程金生 ，黃靖瑜 ，鐘瑞敏 ，曾佛妹 ，黎嘉珠 ，陳義鋁 ，林鋇詩(shī)，莫藝萍，蔡浩強(qiáng)

（1.韶關(guān)學(xué)院 英東食品科學(xué)與工程學(xué)院，廣東 韶關(guān) 512005；2.嘉應(yīng)學(xué)院 醫(yī)學(xué)院客家養(yǎng)生保健研究所，廣東 梅州 512021）

金櫻子（Rosa laevigata Michx）屬薔薇科薔薇屬植物，又名糖罐子、野石榴等.在歷代醫(yī)書如《雷公炮炙論》《本草綱目》等均有記載.其果實(shí)、花、葉和根均入藥［1］.金櫻子是原國(guó)家衛(wèi)生部公布的88種藥食同源資源之一，廣泛分布于我國(guó)廣東、廣西等南方諸?。?-4］，相關(guān)深加工產(chǎn)品符合現(xiàn)代健康理念，開發(fā)價(jià)值高.

圖1 金櫻子花朵（A）及果實(shí)（B）

高血脂是一種嚴(yán)重危害人類生命健康和質(zhì)量的熱能代謝紊亂病，是眾所周知的心腦血管疾病最為重要的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，可直接引起一些嚴(yán)重危害人體健康的疾病，如冠心病、心腦血管疾病等慢性疾病.權(quán)威數(shù)據(jù)顯示，在2002年以前我國(guó)高血脂的患病率為18.6%，大約1.6億人［5］.而到了2016年，中國(guó)成人血脂異常總體患病率高達(dá) 40.40%，接近全國(guó)人口的一小半，較2012年大幅提升［6-7］.傳統(tǒng)的他汀等西藥治療高血脂具有很大的副作用［8］，因此由傳統(tǒng)的金櫻子等藥食同源資源中尋找健康破解密碼，研制低副作用的天然降脂產(chǎn)品迫在眉睫，同時(shí)該類產(chǎn)品也具有廣闊的產(chǎn)業(yè)前景.

應(yīng)用超聲波輔助浸提等技術(shù)，從金櫻子中高效提取金櫻子多糖活性成分，深入研究不同提取條件對(duì)金櫻子多糖提取效率的影響.并以所提取的金櫻子多糖為主要原料，配伍符合食品加工規(guī)范的泡騰崩解劑、填充劑等輔料，設(shè)計(jì)制備金櫻子降脂泡騰片.并進(jìn)一步通過構(gòu)建高血脂動(dòng)物模型，有針對(duì)性的開展金櫻子多糖降脂動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，對(duì)金櫻子多糖降血脂效果進(jìn)行驗(yàn)證，為金櫻子天然降血脂產(chǎn)品開發(fā)提供一定借鑒.

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)試劑

金櫻子采自廣東韶關(guān)市曲江區(qū)大塘鎮(zhèn)附近山區(qū).健康昆明種小白鼠50只，3月齡，體重18～22 g，雌雄各半，由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供［SCXK（粵）2017-0092］；1.5%膽固醇、15%甘油三酯購(gòu)于上海化學(xué)試劑有限公司；洛伐他汀顆粒由廣東大森林連鎖藥店有限公司購(gòu)買；Sevage試劑（氯仿：異戊醇 =3:1混合搖勻）、淀粉漿（10%）和透析袋MD25(8 000-14 000)等材料購(gòu)于廣東韶關(guān)市新創(chuàng)意實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；甘露醇、檸檬酸、碳酸氫鈉、聚乙二醇6 000等常規(guī)試劑均購(gòu)于阿拉丁上海有限公司；總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）測(cè)定試劑盒購(gòu)于鄭州萬華生物技術(shù)有限公司.實(shí)驗(yàn)用水為蒸餾水.

1.2 儀器設(shè)備

800B型離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）；AL807系列溫度控制器（深圳市亞特克電子有限公司）；WAY-2S型數(shù)字阿貝折射儀（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；超聲波輔助浸提設(shè)備（榮匯，RHTQ-G）；艾康便攜式快速血脂分析儀；UV－1100紫外可見分光光度計(jì)（北京瑞利分析儀器公司）；TDP型單沖壓片機(jī)（上海天琪制藥機(jī)械廠）；崩解時(shí)限電測(cè)（江陰市康和機(jī)械制造有限責(zé)任公司）；PH-3C型測(cè)酸儀（北京中慧天誠(chéng)有限公司）；恒溫振蕩培養(yǎng)箱HZQ-X100（江蘇杰瑞爾電器有限公司）；HHY-78X-6A型片劑四用測(cè)定儀（北京恒奧德儀器儀表有限公司）；LC-QRJ01商用切片機(jī)（樂創(chuàng)科技公司）；臺(tái)式電鏡TM3030（日本日立公司）等.

