姜煜琪

摘 要：目的：建立檢測原料藥格列喹酮殘留溶劑檢定方法并建立其檢驗方法學(xué)。方法：本次測定使用Agilent 7890A氣相色譜儀，J&W; Scientific DB-624毛細管色譜柱和J&W; Scientific HP-INNOWax毛細管色譜柱，氫火焰離子化檢測器，以頂空進樣和手動進樣法通過外標(biāo)法測定格列喹酮中相關(guān)工藝殘留溶劑。結(jié)論：該方法應(yīng)用合理、準(zhǔn)確可靠，采用外標(biāo)法分別進樣分析，精密度和重復(fù)性良好，可以應(yīng)用于原料藥格列喹酮內(nèi)含的各類殘留溶劑的測定，并應(yīng)用于殘留溶劑方面的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：格列喹酮，殘留溶劑，方法學(xué)

格列喹酮是高活性胰島β細胞激動劑，具有較強的選擇性，在第二代口服磺脲類降糖藥中應(yīng)用廣泛。由于其絕大部分由膽汁代謝排除，故適用于肝、腎功能不全及具有相關(guān)代謝障礙的糖尿病患者，尤其適用于Ⅱ型糖尿病合并腎病的治療，藥效安全穩(wěn)定。[1]本次研究通過一系列實驗，建立了完整的格列喹酮殘留溶劑檢驗方法，實驗結(jié)果表明，本方法重復(fù)性好、準(zhǔn)確可靠，適用于現(xiàn)有工藝過程中格列喹酮殘留溶劑的質(zhì)量控制。

一、儀器及實驗樣品

Agilent 7890A氣相色譜儀，Agient 7964E頂空進樣器（美國Agilent科技有限公司）；Ms204s/01化學(xué)分析天平（瑞士Mettler Toledo公司）。

原料藥格列喹酮（某公司，T1708001，T1708002，T1709003），色譜純甲醇、乙醇、正丙醇、二甲苯、環(huán)己烷、N，N-二甲基甲酰胺，二甲基亞砜。

二、實驗過程與實驗結(jié)果

2015年版《中國藥典》（四部）附錄[2]中確定氣相色譜法為測定殘留溶劑的首選方法，本文選用氣相色譜法對工藝內(nèi)殘留溶劑進行測定。

（1）儀器硬件及條件選擇

為保證實驗的易操作性及各殘留成分檢測的準(zhǔn)確性，本實驗選用J&WScientificDB-624;毛細管色譜柱（6%氰丙基苯基-94%二甲基硅氧烷固定液，30m×0.53mm，膜厚3μm，中等級性）測定甲醇、乙醇、正丙醇、環(huán)己烷，溶劑采用二甲基亞砜進行試驗，按毛細管柱頂空進樣系統(tǒng)程序升溫法如下條件進行測試程序：

選擇火焰離子化檢測器（FID）和J&WScientificHP-INNOWax;毛細管色譜柱（聚乙二醇固定液，30×0.53，膜厚1μm，強極性）測定二甲苯和N，N-二甲基甲酰胺，按毛細管柱手動進樣系統(tǒng)程序升溫法如下條件進行測試程序：

測得出峰時間：DB-624色譜柱中甲醇2.60min，乙醇3.48min，正丙醇4.05min，環(huán)己烷8.10min，溶劑二甲基亞砜15.58min。HP-INNOWax色譜柱中二甲苯11.3min-12.4min，N，N-二甲基甲酰胺15.25min，溶劑二甲基亞砜19.21min。上述各峰出峰時間合理易辨認，分離度符合實驗要求，溶劑不干擾待測溶劑出峰，適用于本次實驗的要求。

（2）樣品和對照品配制

以二甲基亞砜為溶劑配制甲醇、乙醇、正丙醇、環(huán)己烷100μg/mL的混合溶液，精密量取混合對照品A置頂空瓶中，密封瓶口，即得對照品溶液A。以二甲基亞砜為溶劑配制二甲苯100μg/mL，N，N-二甲基甲酰胺50μg/mL的混合溶液，即得對照品溶液B。

