歐李仁提取物體外降糖作用研究

張 玲，張江寧，丁衛(wèi)英，楊 春，王宇婷

（山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工研究所，山西太原 030031）

0 引言

α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶是影響體內(nèi)對(duì)碳水化合物消化和吸收的2種關(guān)鍵酶，抑制這2種酶的活性，可以限制胃腸道對(duì)碳水化合物的降解和對(duì)葡萄糖的吸收，從而可以有效地抑制餐后血糖的快速升高[1-2]。不僅能夠調(diào)節(jié)糖類(lèi)代謝，又能延緩糖尿病的發(fā)生和發(fā)展。目前，糖尿病尚無(wú)理想的治療方法，傳統(tǒng)的降糖藥長(zhǎng)期服用會(huì)有一定的毒副作用，所以從天然產(chǎn)物中提取高效的α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶抑制劑成為近年來(lái)的研究熱點(diǎn)[3]。研究表明，具有抑制這2種酶的天然產(chǎn)物中大多都富含黃酮、多酚、多糖等，如楊梅果實(shí)酚類(lèi)物質(zhì)[4]、海藻多糖[5]、花粉黃酮[6]等。

歐李（Cerasus humilis（Bge.）kernel）為薔薇科櫻桃屬，是我國(guó)特有的一個(gè)古老野生灌木果樹(shù)樹(shù)種，其果實(shí)富含礦質(zhì)營(yíng)養(yǎng)，其中鈣含量為當(dāng)今水果之冠，故又名鈣果。歐李果實(shí)近年來(lái)的開(kāi)發(fā)應(yīng)用及深加工多集中于果汁、果脯、果酒、果醋等的制備中[7]。果實(shí)加工后會(huì)產(chǎn)生大量的果仁，而果仁也具有很高的營(yíng)養(yǎng)和藥用價(jià)值[8-10]。歐李仁也是我國(guó)醫(yī)書(shū)中記載的一種常用藥（郁李仁），可治療津枯腸燥、食積氣滯、腹脹便秘、水腫、腳氣、小便不利等[11]。對(duì)歐李仁提取物降糖作用進(jìn)行初步研究可為歐李資源的綜合利用，以及從天然產(chǎn)物中提取高效的α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶抑制劑的開(kāi)發(fā)與應(yīng)用提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

歐李仁，采自山西農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝果園；苦杏仁苷、α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶、pNPG（4-硝基苯基-B-D-吡喃葡萄糖苷）阿卡波糖，Sigma公司提供；DNS顯色劑和其他試劑均為分析純。

粉碎機(jī)、離心機(jī)、756型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)、磁力攪拌器、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀等。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 乙醇和水提取液的制備

稱(chēng)取樣粉10 g，分別用200 mL 75%乙醇和水在45℃下磁力攪拌提取3 h，超聲波提取20 min，以轉(zhuǎn)速4 800 r/min離心10 min；收集上清液、濃縮并定容至100 mL。

1.2.2 乙醇和水提取液活性成分含量測(cè)定

主要包括苦杏仁苷的測(cè)定[12]、粗多糖的測(cè)定[13]和總黃酮的測(cè)定[14]。

1.2.3 對(duì)α-葡萄糖苷酶活性抑制能力的測(cè)定

參考文獻(xiàn)[15]并稍作改動(dòng)。依次在試管中加入400 μL pH值6.8的磷酸緩沖液，200 μL樣品溶液和200 μL α-葡萄糖苷酶溶液（0.13U/L），混勻，于37℃條件下水浴反應(yīng)15 min，而后加入2.5 mmol/L的pNPG溶液400 μL，繼續(xù)在37℃條件下水浴反應(yīng)15 min，最后加入5 mL 0.1 mol/L的碳酸鈉溶液終止反應(yīng)。于波長(zhǎng)405 nm處測(cè)定其吸光度。以阿卡波糖作為陽(yáng)性對(duì)照，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

式中：A1——緩沖溶液+α-葡萄糖苷酶溶液+樣品溶液+pNPG溶液+Na2CO3溶液；

A2——緩沖溶液+樣品溶液+pNPG溶液+Na2CO3溶液；

Ac——緩沖溶液+α-葡萄糖苷酶溶液+

pNPG溶液+Na2CO3溶液。

1.2.4 對(duì)α-淀粉酶活性抑制能力的測(cè)定

參考文獻(xiàn)[16]并稍作改動(dòng)。將0.5 mL待測(cè)樣品與0.5 mL的α-淀粉酶溶液加入試管中，在37℃條件下水浴反應(yīng)30 min，加入1%的淀粉溶液1 mL，繼續(xù)在37℃條件下水浴反應(yīng)15 min，水浴反應(yīng)結(jié)束后，立即加入1 mL DNS顯色劑，沸水浴5 min后冷卻至室溫。加入10 mL蒸餾水稀釋混勻，于波長(zhǎng)540 nm處測(cè)定其吸光度。以阿卡波糖作為陽(yáng)性對(duì)照，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

