巖鹿乳康膠囊對乳腺增生大鼠血清雌孕激素的影響

郭宇飛 王書勤 趙素貞 周海軍

摘要 目的：探討巖鹿乳康膠囊對成年雌性乳腺增生大鼠血清雌激素、孕激素水平的影響。方法：選取Wister大鼠60只，將其隨機(jī)分為6組：空白組、疾病模型組、去卵巢組、三苯氧胺組、乳癖消組、巖鹿乳康膠囊組。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測大鼠血清中雌二醇（E2）和孕酮（P）水平。結(jié)果：與乳癖消組以及疾病模型組比較，巖鹿乳康組血液中E2的水平均顯著降低（P<0.05），P水平明顯升高（P<0.05）；與三苯氧胺組比較，巖鹿乳康組血液中E2和P水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論：巖鹿乳康膠囊能顯著降低血中雌激素以及升高孕激素水平。

關(guān)鍵詞 巖鹿乳康膠囊；大鼠；乳腺增生；雌激素；孕激素

AbstractObjective：TostudytheeffectsofYanluRukangCapsuleonestrogenandprogesteroneinserumofratswithhyperplasiaofmammaryglands.Methods：All60Wisterratswererandomlydividedintosixgroups：blankcontrolgroup，tamoxifengroup，YanluRukanggroup，Rupixiaogroup，diseasemodelgroup，ovariectomizedgroup.Then，thecontentofestradiol（E2）andprogesterone（P）inserumofratsweredetectedbyELISAmethods.Results：ComparedwithRupixiaogroupandmodelgroup，thecontentofE2inbloodintheYanluRukanggroupwassignificantlydecreased，andthecontentofPwassignificantlyhigher（P<0.01）；Comparedwithtamoxifengroup，thecontentofE2andPinthebloodintheYanluRukanggroupdidnotsignificantlychanged，andtherewasnostatisticalsignificance（P>0.05）.Conclusion：YanluRukangcapsulecansignificantlyreduceestrogenandelevatedprogesteronelevelsinblood.

KeyWordsYanluRukangCapsule；Ratswithhyperplasiaofmammaryglands；Progesterone

中圖分類號(hào)：R289.5文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2018.06.051

乳腺增生中醫(yī)稱為“乳癖”，又稱乳腺結(jié)構(gòu)不良，是既非炎性反應(yīng)，亦非腫瘤，以乳腺腫塊及疼痛為臨床特點(diǎn)的一種疾病。隨著生存環(huán)境的改變及生活節(jié)奏的加快，乳腺病的發(fā)病呈上升趨勢。乳腺增生成為女性特別是育齡婦女最常見的乳腺病，發(fā)病率為80%～90%，居乳腺病發(fā)病的首位[1]。目前用于乳腺增生病治療的中成藥，品種繁多，治法不一，用藥方法不一。中西藥并用以暫時(shí)緩解癥狀為目的，導(dǎo)致病情易反復(fù)，不良反應(yīng)明顯。近年來，研究發(fā)現(xiàn)，乳腺增生是一種由于內(nèi)分泌失調(diào)導(dǎo)致的疾病[2]。雌激素的過度刺激可使乳腺組織從正常生長到增生乃至腫瘤形成[3]。乳腺增生患者體內(nèi)雌激素分泌增多，孕激素分泌不足；患者體內(nèi)泌乳素水平升高，對乳腺組織有直接刺激作用，還可抑制黃體期孕酮的分泌，促進(jìn)雌二醇的合成，從而導(dǎo)致雌孕激素比例失調(diào)，在雌激素持續(xù)刺激下，使乳腺組織增生過度，導(dǎo)致乳腺增生[4]。因此，關(guān)于本病的治療，西醫(yī)多以對抗雌激素為主，代表藥物有甲基睪丸素、三苯氧胺等。本類藥物針對其癥狀的改善有一定的作用，并且起效快、服用方便，但是對內(nèi)分泌影響較大，不良反應(yīng)明顯，例如三苯氧胺長期使用可致子宮內(nèi)膜癌等，不適宜在臨床長期及廣泛的應(yīng)用[5]。我們在前期巖鹿乳康膠囊治療脾腎陽虛型乳癖中發(fā)現(xiàn)，其臨床療效獨(dú)特、不良反應(yīng)少[6]。巖鹿乳康膠囊的作用機(jī)制與乳腺雌激素水平調(diào)節(jié)相關(guān)。我們就巖鹿乳康膠囊對乳腺增生大鼠雌孕激素方面的影響進(jìn)行探討。現(xiàn)報(bào)道如下。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1動(dòng)物清潔級(jí)成年未孕Wistar雌性大鼠80只（北京維通利華有限公司提供），鼠齡7～8周，體重180～200g，在SPF條件下飼養(yǎng)。

