邰曉亮 ，張建平 ，魏 麗 ，劉淑華 ＊

1.烏魯木齊市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測中心，烏魯木齊 830000 2.奇臺縣農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心，新疆昌吉 831800

關(guān)鍵字：水產(chǎn)品；硝基呋喃；代謝物；驗證

能力驗證是按照預(yù)先制訂的準(zhǔn)則，通過實驗室間的比對來評價參加者的能力[1]，也是為確保實驗室維持較高的檢測水平而對其能力進(jìn)行考核、監(jiān)督和確認(rèn)的一種驗證活動，它可以補(bǔ)充實驗室內(nèi)部的質(zhì)量控制程序，增加實驗室客戶對實驗室能力的信任，有利于實驗室整體水平的提高[2]。每年各級農(nóng)業(yè)部門下達(dá)相應(yīng)監(jiān)測任務(wù)時，除了考察農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測機(jī)構(gòu)必須具備的資質(zhì)外，能力驗證結(jié)果也成為政府做出選擇的重要參考，通過參加能力驗證，發(fā)現(xiàn)機(jī)構(gòu)自身在質(zhì)量控制過程中的問題和漏洞，得以及時制定相應(yīng)的糾正措施，進(jìn)行糾正和改進(jìn)，進(jìn)入良性循環(huán)，持續(xù)提高機(jī)構(gòu)的管理水平。

自2004年起，農(nóng)業(yè)部組織開展了水產(chǎn)品中藥物殘留、重金屬及貝類毒素等3大方面檢測能力驗證，涉及的考核的項目為硝基呋喃類代謝物、孔雀石綠、磺胺類和氯霉素等。農(nóng)業(yè)部歷年來考核項目如下表1，可以看出硝基呋喃類代謝物項目是水產(chǎn)品藥物殘留檢測能力驗證的重點[3]。

表1 水產(chǎn)品藥物殘留檢測能力驗證考核項目

農(nóng)業(yè)部硝基呋喃類代謝物能力考核采用 《水產(chǎn)品中硝基呋喃類代謝物殘留量的測定 液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法》（農(nóng)業(yè)部783號公告-1-2006），考核方式為集中制樣、定點發(fā)樣。由能力驗證參加單位至指定地點隨機(jī)抽取包括考核樣品、基質(zhì)樣品后，在96小時內(nèi)上報檢測結(jié)果[4]。檢測結(jié)果須報3個平行樣的結(jié)果、平均值和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，并附原始記錄、譜圖和標(biāo)準(zhǔn)曲線、加標(biāo)記錄表，采用真值法進(jìn)行評判，檢測結(jié)果回收率在70.0%～120.0%之間為合格，有任1項結(jié)果超過上述范圍及存在定性錯誤的，判為不合格。

1 能力驗證前的準(zhǔn)備工作

1.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

重新配制標(biāo)準(zhǔn)溶液或購置有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，確認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的有效期、純度、結(jié)構(gòu)和分子量，使用移液管配制至所需濃度。SEM、AHD標(biāo)準(zhǔn)品因是鹽酸鹽，稱取時，應(yīng)根據(jù)分子量和純度進(jìn)行折算，配制時可借助超聲波助溶，標(biāo)準(zhǔn)儲備液低溫放置后應(yīng)恢復(fù)至室溫?；旌蠘?biāo)準(zhǔn)工作液和混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)工作液現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.2 選擇合適的標(biāo)準(zhǔn)溶液線性范圍

線性范圍過寬影響定量結(jié)果的準(zhǔn)確性，過窄影響線性系數(shù)。通常選擇做5～7個濃度點，具體跨度則根據(jù)需要檢測的樣品濃度決定，建議標(biāo)準(zhǔn)曲線的最低點為檢出限濃度點附近為宜，待測樣品的濃度最好在曲線的中間左右位置，同時必須保證標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)在0.999以上。硝基呋喃類代謝物的標(biāo)準(zhǔn)曲線需要衍生化，因此要與測試樣品同時進(jìn)行前處理。

1.3 儀器條件的優(yōu)化

對實驗過程中涉及的儀器設(shè)備進(jìn)行核查，檢測設(shè)備的準(zhǔn)確性是影響能力驗證結(jié)果的關(guān)鍵因素之一，必須確保在檢定或校準(zhǔn)有效期內(nèi)，并且滿足實驗要求，如達(dá)不到檢測要求，需查找原因并優(yōu)化儀器和檢測條件，包括更換色譜柱，清洗質(zhì)譜儀的離子源、噴霧傳輸管?？蓪⑿屡渲玫臉?biāo)準(zhǔn)溶液與以前的標(biāo)準(zhǔn)溶液同時上機(jī)測定，比較響應(yīng)值，正常情況下響應(yīng)值應(yīng)一致，或有所提高，如果新配的標(biāo)準(zhǔn)溶液靈敏度不如以前，需要查找原因。

1.4 實驗器皿的清洗

所用的實驗器皿在使用前按照規(guī)定要求進(jìn)行洗滌，必要時用甲醇潤洗，對于進(jìn)樣瓶等較難清洗的器皿，建議使用甲醇等試劑超聲清洗，盡量減少外來污染因素的引入。為確保實驗過程中對所用試劑的控制，必須做試劑空白，除不加樣品外，所有的試劑都必須參與前處理過程，包括添加內(nèi)標(biāo)等，并且確保試劑空白中待測物的檢出值在方法檢出限以下。

