文/陳建立 &宋倫 &郝紅元 &姚勁挺 &孫友寶 &黃濤宏

使用島津ATLAS-USIS自動液液萃取與LCMSMS聯(lián)用測定唾液中5種毒品含量 // 本文建立了一種使用島津ATLAS-USIS自動液液萃取裝置與島津超快速三重四極桿液質聯(lián)用儀LCMS-8045聯(lián)用測定唾液中甲基苯丙胺、甲卡西酮、3,4-亞甲基二氧甲基苯丙胺、美沙酮和阿普唑侖含量的方法。該方法具有自動化程度高、分析速度快、靈敏度高、重現(xiàn)性好的特點，可用于唾液中這5種毒品含量的測定。

近年來毒品的濫用呈明顯增長的趨勢，其中，甲基苯丙胺(MAMP)，甲卡西酮，3,4-亞甲基二氧甲基苯丙胺(MDMA)，美沙酮和阿普唑侖屬于常見的毒品種類，由于其嚴重的社會和個人危害性，各國政府已經(jīng)采取了許多措施來打擊吸毒、販毒等活動。尿液、汗液、唾液、精液及毛發(fā)等生物樣品均可作為檢測的目標，這些樣品中的毒品含量檢測是確認是否吸毒的重要司法依據(jù)，其鑒定結果的準確性至關重要。這些樣品基質組成通常比較復雜，干擾成分多，待檢測組分含量較低，通常需要對樣品進行必要的前處理，常見的前處理方法有固相萃取、固相微萃取、液-液萃取等，其步驟復雜且耗時費力。因此開發(fā)自動化程度高、快速、準確、高效的前處理和檢測方法具有重要意義。

島津ATLAS-USIS自動前處理裝置可對唾液、尿液、血液等樣品自動進行液-液萃取制備樣品，復溶后可以進行液質聯(lián)用分析或氣質聯(lián)用分析，自動化程度高，大量節(jié)省人力物力。本文利用島津ATLAS-USIS自動前處理裝置，結合島津超快速三重四極桿液質聯(lián)用儀LCMS-8045建立了唾液中5種毒品含量的高自動化、高靈敏度的快速檢測方法。

圖1 島津ATLAS-USIS系統(tǒng)（左）和LCMS-8045（右）

實驗部分

儀器

本實驗使用ATLAS-USIS自動前處理裝置及島津超高效液相色譜儀LC-30A與三重四極桿質譜儀LCMS-8045聯(lián)用系統(tǒng)（如圖1所示）。具體配置為LC-30AD×2輸液泵、DGU-20A5在線脫氣機、SIL-30AC自動進樣器、CTO-30A柱溫箱、CBM-20A系統(tǒng)控制器、LCMS-8045三重四極桿質譜儀，LabSolutions Ver. 5.86色譜工作站。Column（2.1 mm I.D.×100 mm L., 2 μm）

流 動 相：A相-0.2%甲酸水溶液，B相-甲醇

流速：0.35 mL/min

柱溫：40℃

進樣量：10 μL

洗脫方式：梯度洗脫，B相初始濃度為10%, 洗脫程序見表1.

表1 梯度洗脫程序

2.質譜條件

離子化模式： ESI(+)

DL溫度 ： 250℃

接口溫度： 300℃

加熱氣：空氣 10.0 L/min

加熱模塊溫度：400℃

霧化氣：氮氣3.0 L/min

干燥氣：氮氣10.0 L/min

碰撞氣：氬氣

掃描模式：多反應監(jiān)測(MRM)

駐留時間：30 ms

MRM參數(shù)：見表2

圖2 0.5ng/mL標準樣品MRM色譜圖

表2 MRM優(yōu)化參數(shù)

表3 校準曲線參數(shù)（權重1/C2）

表4 檢出限和定量限

分析條件

1. 液相條件

色譜柱：Shim-pack GIST C18

標準溶液的配制

將1 mg/mL標準樣品（甲醇溶解）儲備液以流動相逐級稀釋得到濃度分別為 0.01、0.02、0.05、0.10、0.50、1.00、5.00、10.00、50.00ng/mL的標準溶液。