1.1.2藥物巖鹿乳康膠囊（云南海灃藥業(yè)有限公司，國藥準(zhǔn)字Z20025379）；枸櫞酸他莫昔芬片（三苯氧胺）（揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)有限公司，國藥準(zhǔn)字H32021472）；乳癖消顆粒（哈爾濱太華藥業(yè)有限公司，國藥準(zhǔn)字Z19990028）；以上各藥以60kg人為標(biāo)準(zhǔn)，成人6倍給藥。苯甲酸雌二醇注射液（蘇州市蘇牧動(dòng)物藥業(yè)有限公司，批號(hào)：100862511）；黃體酮注射液（天津金耀藥業(yè)有限公司，國藥準(zhǔn)字H12020533）。

1.1.3試劑與儀器美國Labnet生產(chǎn)微型高速離心機(jī)（型號(hào)為C2500-R-230V）；日本ASONE生產(chǎn)的電熱恒溫培養(yǎng)箱（型號(hào)為ICV-450）；Thermoscientific生產(chǎn)的全自動(dòng)酶標(biāo)儀（型號(hào)為MultiskanMK3）；伊萊瑞特生物科技有限公司的大鼠雌二醇（E2）酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒（貨號(hào)為E-EL-R0348c），大鼠孕激素/孕酮酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測定試劑盒（貨號(hào)為E-EL-R0775c）。

1.2方法

1.2.1分組與模型制備飼養(yǎng)1周結(jié)束后，選取60只適應(yīng)性良好的大鼠，按照完全隨機(jī)分組的原則分為空白組、疾病模型組、去卵巢組、三苯氧胺組、乳癖消組、巖鹿乳康膠囊組，每組10只。除空白組外，其余各組大鼠后腿內(nèi)側(cè)交替肌內(nèi)注射苯甲酸雌二醇注射液0.5mg/（kg·d），連續(xù)25d，隨后改為黃體酮注射液4mg/（kg·d）交替肌內(nèi)注射，連續(xù)5d。

1.2.2給藥方法造模結(jié)束次日開始給藥。1）空白對照組：給予生理鹽水0.2mL/d，共30d。2）疾病模型組：給予生理鹽水0.2mL/d，共30d。3）去卵巢組：用戊巴比妥鈉按40mg/kg腹腔注射麻醉，無菌條件下摘除雙側(cè)卵巢，關(guān)閉腹腔。術(shù)后應(yīng)用青霉素（4萬U/kg）。給予生理鹽水0.2mL/d，至試驗(yàn)結(jié)束。4）三苯氧胺組：于100mL含有0.5%CMC-Na的溶液中加入60mg三苯氧胺，攪拌使其充分溶解，每只大鼠灌胃量約0.01mL/（g·d）的三苯氧胺藥物溶液，為成人劑量的6倍（成人劑量10mg/60kg），共30d。5）乳癖消組：于100mL的0.5%羧甲基纖維素鈉（CMC-Na）溶液中加入12g乳癖消片，攪拌使其充分溶解，每只大鼠灌胃量約0.01mL/（g·d）乳癖消溶液，為成人劑量的6倍（成人劑量6g/60kg），共30d。6）巖鹿乳康膠囊組：于100mL的0.5%羧甲基纖維素鈉溶液中加入36g巖鹿乳康膠囊，攪拌使其充分溶解，每只大鼠灌胃量約0.01mL/（g·d）巖鹿乳康溶液，為成人劑量的6倍（成人劑量6g/60kg），共30d。