精密稱定本品適量，置50mL容量瓶中，加入適量二甲基亞砜胺振搖使溶解，冷卻后定容，配制成40mg/ml的樣品溶液，即得供試品溶液b。精密量取適量置于頂空瓶內(nèi)，密封瓶口，即得供試品溶液a。

（3）條件推定

①升溫程序：調(diào)整色譜柱DB-624柱箱升溫程序為：起始柱溫40℃，保持10min，以40℃的速率升至180℃，保持3分鐘。調(diào)整色譜柱HP-INNOWax柱箱升溫程序為：起始柱溫為60℃，以每分鐘10℃的速率升至180℃，保持3分鐘，再以每分鐘50℃的速率升至230℃，保持3分鐘。

②進樣口條件：原料藥格列喹酮在高溫下穩(wěn)定，故確定頂空進樣和手動進樣進樣口溫度均為200℃，分流比1：10避免色譜柱超載同時保證實驗穩(wěn)定性。

③檢測器條件：在200℃，250℃，300℃下分別測定樣品殘留溶劑，其中250℃以上溫度對實驗重復(fù)性沒有明顯影響，故確定檢測器溫度為250℃。

④頂空進樣器條件：采用通用條件85℃，加熱時間30min。經(jīng)測定不影響實驗測定，可以滿足實驗要求。

（4）方法學(xué)考察

①線性測試：按照“2.2”項下要求分別配制相對濃度為50%，80%，100%，150%，200%的對照品溶液，按照“2.3”項下推定條件分別進樣并記錄色譜圖，通過計算色譜圖甲醇、乙醇、正丙醇、環(huán)己烷、二甲苯、N，N-二甲基甲酰胺峰面積進而計算各組分線性常數(shù)。結(jié)果表明上述對照品組分在實驗范圍內(nèi)均成線性比例，各組分線性常數(shù)k>0.98，符合實驗要求。

②重復(fù)性測試：按照“2.2”項下要求配制對照品溶液，按照“2.3”項下推定條件連續(xù)進樣12針，分別計算12針中各對照品成分峰面積的RSD%。結(jié)果表明上述各對照品組分RSD%<1%，符合實驗要求。

③精密度測試：取原料藥樣品，每份樣品分為6份，按照“2.2”項下要求配制對照品溶液，將6份樣品各連續(xù)測定6次，同時安排兩名實驗員按照“2.3”項下推定條件進行平行實驗，分別計算兩批樣品中各對照品峰面積平均值、含量平均值及上述兩者的RSD%，再將兩名實驗員的得出各項結(jié)果進行比較計算，得出兩者計算結(jié)果的RSD%。結(jié)果表明上述兩批樣品中各組分的峰面積平均值、含量平均值及上述兩者的RSD%均符合限度要求，不同實驗員所得結(jié)果間的RSD%小于允許值，符合實驗要求。

（5）實際測定

取原料藥格列喹酮3批，按照“2.2”項下要求配制對照品溶液，按照“2.3”項下條件分別進樣，分別記錄色譜圖中各對照成分峰面積并計算其殘留量。結(jié)果表明3批樣品可以正常檢驗，各種對照品殘留量均符合規(guī)定要求。

三、總結(jié)

氣相色譜法是測定殘留溶劑的藥典首選方法，該方法具有易于操作、重復(fù)性好、精密度高等諸多特點。本文通過實驗參數(shù)篩選和方法學(xué)研究，確定了在現(xiàn)有工藝流程中各類可能殘留溶劑的檢驗參數(shù)，并通過實際實驗加以確認，證明了該方法具有準(zhǔn)確、簡便、重復(fù)性好等優(yōu)點，現(xiàn)已應(yīng)用于本原料藥的質(zhì)量控制實驗中。

參考文獻：

[1]格列喹酮.醫(yī)學(xué)百科[引用日期2018-7-10]

[2]國家藥典委員會.2015年版《中國藥典》（四部）附錄 中國醫(yī)藥科技出版社