劉 平，周忠良

（1.河北省唐山市樂亭縣王灘鎮(zhèn)動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，河北 唐山 063000；2.河北省唐山市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，河北 唐山 063000）

奶牛乳房炎是危害奶牛養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的主要疾病之一，其發(fā)病率高達(dá)40%以上。發(fā)病奶牛的乳腺組織發(fā)生病理變化，引起奶牛的產(chǎn)奶量和奶品質(zhì)下降，嚴(yán)重時(shí)使病牛失去生產(chǎn)性能，甚至使牛死亡，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。根據(jù)乳房炎及乳汁有無肉眼可見變化分為臨床型乳房炎和隱性乳房炎。國內(nèi)外資料顯示，隱性乳房炎的發(fā)病率高于臨床型。目前，抗生素治療和疫苗免疫依然是防治奶牛乳房炎的主要方法。但是，致病菌血清型的多樣性降低了疫苗保護(hù)率，高品質(zhì)奶制品的需求大大限制住了抗生素的使用。中獸醫(yī)藥在我國有幾千年的應(yīng)用歷史，對(duì)動(dòng)物疾病的治療，畜產(chǎn)品品質(zhì)的改善具有極大的潛在價(jià)值。本研究將探討含藥穴位貼治療隱性奶牛乳房炎的可行性和效果。

1 材料與方法

1.1 主要試劑

綠原酸（批號(hào)E-0075，購自上海同田生物技術(shù)股份有限公司）;聚丙烯酸鈉（批號(hào)S108369）、羧甲基纖維素鈉（批號(hào)C104986）、阿拉伯膠(批號(hào) A108975)、明膠（批號(hào) G108396）、高嶺土（批號(hào) 38120）、羊毛脂（批號(hào) L116310）、甘油（批號(hào)G116203）及氮酮（批號(hào) A104374）均購自 Aladdin。

1.2 穴位貼的制備

巴布劑基質(zhì)配方為聚丙烯酸鈉0.75g、阿拉伯膠7.5g、明膠7.5g、甘油19mL、羧甲基纖維素鈉0.3g、水 40mL、高嶺土3g、羊毛脂1g，混合均勻，分散于1/2配方量的水中，溶脹3h。同時(shí)將配方量的高嶺土分散于配方量的甘油中，混合均勻。后于沸水浴中，邊攪拌溶脹后的聚丙烯酸鈉等混合物，邊向其中加入混合了高嶺土的甘油及余量的水、配方量的羊毛脂，攪拌20min。隨后，以1%氮酮為促透劑，加入綠原酸，配成含藥量1%的穴位貼；空白穴位貼使用同體積的無水乙醇替代綠原酸溶液。

1.3 隱性乳房炎臨床病例的篩選

試驗(yàn)地點(diǎn)：河北樂亭縣王灘鎮(zhèn)奶牛場(chǎng)。

隱性乳房炎的確定主要靠實(shí)驗(yàn)室診斷而確定，如細(xì)菌學(xué)檢查、血瓊脂培養(yǎng)基厭氣培養(yǎng)；或體細(xì)胞記數(shù)法，即每mL乳汁中體細(xì)胞數(shù)超過50萬即可診斷為乳房炎癥。本試驗(yàn)選擇處于泌乳中期的荷斯坦奶牛，使用細(xì)胞計(jì)數(shù)儀來檢測(cè)奶中的體細(xì)胞數(shù)來篩選符合條件的病例。符合條件的病例分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，每組各10頭奶牛，20個(gè)乳區(qū)（每頭奶牛選2個(gè)乳區(qū)）。

1.4 病例的治療

在符合條件的奶牛身上，選取陽明穴、滴明穴、通乳穴和后海穴4個(gè)穴位作為穴位貼的治療部位。實(shí)驗(yàn)組貼敷綠原酸巴布劑，對(duì)照組貼敷空白巴布劑。每隔3d貼敷一次穴位貼；分別于第5、10、15天取乳樣檢測(cè)體細(xì)胞數(shù)量，同時(shí)統(tǒng)計(jì)對(duì)應(yīng)乳區(qū)的產(chǎn)奶量。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)由Excel初步處理后用GraphPad prism 6.0進(jìn)行顯著性統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 含綠原酸穴位貼對(duì)選定乳區(qū)產(chǎn)奶量的影響（見表1）

結(jié)果表明，在貼敷含藥穴位貼后，實(shí)驗(yàn)組選定乳區(qū)的平均產(chǎn)奶量逐漸升高；然而，貼敷空白穴位貼的對(duì)照組，選定乳區(qū)的平均產(chǎn)奶量逐漸降低。

