之間呈現(xiàn)顯著正相關(guān)(P<0.05)。根據(jù)試驗數(shù)據(jù)及相關(guān)性推測，當唾液中抗體阻斷率高于35%時，可判為豬瘟陽性。試驗的樣本數(shù)量有限，初步探究出了豬血清中抗體阻斷率與唾液中抗體阻斷率的相關(guān)性，兩者進一步的相關(guān)性還需進一步試驗研究。

唾液的采集方法簡便，可減少動物應(yīng)激，是評估豬群實時健康動態(tài)的良好工具[9]，但不是所有檢測血清抗體的試劑盒都可以用來檢測唾液樣品，需要選用敏感性較高的ELISA試劑盒提高唾液中豬瘟抗體與血清中相應(yīng)抗體的符合率[10]。推廣唾液在獸醫(yī)檢測中的運用還有許多問題需要完善，例如唾液中抗體滴度低于血清中抗體滴度；唾液中抗體主要以分泌型的IgA為主，而血液中主要以IgG為主，有研究發(fā)現(xiàn)，唾液中IgA抗體檢測的靈敏性要高于IgG抗體的靈敏性[11-12]。目前商品化的ELISA檢測試劑盒主要針對血清中的IgG抗體，因此開發(fā)針對分泌型IgA的ELISA檢測試劑盒將有利于唾液中抗體的檢測。

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