羅文仁,李忠曉,李富金
(1.北京市華都峪口禽業(yè)有限責任公司,北京 101206;2.山東魯豐集團有限公司,山東 安丘 262100;3.齊魯動物保健品有限公司,山東 濟南 250100)
禽腦脊髓炎(AE)是一種主要侵害幼雞的病毒病,以運動失調(diào)和頭頸部震顫為特征,產(chǎn)蛋雞可出現(xiàn)一時性產(chǎn)蛋急劇下降,種蛋孵化率降低,死雛、弱雛增多等[1]。國內(nèi)1980年開始有疑似病例報道,1983年確診該病存在,此后國內(nèi)多個省份都有該疫病流行的報道[2],國內(nèi)對該病的相關(guān)研究也比較多,并研制了有效疫苗用于該病防控,通過疫苗免疫該病得到了有效控制。近幾年發(fā)病又開始增多,呈區(qū)域流行趨勢。禽腦脊髓炎病毒感染無抗體雛雞有明顯臨床癥狀,但青年雞、產(chǎn)蛋雞無明顯臨床癥狀,也無特征性肉眼病理變化,給該病臨床診斷帶來一定困難,常通過采集發(fā)病雞腦組織進行SPF雞胚連續(xù)傳代分離病原、人工感染試驗、PCR、瓊脂擴散試驗 (AGP)、ELISA檢測血清中抗體等進行鑒定、診斷和控制該疫病,其中ELISA檢測方法是一種快速的檢測系統(tǒng),可以準確、及時了解雞群抗體陽性率及數(shù)值高低[3],但抗體值與攻毒保護之間的相關(guān)性資料介紹很少,本實驗目的就是找到兩者之間的關(guān)系。
1.1.1 試驗用雞 28日齡SPF雞15只,購自濟南斯帕法斯公司。
1.1.2 試劑盒 ELISA試劑盒,IDEXX公司生產(chǎn)。
1.1.3 疫苗及強毒 禽腦脊髓炎滅活疫苗,齊魯動物保健品有限公司生產(chǎn)(批號:1612006);禽腦脊髓炎強毒,山東省農(nóng)業(yè)科學院家禽研究所提供。
1.1.4 試驗器具及設備 負壓隔離器、酶標儀、離心機、一次性注射器、離心管等。
1.2.1 試驗分組 選取體況相同的28日齡SPF雞15只,隨機分為試驗組和對照組2組,其中試驗組10只,每只肌肉注射禽腦脊髓炎滅活疫苗0.5ml;對照組5只,每只注射生理鹽水0.5ml。
1.2.2 試驗方法 試驗雞與對照組雞都進行編號,飼養(yǎng)在同一個負壓隔離器內(nèi),為了容易辨認,對照雞頭部染為綠色。試驗組免疫疫苗后21d,全部雞只采血,1ml/只,分離血清,ELISA抗體效價檢測,采血后全部試驗雞采用腦內(nèi)接種方式攻毒(按照禽腦脊髓炎滅活疫苗效力檢測規(guī)程操作),每日觀察攻毒雞發(fā)病情況,攻毒雞出現(xiàn)臨床癥狀時和攻毒后21d試驗結(jié)束,采集存活雞血,分離血清,檢測抗體,統(tǒng)計攻毒雞發(fā)病情況,與檢測抗體進行對比。
1.2.3 血清抗體檢測方法 ELISA抗體檢測按照酶聯(lián)免疫吸附試驗規(guī)程進行。
2.1 臨床觀察結(jié)果
2.1.1 免疫副反應 試驗組與對照組雞只臨床表現(xiàn)均未見異常,采食、精神與免疫前無差異。
2.1.2 發(fā)病雞臨床癥狀 攻毒后11d,試驗組雞只出現(xiàn)明顯臨床癥狀,嚴重的表現(xiàn)為精神不振、腹瀉及癱瘓(見圖 1)、頭頸震顫等,最后衰竭死亡(見圖2);輕微的出現(xiàn)精神不振、不愿意運動、驅(qū)趕行走瘸腿等。試驗雞均未發(fā)現(xiàn)有視力問題及眼觀病變。
圖1 發(fā)病雞精神不振、癱瘓
圖2 癱瘓雞衰竭死亡
2.1.3 發(fā)病及存活結(jié)果 攻毒后21d,試驗組有1只發(fā)?。òl(fā)病率10%),10只存活(存活率 100%);對照組5只全部發(fā)?。òl(fā)病率100%),有1只存活(存活率 20%)。
2.2 抗體結(jié)果 結(jié)果顯示:免疫后21d,試驗組抗體陽性率為80%,均值為1042.17;對照組抗體陽性率為0,均值為 28.68;攻毒后11d,發(fā)病雞表現(xiàn)明顯臨床癥狀,試驗組抗體陽性率90%,均值為2789.36;對照組抗體陽性率為 0,均值為84.44;攻毒后21d,試驗結(jié)束,試驗組抗體陽性率100%,均值為2254.15;對照組抗體陽性率為20%,均值為570.85。試驗組、對照組抗體值及攻毒結(jié)果見小表1。
3.1 禽腦脊髓炎滅活疫苗免疫效果良好,免疫后21d,攻毒保護效果高達90%。攻毒前后的抗體陽性率結(jié)果見圖3。
圖3 攻毒前后抗體陽性率、發(fā)病率及成活率結(jié)果
3.2 對比攻毒前ELISA抗體結(jié)果與攻毒后發(fā)病結(jié)果,可以看出試驗雞免疫抗體陽性(≥396)雞攻毒后100%未發(fā)??;對照組ELISA抗體均為陰性,100%發(fā)病,可見ELISA抗體值陽性與攻毒保護是正相關(guān)的,因此,臨床上可以通過抽檢免疫雞群的ELISA抗體陽性率,來了解雞群對該病的保護效果,抗體陽性率越高、值越高,保護效果越好。
表1 試驗組、對照組抗體值及攻毒結(jié)果
3.3 編號為2286的免疫雞,攻毒時抗體為陰性(185.37<396),對照雞發(fā)病時,其抗體值已經(jīng)達到2937.34,未見發(fā)病,懷疑是檢測誤差造成的。
3.4 編號為2287、385的兩只雞,攻毒后發(fā)病,最終耐過存活,攻毒后21d的ELISA抗體值均遠大于陽性值,但臨床上有區(qū)別,2287為免疫雞,臨床癥狀輕微,385雖然存活,但有明顯后遺癥(出現(xiàn)點頭癥狀)。
3.5 對比免疫試驗雞在攻毒前后ELISA抗體均值,先升后降,推測是疫苗免疫抗體繼續(xù)增長達到峰值的過程,此后受到野毒攻擊后抗體消耗,稍有下降,攻毒前后不同階段抗體見圖4。
圖4 攻毒前后不同階段抗體均值
3.6 非免疫對照雞攻毒前的ELISA抗體均值為28.68,攻毒后ELISA抗體均值為84.44,抗體雖有產(chǎn)生,但值不高,很難達到有效抵抗病毒攻擊(即ELISA抗體達到陽性的程度)的值(圖4),雞仍然發(fā)病。