2.2 含綠原酸穴位貼對(duì)選定乳區(qū)奶中體細(xì)胞數(shù)量的影響

結(jié)果表明，與貼敷穴位貼前相比，對(duì)照組乳區(qū)所產(chǎn)的牛奶中平均體細(xì)胞維持在較高水平且略有升高；而貼敷含藥穴位貼后，實(shí)驗(yàn)組乳區(qū)所產(chǎn)的牛奶中體細(xì)胞數(shù)持續(xù)降低，在貼敷15d后，奶中體細(xì)胞數(shù)顯著低于對(duì)照組（圖1）。

3 討論

奶牛隱性乳房炎是奶牛的重要疾病之一，其發(fā)病率高臨床型奶牛乳房炎，因無明顯的臨床癥狀被忽視，但其對(duì)奶業(yè)卻造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。隱形乳房炎可使奶牛產(chǎn)奶量降低10%～15%。同時(shí)，患病乳區(qū)牛奶中體細(xì)胞數(shù)增加,營養(yǎng)價(jià)值下降,危害人類健康。因乳房炎對(duì)泌乳部位的損害，會(huì)導(dǎo)致奶牛的產(chǎn)乳能力下降，導(dǎo)致奶牛的利用年限縮短。

表 1 綠原酸穴位貼對(duì)奶牛產(chǎn)奶量影響（kg）

圖1 含藥穴位貼對(duì)患病乳區(qū)牛奶中體細(xì)胞數(shù)的影響

抗生素等化學(xué)藥品一直是防治奶牛乳房炎的常用方法，但化學(xué)藥品的長期大量應(yīng)用不僅使病原菌產(chǎn)生耐藥性，大大降低臨床治療效果；也會(huì)使其在奶和奶制品中殘留量超標(biāo)，給人類健康造成很大的威脅。蒲公英治療乳癰（乳房炎）的常用中藥，綠原酸是其主要成分之一。綠原酸的性質(zhì)穩(wěn)定，具有臨床應(yīng)用廣泛、定量準(zhǔn)確、檢測(cè)快捷、提取簡便等優(yōu)點(diǎn)。具有抗菌、消炎和抗病毒等作用，目前國內(nèi)外研究普遍認(rèn)為綠原酸具有很好的抗金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草桿菌等作用。研究發(fā)現(xiàn)，提取的綠原酸對(duì)流感病毒及腺病毒均具有一定的抑制作用，體外對(duì)新城疫病毒有阻斷抑制或中和作用。但綠原酸的口服生物利用率非常低，靜脈注射后又可能引起過敏反應(yīng)。經(jīng)皮給藥可以繞過肝臟的首過效應(yīng)以及其對(duì)胃腸道的破壞，維持比較穩(wěn)定且相對(duì)持久的血藥濃度，提高生物利用度，降低藥物的毒副作用，所以我們考慮綠原酸的經(jīng)皮給藥。

穴位貼敷，通過藥物作用于穴位，使藥物快速的產(chǎn)生藥理作用，從而發(fā)揮出藥物效應(yīng)、經(jīng)穴效應(yīng)的雙重治療作用，從而達(dá)到更好的治療疾病和調(diào)整機(jī)體機(jī)能的效果。巴布劑因其大容量的載藥系統(tǒng)、相對(duì)穩(wěn)定的血藥濃度、與皮膚親和性高等優(yōu)點(diǎn)，被世界廣泛的認(rèn)同為經(jīng)皮給藥體系新的發(fā)展方向。本實(shí)驗(yàn)使用巴布劑制作的含綠原酸穴位貼治療奶牛隱性乳房炎。試驗(yàn)結(jié)果表明，這種方法可以使患病乳區(qū)所產(chǎn)牛奶量維持在一定水平（表1）；對(duì)降低患病乳區(qū)牛奶中的體細(xì)胞數(shù)具有一定的效果（圖1）?？梢詾槟膛ｋ[性乳房炎的臨床治療方法提供一定參考。

雖然本研究的結(jié)果能夠給我們一些啟發(fā)，為尋找防治奶牛隱性乳房炎的新方法提供思路。但是，在研究就過程中也發(fā)現(xiàn)了一些問題：（1）對(duì)穴位的準(zhǔn)確選取是保證治療效果的基礎(chǔ)；（2）實(shí)驗(yàn)?zāi)膛Ｔ谶\(yùn)動(dòng)和倒臥時(shí)會(huì)時(shí)貼敷的穴位貼發(fā)生脫落。因此，為使這種方法可以準(zhǔn)確高效的運(yùn)用到臨床中，我們將會(huì)在后續(xù)的研究中解決上述問題。

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