樣品前處理方法

（1）取準確體積的1 mg/mL標樣儲備液，加到空白唾液中，依次配制得到濃度分別為10.00、1.00、0.10ng/mL的基質加標溶液，每個濃度平行取樣6份，用ATLAS-USIS自動前處理裝置的MainSeq 2程序進行前處理，將前處理得到的樣品用流動相定容到5 mL，0.22 μm濾膜過濾后上機分析（注：ATLAS-USIS的MainSeq 2程序處理樣品時，取3 mL唾液，用4 mL乙酸乙酯萃取，然后取3 mL上清液進行烘干處理，最后手動用流動相將烘干剩余物定容到5 mL）；

（2）取準確體積的1 mg/mL標樣儲備液，加到經(jīng)ATLAS-USIS處理過的空白唾液中，依次配制得到濃度分別為10.00、1.00、0.10 ng/mL的基質加標溶液，0.22 μm濾膜過濾后上機分析以考察基質效應。

圖3 校準曲線

結果與討論

標準樣品的MRM色譜圖

標準樣品的MRM色譜圖如圖2所示。

線性范圍

將濃度為 0.02、0.05、0.10、0.20、0.50、1.00、2.00、5.00、10.00、20.00、50.00 ng/mL5 種目標物標準工作液，按1.2中的分析條件上機分析，以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，外標法建立校準曲線，結果如圖3所示，線性方程、線性范圍和相關系數(shù)見表3。

檢出限和定量限

對濃度為0.02 ng/mL溶液進樣分析，以ASTM法計算噪聲，以噪聲的3倍作為最低檢出限（即S/N=3，LOD表示），以噪聲的10倍作為最低定量限（即S/N=10，LOQ表示），則儀器對5種目標物的LOD和LOQ結果如表4所示。

精密度實驗

將ATLAS-USIS前處理裝置處理得到的樣品用1.2的方法進行分析，考察儀器的重復性，目標物在不同濃度下的保留時間和峰面積的相對標準偏差分別在0.02～0.13% 和 0.73～7.84% 之 間，結果表明儀器具有良好的精密度如表5所示。

表5 ATLAS-USIS處理樣品的保留時間和峰面積重復性結果（n=6）

表6 ATLAS-USIS前處理裝置回收率結果

回收率實驗

在空白唾液中添加5種目標物，按照1.4-(2)用ATLAS-USIS對樣品處理后進樣分析，計算回收率，結果如表6所示，在不同濃度下5種目標物的回收率在68.9～93.1%之間。

基質效應

分別配制低、中、高三份不同濃度的標準溶液和樣品加標液，以相同濃度樣品加標液所得峰面積同標準溶液所得峰面積的比值換算成百分比作為基質效應進行考察。實驗結果見表7，由表7可知在不同濃度下5種目標物基質效應結果在90.2～113.7%之間，表明基質效應對目標物檢測的干擾較小。

表7 基質效應考察

結論

本文建立了一種使用ATLASUSIS自動前處理裝置及島津超高效液相色譜儀LC-30A和三重四極桿質譜儀LCMS-8045聯(lián)用測定唾液中甲基苯丙胺(MAMP)、甲卡西酮、3,4-亞甲基二氧甲基苯丙胺(MDMA)、美沙酮和阿普唑侖含量的方法。以外標法定量，校準曲線線性良好，線性相關系數(shù)不低于0.9979。對低、中、高不同濃度的樣品平行測試6次，保留時間和峰面積的相對標準偏差分別在0.02～0.13%和0.73～7.84%之間，儀器精密度良好，檢出限和定量限分別為0.001-0.006 ng/mL和0.003-0.020 ng/mL。該方法具有自動化程度高、分析速度快、靈敏度高、重現(xiàn)性好的特點，可用于唾液中這5種毒品含量的測定。