式中：B1——α-淀粉酶溶液+樣品+淀粉溶液+DNS顯色劑；

B2——α-淀粉酶溶液+樣品+DNS顯色劑；

Bc——α-淀粉酶溶液+淀粉溶液+DNS顯色劑。

2 結(jié)果與分析

2.1 歐李仁提取物活性成分測(cè)定

歐李仁提取液活性成分見(jiàn)表1。

表1 歐李仁提取液活性成分/mg·100 mL-1

從表1可以得知，歐李仁乙醇提取液的總黃酮、粗多糖和苦杏仁苷均高于水提取液，尤其是苦杏仁苷含量，乙醇提取液其含量可達(dá)62.6 mg/100 mL。

2.2 阿卡波糖對(duì)α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶抑制能力的分析

阿卡波糖對(duì)α-葡萄糖苷酶抑制率的影響見(jiàn)圖1，阿卡波糖對(duì)α-淀粉酶抑制率的影響見(jiàn)圖2。

圖1 阿卡波糖對(duì)α-葡萄糖苷酶抑制率的影響

圖2 阿卡波糖對(duì)α-淀粉酶抑制率的影響

從圖1可知，質(zhì)量濃度為10 mg/mL的阿卡波糖對(duì)0.132 U/mL的α-葡萄糖苷酶抑制率可達(dá)到78.89%，隨著質(zhì)量濃度降低，其抑制率也逐漸下降，8倍稀釋后其抑制率下降為36.39%。

從圖2可知，質(zhì)量濃度為1 mg/mL的阿卡波糖對(duì)1 U/mL的 α-淀粉酶的抑制率可高達(dá)93.52%；同樣隨著稀釋倍數(shù)的增加，其抑制率也逐漸下降，8倍稀釋后其抑制率下降為54.78%。

從圖1和圖2可以看出，阿卡波糖對(duì)α-淀粉酶的抑制率明顯高于對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制率，此結(jié)論與文獻(xiàn)[17]的研究結(jié)果相同。

2.3 歐李仁提取物對(duì)α-葡萄糖苷酶抑制能力的分析

歐李仁不同提取物對(duì)α-葡萄糖苷酶抑制率的影響見(jiàn)圖3。

圖3 歐李仁不同提取物對(duì)α-葡萄糖苷酶抑制率的影響

從圖3得知，歐李仁乙醇提取物對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制率高于水提物和10 mg/mL的阿卡波糖的抑制率。同樣質(zhì)量濃度下，未經(jīng)稀釋的乙醇提取物對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制率可達(dá)到80%以上，而水提取物對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制率則小于80%，與質(zhì)量濃度10 mg/mL的阿卡波糖對(duì)0.132 U/mL的α-葡萄糖苷酶抑制率相近。隨著質(zhì)量濃度下降，乙醇提取物、水提取物和阿卡波糖對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制率也逐漸降低。

2.4 歐李仁提取物對(duì)α-淀粉酶抑制能力分析

歐李仁不同提取物對(duì)α-淀粉酶抑制率的影響見(jiàn)圖4。

圖4 歐李仁不同提取物對(duì)α-淀粉酶抑制率的影響

從圖4可知，歐李仁乙醇提取物對(duì)α-淀粉酶的抑制率明顯高于水提物的抑制率。同樣質(zhì)量濃度下，未經(jīng)稀釋的乙醇提取物對(duì)α-淀粉酶的抑制率可高達(dá)95%以上，而水提取物對(duì)α-淀粉酶的抑制率為74%左右，乙醇提取物質(zhì)量濃度經(jīng)8倍稀釋后，其抑制率還可達(dá)到58%左右，相當(dāng)于0.14 mg/mL左右的阿卡波糖對(duì)α-淀粉酶的抑制率，而水提取物同質(zhì)量濃度下，其抑制率已下降為37%左右。同樣，隨著質(zhì)量濃度下降，乙醇提取物、水提取物和阿卡波糖三者對(duì)α-淀粉酶的抑制率也逐漸降低。

3 結(jié)論

以歐李仁為原料，α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制率為指標(biāo)，并以阿卡波糖作為陽(yáng)性對(duì)照，研究其醇提物和水提物的降糖作用。歐李仁活性提取物對(duì)α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶都有一定的抑制作用，歐李仁乙醇提取物對(duì)這2種酶的抑制率高于水提物，這可能是因?yàn)槠浯继嵛镏锌傸S酮、粗多糖、苦杏仁苷等活性成分的含量高于水提物。另外，歐李仁乙醇提取物原質(zhì)量濃度下對(duì)α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的抑制率為84.05%和95.95%，分別相當(dāng)于對(duì)12 mg/mL左右的阿卡波糖對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制率和1 mg/mL左右的阿卡波糖對(duì)α-淀粉酶的抑制率，表明歐李仁提取物有一定的降糖作用，其體內(nèi)降糖機(jī)理還有待進(jìn)一步研究。

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