常規(guī)試管凝集試驗與虎紅平板凝集試驗檢測布病抗體結(jié)果對比分析

張宇 王志堅

本文的主要研究目的，是通過虎紅平板凝集試驗以及常規(guī)試管凝集試驗對布魯菌病進行檢測，并且分析對比兩者的檢測結(jié)果。在實際檢測的過程中，主要運用試管凝集試驗以及虎紅平板凝集試驗這兩種方法。通過對試驗結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)，在四百份的高溫血清當(dāng)中，其中有十八份試管凝集試驗陽性，完全來自于三十六份的虎紅平板凝集試驗的陽性當(dāng)中。因此我們能夠得出，在對布魯菌病的實際檢測過程中，應(yīng)用通過虎紅平板凝集試驗進行有效的篩選，所得到的陽性樣品可以通過試管凝集試驗來進行復(fù)核。

所謂布魯菌病，通常也被人稱作布病或者波狀熱病。這種疾病主要是布魯菌所引發(fā)的，并且在世界范圍內(nèi)分布廣泛，人類與牲畜都會感染這種慢性的細菌性傳染疾病。布魯菌病在我國隸屬于二類牲畜疫病。在我國大多數(shù)布魯菌病發(fā)病率高的區(qū)域，國家頒布了2015年必須對該疾病進行有效的控制，到了2020年必須徹底的清除該疾病。因此，對于布魯菌病陽性高效的檢測手段，對該疾病的預(yù)防與醫(yī)治都有著至關(guān)重要的意義。疾病控制機構(gòu)通過運用試管凝集試驗方法以及虎紅平板凝集試驗方法對四百例高危群體的樣品血清進行檢測對比分析。其詳細的分析檢測報告結(jié)果如下。

1 材料與方法

1.1 材料

在實際檢測的過程中，所使用的材料包括：試管凝集抗原試劑，虎紅平板凝集抗原試劑，并且都在有效期之間進行使用。所檢測的血清樣品來自于四百例布魯菌疾病的高危群體。

1.2 方法

1.2.1 虎紅平板凝集試驗（RBPT）

在實際檢測的過程中，將需要進行檢測的血清樣品，取出0.03mL，放置于玻片上，并且將0.03mL的虎紅平板抗原加入到其中，并且均勻混合，其判定結(jié)果將會在5min之內(nèi)產(chǎn)生。如果玻片上的混合物當(dāng)中產(chǎn)生顆粒狀的物質(zhì)或者產(chǎn)生凝集片，其檢測結(jié)果都為陽性（+）。如果混合液體呈現(xiàn)出十分渾濁的狀態(tài)，其檢測結(jié)果都為陰性（-）。

1.2.2 試管凝集試驗（SAT）

在運用該種方法進行實際檢測的過程中，需要稀釋被檢測的血清樣品。對于每一份的血清樣品，需要使用五支小試管，將2.3mL生理鹽水加入到第一個試管當(dāng)中，對于第二個試管，不需要加入生理鹽水，接下來將0.5mL加入到第三個試管、第四個試管以及第五個試管當(dāng)中。之后，通過對1mL吸管的有效使用，將需要進行檢測的0.2mL血清樣品吸入到其中，并且將其放置到第一個試管當(dāng)中，保證液體的均勻混合。在確定液體的均勻混合之后，繼續(xù)運用此吸管來吸取第一個試管當(dāng)中的血清，并且將這些血清分別以0.5mL的容量加入到第二個試管與第三個試管當(dāng)中，并且保證第三個試管當(dāng)中的液體均勻混合。之后吸出0.5mL的第四試管液體，將其融入到第五個試管當(dāng)中，并且確保第五個試管當(dāng)中的液體均勻混合，然后取出0.5mL的第五試管液體并將其丟棄。通過對這些試管當(dāng)中的血清稀釋度進行分析對比，我們發(fā)現(xiàn)第二個試管一直到第五個試管的稀釋度分別為1∶12.5、1∶25、1∶50、1∶100。在第二個試管以及第五個試管的稀釋血清檢測樣品當(dāng)中，分別將0.5mL的抗原稀釋液加入到其中。通過觀察發(fā)現(xiàn)，血清樣品的稀釋度第二個試管一直到第五個試管的稀釋度分別為1∶25、1∶50、1∶100、1∶200。同時進行抗原對照以及陽性與陰性的對照，并且對判斷比濁管進行制備。將所有的比濁管、對照管、試驗管有效震蕩之后，將其放置到37℃的溫箱之內(nèi)二十二個小時，將其取出在室溫的環(huán)境中放置兩個小時，之后將比濁管作為判斷的重要依據(jù)，進行試驗結(jié)果的判定。陽性血清的診斷準(zhǔn)則：試管凝集反應(yīng)血清 1∶100 稀釋度凝集現(xiàn)象++及以上就可以判定為布魯菌病陽性。

2 結(jié)果

通過四百份高危群體的樣品血清進行細致的檢測，其中試管凝集試驗有十八份的陽性監(jiān)測結(jié)果，虎紅平板凝集試驗有三十六份陽性監(jiān)測結(jié)果，并且試管凝集試驗的十八例陽性結(jié)果全部包含在虎紅平板凝集試驗的三十六例陽性結(jié)果當(dāng)中。試管凝集試驗以及虎紅平板凝集試驗這兩種試驗手段有著十分重要的統(tǒng)計學(xué)含義，兩種檢測手段的陽性結(jié)果有著極大的差異性（χ2=16.06，P﹤0.005）。如下表所示：

通過對試驗信息數(shù)據(jù)的有效分析，能夠得知試管凝集試驗方法所產(chǎn)生的陽性概率為4.50%，虎紅平板凝集實驗方法所產(chǎn)生陽性的概率為9.00%，因此，相比之下虎紅平板凝集實驗相較于試管凝集試驗的陽性測定有著非常大的優(yōu)勢。

我國國標(biāo)運用試管凝集試驗檢測手段以及虎紅平板凝集試驗手段來進行檢測。通過實際操作我們發(fā)現(xiàn)，虎紅平板有著更快的反應(yīng)速度，并且操作方式極為簡單快捷，但是非常容易導(dǎo)致特異凝集的產(chǎn)生，致使假陽性的出現(xiàn)，該種方法對于大面積篩查非常適合。試管凝集試驗可以定量定性，并且有著非常強的敏感性與特異性，有著非常精準(zhǔn)的判斷結(jié)果。但是使用該種方法的過程中，所需要的群體血清以及布魯菌凝集抗原的量比較大。

在大面積篩查的過程中，虎紅平板凝集試驗?zāi)軌虬l(fā)揮重要作用。養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)在現(xiàn)今得到了飛速的發(fā)展，檢測工作者也在持續(xù)的增多，想要更加高效精準(zhǔn)的得出檢測結(jié)果，相關(guān)工作者可以將兩種檢測方法結(jié)合進行，進行優(yōu)勢互補，這樣才能使工作效率得到大幅度的提升。

（作者單位：111000遼寧省遼陽市太子河區(qū)動物疫病預(yù)防控制中心）