1.2.3檢測指標(biāo)與方法1）觀察并記錄記錄大鼠乳頭直徑及乳頭高度，測量采用電子游標(biāo)卡尺進(jìn)行。2）于末次給藥后第1天各組大鼠用10%水合氯醛（0.35mL/100mL）麻醉，腹部備皮約2.5cm，絡(luò)合碘消毒皮膚，縱向切口，分離皮膚和肌肉層，縱向剪開肌肉層，游離腸胃，充分暴露腹主動(dòng)脈，右手持采血管平針進(jìn)腹主動(dòng)脈，左手用眼科鑷輕輕輔佐，約抽取動(dòng)脈血5mL，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）測定血清E2和P的水平。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)整理統(tǒng)計(jì)和分析采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理，計(jì)量資料采用（±s）表示，比較采用t檢驗(yàn)；P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.16組治療后的大鼠乳頭直徑及高度比較與空白對照組比較，疾病模型組乳頭直徑及高度明顯增大（P<0.05）。與疾病模型組比較，去卵巢組乳頭直徑及乳頭高度均明顯減?。≒<0.05）。與疾病模型組比較，三苯氧胺組、乳癖消組、巖鹿乳康膠囊組乳頭直徑、乳頭高度均明顯減小（P<0.05）；與三苯氧胺組比較，巖鹿乳康膠囊組乳頭直徑差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），但乳頭高度明顯增高（P<0.05）；與乳癖消組比較，巖鹿乳康膠囊組乳頭直徑明顯減小（P<0.05）。見表1。

2.26組血清中E2和P比較

與空白對照組比較，疾病模型組血清E2水平明顯增高（P<0.05），P水平明顯降低。與疾病模型組比較，去卵巢組E2水平明顯降低（P<0.05）。與疾病模型組比較，三苯氧胺組、乳癖消組、巖鹿乳康膠囊組血清血清E2水平明顯降低（P<0.05），P水平明顯升高（P<0.05）。與三苯氧胺組比較，巖鹿乳康膠囊組血清E2、P水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；與乳癖消組比較，巖鹿乳康膠囊組血清E2水平明顯降低（P<0.05），P水平明顯升高（P<0.05）。見表2。

3討論

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，乳房為性激素的靶器宮，其功能受下丘腦-垂體-卵巢分泌的激素調(diào)控。乳腺增生的發(fā)病因素諸多，性腺軸失調(diào)為其主要原因[7]?，F(xiàn)代藥理研究指出，巖陀主要化學(xué)成分為巖白菜素，具有抗炎、抗HIV、抑制微生物、鎮(zhèn)咳、抗氧化、鎮(zhèn)痛、增強(qiáng)免疫等作用[8]。有研究指出，巖陀在其他增生性疾病中如乳腺，具有抑制纖維組織增生、增加局部血流量，減輕炎性反應(yīng)的作用[9]。鹿角霜其含磷酸鈣、碳酸鈣、氛化物等，并含有睪酮、孕酮、垂體泌乳素、雌二醇4種甾體生物激素，其中某些成分有可能是鹿角治乳腺病的物質(zhì)基礎(chǔ)[10-11]。研究證明，鹿角霜等有類雌激素樣作用，能提高雌激素水平[12-13]。亦有指出鹿角霜有類似雄激素作用調(diào)節(jié)雌孕激素比例[14]，亦能拮抗雌激素或泌乳素[15]。李增戰(zhàn)等[16]認(rèn)為，鹿角霜能地對抗戊酸雌二醇性小鼠乳腺增生，促進(jìn)正常小鼠巨噬細(xì)胞的吞噬功能，并能刺激血液中T淋巴細(xì)胞的增殖。大劑量能明顯抑制MA2737小鼠乳腺癌的生長?？傊?，鹿角霜改善內(nèi)源激素的分泌，進(jìn)而調(diào)整內(nèi)分泌水平[17]。鹿銜草藥理作用包括降壓、擴(kuò)血管、強(qiáng)心保護(hù)心肌作用。研究證明鹿銜草通過植物雌激素樣作用，提升血清雌激素水平[18]。

