結(jié)腸癌患者腫瘤浸潤(rùn)性樹(shù)突狀細(xì)胞在組織中表達(dá)及臨床意義

薩仁高娃 韓 悅

(呼倫貝爾職業(yè)技術(shù)學(xué)院,呼倫貝爾021000)

結(jié)腸癌是中老年人最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，且近些年有年輕化趨勢(shì)。雖然隨著胃腸鏡技術(shù)的發(fā)展，結(jié)腸癌早期確診率有所提高，使得死亡率有所下降，但是部分結(jié)腸癌患者仍可在早期即可通過(guò)淋巴道、血液等方式轉(zhuǎn)移，腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移是結(jié)腸癌患者預(yù)后不良最重要的影響因素[1,2]。目前，研究已證實(shí)免疫系統(tǒng)在腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮了重大作用，腫瘤細(xì)胞可以通過(guò)多種途徑誘導(dǎo)對(duì)機(jī)體的免疫耐受，從而大量增殖并轉(zhuǎn)移。CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞等已被證實(shí)與腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移有關(guān)[3]。樹(shù)突狀細(xì)胞(Dendritic cells,DC)是機(jī)體的一種抗原呈遞細(xì)胞，其功能最大，在腫瘤患者中，主要將腫瘤細(xì)胞表面分子標(biāo)志物和代謝產(chǎn)物等呈遞給細(xì)胞毒性T細(xì)胞，進(jìn)而殺傷腫瘤細(xì)胞[4,5]。但目前關(guān)于腫瘤浸潤(rùn)性樹(shù)突狀細(xì)胞(Tumor infiltrating dendritic cells,TIDC)在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)和臨床意義尚不清楚。

1 資料與方法

1.1一般資料 自2016年1月至2017年1月，前瞻性收集我院收治的結(jié)腸癌患者117例，納入標(biāo)準(zhǔn)：①結(jié)腸癌；②接受手術(shù)治療；③同意參與本研究；④年齡18～70歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：①術(shù)前曾接受放化療或分子生物靶向治療等特殊治療；②復(fù)發(fā)性結(jié)腸癌；③潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩病等重大胃腸道疾??；④合并其他惡性腫瘤；⑤肝腎等臟器功能不全；⑥既往心肌梗死、腦卒中等重大心血管疾?。虎呒毙曰蚵愿腥酒?；⑧ 6月內(nèi)曾接受免疫調(diào)節(jié)劑等治療；⑨原位癌。年齡≥60歲的患者63例，<60歲的患者54例；男性79例，女性38例；腫瘤直徑≥5 cm的患者67例，<5 cm的50例；腺癌75例，黏液癌 42例；腫瘤細(xì)胞分化程度為中低分的59例，高分化的58例；臨床TNM分期Ⅱ期的78例，Ⅲ期的39例。本研究中所有患者均知情同意并簽署知情同意書(shū)，本研究通過(guò)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2方法

1.2.1研究方法 入院后，完善相關(guān)檢查，擇期行結(jié)腸癌切除術(shù)，取術(shù)中標(biāo)本，檢測(cè)腫瘤組織中(腫瘤組織中心部位)和癌旁組織(距離腫瘤邊緣5 cm以上)中TIDC及DC的MHCⅡ和CD54表達(dá)情況。同時(shí)收集患者臨床特征包括年齡、性別、腫瘤大小、腫瘤細(xì)胞類(lèi)型、腫瘤細(xì)胞分化程度、臨床TNM分期、術(shù)后6月內(nèi)復(fù)發(fā)率等信息。分析結(jié)腸癌組織中TIDC及其MHCⅡ和CD54表型與臨床特征的相關(guān)性。