1.3 金櫻子多糖提取純化

先將切片機(jī)的刀調(diào)到最大限度,將金櫻子送入,將切制后的金櫻子篩去絨毛,再倒入清水中淘洗沉去種核,撈出，40℃下恒溫烘干48 h.將烘干的金櫻子，在粉碎機(jī)上粉碎，制成金櫻子干粉，用40目篩子過篩，得篩選后的金櫻子干粉.加入乙醚浸泡6 h脫脂，去乙醚，自然揮干（或60℃下石油醚回流脫脂2h）.應(yīng)用經(jīng)預(yù)實(shí)驗(yàn)后確定質(zhì)量分?jǐn)?shù)的乙醇超聲波輔助浸提技術(shù)提取1次，脫黃酮，再用超聲波熱水（蒸餾水）輔助浸提3次，合并水提取液應(yīng)用懸浮式結(jié)晶法冷凍濃縮后，濃縮液以95%乙醇沉淀，沉淀加水溶解，采用較溫和的Sevage法（氯仿：異戊醇 =3∶1混合搖勻）脫游離蛋白.加入Sevage試劑后，置恒溫振蕩器中振蕩過夜，使蛋白質(zhì)充分沉淀，離心（3 000 r/min）分離.再將除去蛋白后的多糖溶液置透析袋中，蒸餾水流水透析48 h，每6～8 h更換1次蒸餾水，除去小分子雜質(zhì).再用乙醇洗滌沉淀3次、真空冷凍干燥后即得金櫻子純多糖粉末原料.

1.4 金櫻子降脂泡騰片制備

采用濕法制粒工藝：將潤(rùn)滑劑粉碎，過160目篩，與金櫻子多糖粉末原料與酸源、填充劑、堿源、矯味劑、黏合劑、發(fā)泡劑、崩解劑等其它輔料混合均勻，經(jīng)制粒（12目）、干燥（50±5℃）、整粒（14目）、壓片等工藝即得金櫻子降脂泡騰片，規(guī)格為50 mg/片.

1.5 小鼠喂養(yǎng)、給藥及血脂檢測(cè)

按文獻(xiàn)方法［9-10］配置高脂飼料，并進(jìn)行高血脂小鼠造模.造模后小鼠經(jīng)實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨即分為5組：空白對(duì)照組、西藥（洛伐他汀）對(duì)照組、金櫻子泡騰片低劑量組、金櫻子泡騰片中劑量組、金櫻子泡騰片高劑量組.每組10只，雌雄各半.分組后空白對(duì)照組喂以基礎(chǔ)飼料，自由飲水.西藥對(duì)照組除基礎(chǔ)飼料外，每天下午2點(diǎn)灌胃1片包洛伐他汀片（20 mg/片，搗爛水沖服）；金櫻子泡騰片低、中、高劑量組喂以基礎(chǔ)飼料外，每天下午2點(diǎn)灌胃金櫻子降脂泡騰片（50 mg/片，搗爛水沖服，低劑量組每天四分之一片，中劑量組每天半片，高劑量每天一片）.所有實(shí)驗(yàn)組均可自由飲水，連續(xù)兩周.

血脂測(cè)定前禁食不禁水12 h，斷頭取血，37℃溫水水浴1 h，3 500 r/min離心15 min，分離血清,用總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）試劑盒測(cè)定各組實(shí)驗(yàn)小鼠血清中脂質(zhì)情況.

2 結(jié)果與討論

2.1 金櫻子提取正交實(shí)驗(yàn)研究

為進(jìn)一步優(yōu)化金櫻子多糖提取工藝，本文采用四因素三水平正交試驗(yàn)法，確定時(shí)間、溫度、料液比、乙醇濃度，以確定最佳提取工藝.深入研究發(fā)現(xiàn)，四種因素對(duì)多糖提取率的影響程度依次為乙醇濃度＞料液比＞時(shí)間＞溫度.如表1實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)所示，當(dāng)提取溫度在95℃，提取時(shí)間為1 h，料液比為1/15，乙醇濃度為90%時(shí)，金櫻子多糖提取率最高，可達(dá)2.38%.

表1 金櫻子多糖提取工藝研究

2.2 金櫻子降脂泡騰片制備

感官評(píng)價(jià)、崩解時(shí)限、溶解性實(shí)驗(yàn)等實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，當(dāng)以所提取的金櫻子多糖為主要原料、以聚乙二醇6 000為潤(rùn)滑劑、以乳糖及甘露醇為填充劑、以檸檬酸為酸源、碳酸氫鈉為堿源、薄荷醇為矯味劑、黏合劑為淀粉漿（10%）、十二烷基硫酸鈉為發(fā)泡劑、微粉硅膠為崩解劑時(shí)，所制備金櫻子泡騰片在外觀、硬度、口感、溶解性，泡騰效果、崩解時(shí)限等方面具有較佳效果.經(jīng)深入研究，金櫻子降脂泡騰片優(yōu)化配方如下：金櫻子多糖19.05 g，檸檬酸6 g，乳糖8 g，甘露醇6 g，碳酸氫鈉5 g，聚乙二醇6 000用量為2.5 g，微粉硅膠1 g，十二烷基硫酸鈉0.15 g，薄荷醇0.3 g，羥丙基纖維素2 g（配成適當(dāng)水溶液），共制 1 000片，每片50 mg（如圖 2 所示）.