從本研究各組的大鼠乳頭直徑及高度以及血清中E2和P的結(jié)果比較分析得出，巖鹿乳康膠囊不僅治療乳腺增生效果顯著，且可以從根本上調(diào)控雌孕激素，糾正內(nèi)分泌紊亂。疾病模型組與空白對照組比較顯示造模成功。乳癖消組治療有效，對雌孕激素有影響；即降低雌激素升高孕激素。韓蓉等[19]在乳腺寧片對乳腺增生大鼠及激素水平的影響中也有所證實(shí)，但效果弱于巖鹿乳康組與三苯氧胺組。三苯氧胺治療效果顯著，但糾正內(nèi)分泌紊亂不如巖鹿乳康膠囊；這或許是臨床應(yīng)用三苯氧胺產(chǎn)生不良反應(yīng)的原因之一[20]。而郁琳等[21]在三苯氧胺、丹那哇治療子宮內(nèi)膜異位癥血清雌、孕激素及子宮內(nèi)膜雌孕激素受體的變化一文中指出，經(jīng)三苯氧胺治療3個(gè)月后，血清雌二醇值升高；而治療6個(gè)月后，血清雌二醇值下降[21]。去勢組治療效果佳，對于一般育齡期女性而言選擇這種治療方法不現(xiàn)實(shí)。

中醫(yī)學(xué)稱乳腺增生病為乳癖，多因情志內(nèi)傷，肝氣郁結(jié)，乳絡(luò)阻滯或腎陽不足以致沖任不調(diào)，氣滯痰凝所致；治法則以疏肝理氣，溫補(bǔ)腎陽，活血化瘀，軟堅(jiān)散結(jié)，消腫止痛等為主。巖鹿乳康膠囊是由巖陀，鹿角霜，鹿銜草3種藥物組成。巖陀，苦、澀，涼；具有清熱涼血，調(diào)經(jīng)止痛。取其行氣、活血、化瘀，散結(jié)止痛之功治療乳腺增生病。鹿角霜為引藥歸肝、腎之經(jīng)，其味咸，故能溫陽寒，軟堅(jiān)散結(jié)。且為血肉有情之品溫補(bǔ)腎陽之要藥，更是治療乳腺增生的常用藥物，并且療效顯著[22-23]。鹿銜草味甘苦，性溫，歸肺、胃、肝、腎經(jīng)，能補(bǔ)虛，益腎，活血調(diào)經(jīng)，且可以引藥歸經(jīng)入卵巢以調(diào)攝沖任[24]。僅從名字由來便可知補(bǔ)腎之佳品，亦是治療乳腺增生病之良藥[25]。3藥合用清熱涼血，調(diào)經(jīng)止痛，以治療乳癖。臨床研究亦證實(shí)，此方對此病有效[6，26]。

總之，巖陀，鹿角霜，鹿銜草均入腎經(jīng)，有補(bǔ)腎之功；補(bǔ)腎的藥物均對性激素有調(diào)節(jié)作用。由于中藥是從多方面，多角度調(diào)整內(nèi)分泌，具體降低或是升高激素水平或許與用量與配伍有關(guān)。

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（2017-05-04收稿責(zé)任編輯：楊覺雄）