1.2.2檢測(cè)方法 取術(shù)中組織標(biāo)本進(jìn)行免疫組化染色后，根據(jù)SABC法，以試劑公司提供的陽(yáng)性切片作為陽(yáng)性對(duì)照，以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照(所有試劑均來(lái)源于上海基因科技有限公司)。在400倍鏡下隨機(jī)選取10個(gè)視野，計(jì)算腫瘤浸潤(rùn)性樹(shù)突狀細(xì)胞數(shù)量，取10個(gè)視野的平均值作為該組織的腫瘤浸潤(rùn)性樹(shù)突狀細(xì)胞密度。MHCⅡ和CD54：取結(jié)腸癌組織和癌旁組織，RPMI1640培養(yǎng)基消化，流式細(xì)胞儀檢測(cè)MHCⅡ和CD54(取1 g標(biāo)本，脫蠟、水化、胰蛋白酶37℃恒溫水浴震動(dòng)消化30 min，300目尼龍網(wǎng)過(guò)濾，800 r/min 5 min離心2次，去除碎片，加入檢測(cè)管，離心，棄掉上層清液，分別加入相關(guān)抗體，混勻，避光30 min，1 ml PBS溶液稀釋，離心后去掉上層清液，加入固定液150 μl，上機(jī)檢測(cè)，流式細(xì)胞儀型號(hào)為：賽默飛Attune NxT)。判定方法：以細(xì)胞膜和(或)細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒或團(tuán)狀視為陽(yáng)性。參考奧爾雷德評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)從細(xì)胞陽(yáng)性數(shù)(1～4分)及染色強(qiáng)度(0～12分)進(jìn)行判斷，得分越高，陽(yáng)性率越高。評(píng)定時(shí)每個(gè)標(biāo)本連續(xù)測(cè)定3次，在200倍光鏡下取5個(gè)視野，取平均值。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS22.0軟件完成數(shù)據(jù)分析，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。兩組患者計(jì)量資料之間差異采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)分析；兩組患者計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1結(jié)腸癌腫瘤組織和癌旁組織中TIDC及其表型差異 與癌旁組織比較，腫瘤組織中TIDC數(shù)密度顯著降低[(12.97±2.89)%vs (9.93±2.25)%,P=0.000]；MHC-Ⅱ陽(yáng)性DC顯著降低[(12.16±2.34)% vs (6.62±2.04)%,P=0.000]；CD54陽(yáng)性DC顯著降低[(11.98±2.24)%vs(7.58±2.74)%]。見(jiàn)表1，圖1。

2.2結(jié)腸癌組織中TIDC數(shù)密度及其表型與臨床特征的相關(guān)性 結(jié)腸癌組織中TIDC數(shù)密度、MHC-Ⅱ陽(yáng)性DC和CD54陽(yáng)性DC與年齡、性別、腫瘤直徑和腫瘤細(xì)胞類(lèi)型無(wú)明顯相關(guān)性(P>0.05)。與腫瘤細(xì)胞為高分化的患者相比，中低分化的患者TIDC數(shù)密度顯著降低[(11.24±1.99)%vs(8.65±1.70)%,P=0.00]。與臨床TNM分期為Ⅱ期的患者相比，Ⅲ期的患者TIDC數(shù)密度顯著降低[(10.94±1.97)%vs (7.91±1.17)%,P=0.000]；MHC-Ⅱ陽(yáng)性DC顯著降低[(7.04±1.96)%vs (5.78±1.96)%,P=0.001]；CD54陽(yáng)性DC顯著降低[(8.49±2.62)%vs (5.75±1.99)%,P=0.00]。與術(shù)后6月內(nèi)未復(fù)發(fā)的患者相比，復(fù)發(fā)的患者TIDC數(shù)密度顯著降低[(10.29±1.76)%vs (6.82±1.88)%,P=0.000]；MHC-Ⅱ陽(yáng)性DC顯著降低[(9.00±1.78)%vs (5.33±1.94)%,P=0.001]；CD54陽(yáng)性DC顯著降低[(10.44±1.87)%vs (5.19±1.98)%,P=0.00]。見(jiàn)表2。

表1結(jié)腸癌腫瘤組織和癌旁組織中TIDC及表型差異

Tab.1ColoncancerandadjacenttissueTIDCandphenotypedifferences

CategorynTIDC numberdensity(%)MHC-Ⅱpositive DC(%)CD54positive DC(%)Colon cancer tissue1179.93±2.256.62±2.047.58±2.74Paracancer11712.97±2.8912.16±2.3411.98±2.24t8.95519.31113.459P0.0000.0000.000

圖1 結(jié)腸癌組織與癌旁組織免疫組化結(jié)果(×200)Fig.1 Immunohistochemical results of colon cancer tiss-ues and adjacent tissues(×200)Note: A.Results of TIDC immunohistochemistry in colon cancer tissue;B.Results of TIDC immunohistochemistry in adjacent tissues；C.Results of immunohistochemistry of colon cancer CD54;D.Results of CD54 immunohistochemistry of adjacent tissues.

表2結(jié)腸癌組織中TIDC數(shù)密度及其表型與臨床特征的相關(guān)性分析

Tab.2CorrelationanalysisofTIDCnumberdensityanditsphenotypeandclinicalfeaturesincoloncancertissues