2 領(lǐng)樣及樣品前處理

檢查編號是否準(zhǔn)確，包裝是否完整、無破損，填寫領(lǐng)樣記錄表，領(lǐng)考核細(xì)則及證明文件。將樣品裝入加干冰的泡沫箱中。開始實驗前嚴(yán)禁用微波等加熱方式對樣品解凍，應(yīng)在室溫下自然解凍后再進(jìn)行前處理。樣品前處理過程中，應(yīng)盡量避光操作。提取過程如下：

（1）加入衍生試劑之前需用玻璃棒將樣品分散，以提高酸解效率，有利于衍生。

（2）將鹽酸溶液濃度提高至0.3 mol/L（移取27 mL濃鹽酸，用水定容至1 000 mL），調(diào)節(jié)pH約為1。

（3）衍生化后加入磷酸氫二鉀濃度為1.0 mol/L（加入25 mL 30%的氫氧化鈉溶液），調(diào)節(jié)PH值至7.0～7.5，只需每個品種調(diào)試1個樣品即可。

（4）乙酸乙酯提取時要充分振蕩，提高萃取效率，如發(fā)生乳化可將離心轉(zhuǎn)速提高至10 000 r/min，或者增加離心時間。

（5）氮吹濃縮后若溶解液渾濁，可以加2 mL正己烷混勻后放入冰箱中冷凍0.5～1 h，高速（8 000～10 000 r/min）離心6 min，直接取下層溶液過0.22 μm濾膜測定。

空白實驗包括試劑空白和對應(yīng)的基質(zhì)空白，除不加標(biāo)準(zhǔn)溶液外，其他步驟按照已確定的前處理方法進(jìn)行，上機(jī)比較本底是否在目標(biāo)物出峰處有干擾。

質(zhì)控樣品和待測樣品必須在相同條件下進(jìn)行前處理并測定[5]。添加濃度通常為2～5倍定量限，盡量與待檢樣品的濃度保持一致。質(zhì)控樣品可以選擇在空白樣品的基礎(chǔ)上進(jìn)行加標(biāo)，也可把已知量值的陽性樣品當(dāng)作質(zhì)控樣品，包括以往實驗室參加能力驗證多余的陽性樣品、多家實驗室進(jìn)行比對過的樣品或可購買的有證標(biāo)準(zhǔn)樣品。同時確保質(zhì)控樣品和待檢樣品檢測時每個步驟操作的一致性，降低誤差。

采用C18色譜柱進(jìn)行測試，推薦進(jìn)樣量為10 μL。流動相中的有機(jī)相推薦使用甲醇，因為其靈敏度和分離效果更好。不同廠家的儀器對水相的選擇有差別，通常采用2 mmol/L醋酸銨或者0.1%甲酸。SEM是呋喃西林藥物的特征性代謝產(chǎn)物，但是它作為內(nèi)源性物質(zhì)在甲殼類產(chǎn)品中普遍存在，因此在對這類樣品進(jìn)行測試時，應(yīng)考查該藥物的帶入途徑。

3 結(jié)果分析

3.1 平均值法計算檢測結(jié)果

取平均值的目的是避免偶然誤差、降低操作誤差、提高可信度。在檢測過程中有時會發(fā)現(xiàn)3個能力驗證樣品中有2個的結(jié)果平行性較好，有1個數(shù)值偏離，無法確認(rèn)哪個數(shù)值更接近真值，建議取數(shù)據(jù)的平均值，減少誤差[6]。忌諱人為剔除平行性差的樣品結(jié)果，將自認(rèn)為平行性好的樣品重復(fù)測定多次后取平均值上報，有時反將真實結(jié)果排除在外。

3.2 質(zhì)控樣品數(shù)據(jù)的分析

根據(jù)質(zhì)控樣品的回收率和精密度數(shù)據(jù)，分析此次檢驗過程的質(zhì)量控制情況，必要時對比質(zhì)量控制圖進(jìn)行分析，明確此次能力驗證檢測結(jié)果的整體水平是偏低還是偏高，對數(shù)據(jù)的把控做到心中有數(shù)。

3.3 檢測結(jié)果的上報

仔細(xì)分析樣品檢測過程、譜圖、計算及結(jié)果數(shù)據(jù)，特別是對于能力驗證樣品中添加濃度含量低的化合物，著重比較試劑空白和樣品空白的譜圖，盡量防止出現(xiàn)漏判、誤判的可能性。

結(jié)果計算按照標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行，根據(jù)能力驗證文件中對回收率的要求，決定是否對回收率進(jìn)行校準(zhǔn)，三個平行樣檢測結(jié)果全部上報并嚴(yán)格按照通知日期輸入到網(wǎng)上系統(tǒng)，上報結(jié)果與原始記錄一致，原始記錄手工填寫和簽字，原始記錄中包含工作曲線和空白圖譜。

4 小結(jié)

掌握檢測方法的的操作要領(lǐng)和關(guān)鍵點，減少方法對檢測結(jié)果的影響，提高水產(chǎn)品獸藥殘留檢測水平和能力驗證的通過率，保證檢測質(zhì)量。加強(qiáng)水產(chǎn)品能力驗證工作的規(guī)范性和公正性，使實驗室的檢測能力快速提高，水產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)管水平也會不斷提升，有利于保障中國的水產(chǎn)品質(zhì)量安全。