2.3 金櫻子降脂泡騰片降脂功效研究

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，造模后高血脂小鼠（空白對(duì)照組）TC、TG、LDL-C均維持較高水平（見表2），顯示高脂小鼠造模成功.本工作選用最典型的降脂西藥洛伐他汀作為陽(yáng)性對(duì)照藥物開展對(duì)比降脂研究.如表2中所示陽(yáng)性對(duì)照組數(shù)據(jù)，西藥陽(yáng)性對(duì)照組與空白對(duì)照組相比，其血清中TC、TG、LDL-C含量均顯著降低（P＜0.01，如空白對(duì)照組TC含量為5.51±0.28，而西藥陽(yáng)性對(duì)照組TC含量則為2.71±0.24，后者顯著低于前者），說明洛伐他汀降血脂效果顯著.

圖2 所制備金櫻子降脂泡騰片

表2 金櫻子降脂泡騰片（RLET）對(duì)高血脂實(shí)驗(yàn)小鼠血清中血脂水平的影響（-(-脂)±s）

進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示：金櫻子降脂泡騰片實(shí)驗(yàn)組（低、中、高）與空白對(duì)照組（造模后高血脂小鼠組）相比，其血清中TC、TG、LDL-C含量均呈現(xiàn)較顯著的下降趨勢(shì)，給藥的低、中、高劑量組之間的血清各項(xiàng)指標(biāo)也有顯著性差異（P＜0.05），并呈現(xiàn)一定的劑量效應(yīng)關(guān)系.但值得注意的是，金櫻子降脂泡騰片低、中、高劑量組相對(duì)西藥陽(yáng)性對(duì)照組，其降脂優(yōu)勢(shì)并不明顯.僅有高劑量組在TC、TG和LDL-C三項(xiàng)指標(biāo)表現(xiàn)上全面優(yōu)于西藥陽(yáng)性對(duì)照組（如LDL-C血清含量在RLET高劑量組為0.51±0.11，西藥陽(yáng)性對(duì)照組相應(yīng)數(shù)據(jù)為0.59±0.15，前者明顯優(yōu)于后者）.RLET低劑量組三項(xiàng)數(shù)據(jù)則全面輸給西藥陽(yáng)性對(duì)照組，顯示RLET給藥量在金櫻子降脂作用中也扮演重要角色.RLET中劑量組則在TC、TG兩項(xiàng)指標(biāo)上優(yōu)于西藥陽(yáng)性對(duì)照組（如TG分別是0.52±0.23（RLET中劑量組）和0.55±0.12（陽(yáng)性對(duì)照組）），但血清中LDL-C含量卻明顯高于西藥陽(yáng)性對(duì)照組.

上述數(shù)據(jù)顯示，所制備金櫻子降脂泡騰片已具有較全面的降脂功效，相對(duì)空白對(duì)照組，其TC、TG、LDLC三項(xiàng)指標(biāo)均顯著降低.且相對(duì)他汀類西藥，金櫻子降脂泡騰片作為藥食同源深加工產(chǎn)品，其在天然健康、低副作用等方面更具優(yōu)勢(shì).另一方面，金櫻子降脂泡騰片在降脂功效上還有待進(jìn)一步提升空間，有必要圍繞金櫻子降脂藥物劑型設(shè)計(jì)、降脂功效優(yōu)化及降脂機(jī)制等方面開展更深入的研究.

3 結(jié)論

針對(duì)我國(guó)成人血脂異?？傮w患病率高、傳統(tǒng)西藥治療副作用大等現(xiàn)實(shí)問題，應(yīng)用超聲波輔助浸提等技術(shù)，從金櫻子中高效提取金櫻子多糖活性成分，深入研究不同提取條件對(duì)金櫻子多糖提取效率的影響.以所提取的金櫻子多糖為主要原料，配伍符合食品加工規(guī)范的酸源、填充劑、潤(rùn)滑劑、矯味劑、發(fā)泡劑、崩解劑等輔料，成功制備金櫻子降脂泡騰片.并通過構(gòu)建高血脂動(dòng)物模型，有針對(duì)性的開展所制備金櫻子泡騰片降脂驗(yàn)證實(shí)驗(yàn).實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，所制備金櫻子降脂泡騰片已具有較全面的降脂功效，相對(duì)空白對(duì)照組，其血清中TC、TG、LDL-C三項(xiàng)指標(biāo)均顯著降低.與臨床上應(yīng)用廣泛的他汀類降脂藥相比，金櫻子原料天然健康，價(jià)廉易得，使其在價(jià)格、不良反應(yīng)或副作用等方面更具優(yōu)勢(shì).研究組將圍繞金櫻子降脂藥物劑型設(shè)計(jì)、降脂功效提升及降脂機(jī)制等方面開展更深入的研究，相關(guān)研究有望為金櫻子天然降血脂產(chǎn)品開發(fā)提供一定借鑒.