CategorynTIDC numberdensity(%)MHC-Ⅱpositive DC(%)CD54positive DC(%)Age≥60639.87±2.216.33±2.117.21±2.81<605410.01±2.326.96±1.938.01±2.63t0.3441.6681.585P0.7320.0980.116GenderMale799.84±2.226.60±2.167.34±2.88Female3810.12±2.336.65±1.798.06±2.39t0.6350.1081.327P0.5270.9140.187Tumor diameter≥5 cm6710.08±2.226.37±2.117.05±2.71<5 cm509.82±2.286.80±1.997.97±2.73t0.6251.1371.816P0.5330.2580.072Tumor cell typeAdenocarcinoma7510.12±2.216.56±2.027.78±2.74Mucinous cancer429.59±2.326.72±2.107.21±2.75t1.2230.3921.093P0.2240.6950.277Tumor cell differentiationPoorly differentiated598.65±1.706.41±1.937.25±2.78High differentiation5811.24±1.996.83±2.157.91±2.70t7.5661.0901.303P0.0000.2780.195Clinical TNM stagingPhase II7810.94±1.977.04±1.968.49±2.62Phase Ⅲ397.91±1.175.78±1.965.75±1.99t8.8633.2585.750P0.0000.0010.000Recurrence rate within 6months after operationRelapse126.82±1.885.33±1.945.19±1.98No recurrence10510.29±1.769.00±1.7810.44±1.87t6.4276.7069.160P0.0000.0000.000

3 討論

結(jié)腸癌是中老年最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，早期即可通過(guò)淋巴結(jié)、血液循環(huán)等轉(zhuǎn)移，是威脅中老年人身心健康的重要疾病之一[6,7]。目前研究已證實(shí)結(jié)腸癌的轉(zhuǎn)移與免疫有關(guān)，尤其是腫瘤微環(huán)境中的免疫功能[8,9]。DC可以作為腫瘤患者的一種抗原呈遞細(xì)胞，刺激細(xì)胞毒性T細(xì)胞等的增殖，進(jìn)而對(duì)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行殺傷。而DC細(xì)胞在特定環(huán)境下可以表現(xiàn)為免疫抑制作用，這部分DC細(xì)胞是不成熟或分化異常的DC細(xì)胞組成，主要表現(xiàn)為MHCⅡ和CD54陽(yáng)性率低下[10-12]。目前，關(guān)于DC細(xì)胞在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)及臨床意義尚未清楚。本研究顯示與癌旁組織比較，結(jié)腸癌組織中TIDC及MHCⅡ、CD54陽(yáng)性率均明顯下降，提示TIDC在結(jié)腸癌組織中低表達(dá)，且多為不成熟的DC細(xì)胞，其抗原呈遞能力下降，從而介導(dǎo)了腫瘤細(xì)胞對(duì)機(jī)體的免疫耐受。另外，本研究顯示，腫瘤細(xì)胞分化程度為中低分化的患者TIDC數(shù)密度顯著低于高分化的患者；TNM分期為Ⅲ期的患者TIDC數(shù)密度及MHCⅡ、CD54陽(yáng)性率均顯著低于TNM分期為Ⅱ期的患者。進(jìn)一步證實(shí)了結(jié)腸癌組織中TIDC降低，且分化未成熟與患者臨床預(yù)后惡化有關(guān)。

2015年我國(guó)學(xué)者張子杰等[13]研究顯示結(jié)腸癌組織中、外周血DC細(xì)胞顯著降低，該研究支持本研究，但該研究未探討結(jié)腸癌組織中TIDC與患者臨床特征的相關(guān)性。研究顯示TIDC在結(jié)腸癌組織中與臨床分期、病理分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，與年齡、性別和腫瘤病理組織學(xué)類(lèi)型無(wú)關(guān)[14]。該研究同樣支持本研究，不過(guò)本研究還同時(shí)探討了DC細(xì)胞的分型，發(fā)現(xiàn)腫瘤組織中成熟DC細(xì)胞比例下降，因此本文具有一定的臨床意義。DC細(xì)胞是一種抗原呈遞細(xì)胞，在腫瘤免疫中發(fā)揮重要作用，DC水平降低將導(dǎo)致機(jī)體對(duì)腫瘤降解產(chǎn)物的呈遞能力降低，無(wú)法有效刺激細(xì)胞毒性T細(xì)胞的大量增殖，進(jìn)而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞對(duì)機(jī)體的免疫耐受[15,16]。另外，本研究顯示結(jié)腸癌組織中成熟DC細(xì)胞比例下降，不成熟的DC細(xì)胞具有免疫抑制作用，可以分泌多種免疫抑制細(xì)胞因子，促進(jìn)Th1/Th2細(xì)胞免疫向Th2免疫漂移[17,18]。目前，關(guān)于DC在結(jié)腸癌中的作用尚處于研究階段。2015年Radej等[19]研究顯示結(jié)腸癌細(xì)胞降解產(chǎn)物可以刺激DC細(xì)胞增殖和成熟。DC細(xì)胞在結(jié)腸癌中的價(jià)值為以后的研究提供了新方向。

綜上所述，腫瘤浸潤(rùn)性樹(shù)突狀細(xì)胞在結(jié)腸癌組織中低表達(dá)，不成熟的調(diào)節(jié)性樹(shù)突狀細(xì)胞比例增加。